Name: 인체 배설물 미생물에 대한 중재 식이요법의 효과를 추정하는 시험관 내 배치 배양 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: 배우세요 인체 배설물 미생물에 대한 중재 식이요법의 효과를 추정하는 시험관 내 배치 배양 모델을 활용한 장내 미생물 연구 방법을. 이 프로토콜은 장 건강 개입 효과를 평가하는 데 유용한 도구입니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

저자는 감사하게도 당뇨병, 비만 및 물질 대사 및 임상 및 번역 과학 센터, 의학의 웨이크 포레스트 학교, 국방부 자금 조달 (보조금 번호: W81XWH-1-0118)의 자금 지원을 인정합니다. 커밋 글렌 필립스 II 심장 혈관 의학의 의자; 건강의 국가 학회는 클로드 D. 페퍼 이전 미국인 센터 자금 (P30AG12232에 의해 자금); R01AG18915; R01DK114224 및 임상 및 번역 과학 센터 (UL1TR001420에 의해 투자 된 임상 연구 단위), 또한 고맙게도 인정. 우리는 또한 대변 샘플을 제공 해 자원 봉사자에 대 한 감사, 그리고 그들의 기술 적인 도움에 대 한 우리의 다른 실험실 구성원이 이 실험 동안.

주의: 적절한 재료 안전 데이터 시트를 참조하고 적절한 생물 안전 수준 2(BSL-2) 교육에 대한 지침과 지침을 따르십시오. 표준 생물 안전 규칙에 따라 모든 배양 단계를 따르고 무균 조건을 사용하여 BSL-2 캐비닛을 사용합니다. 게다가, 다른 모형 및 인간 적인 과목에서 배설물 견본은 미생물 매개 질병 퍼짐의 잠재적인 리스크가 있을 수 있습니다. 부상과 감염이 발생하면 즉시 의료 지원을 받으십시오. 또한, 인간과 동물의 대변 샘플의 사용은 기관 윤리위원회를 통해 승인되어야하며 샘플 및 주제 정보를 사용하는 프로토콜을 준수해야합니다.
1. 문화매체 준비
<ol><li>
문화 매체 준비, 9가지 유형의 재고 솔루션 준비
	<ol>
<li>용액 A (1,000 mL): 염화나트륨 5.4 g (NaCl), 2.7 g의 칼륨 이수소 인산염 (KH2PO4),0.16 g의 염화칼슘 디하이드레이트 (CaCl2·2H2O), 0.12 g의 염화나트륨 헥사하이드레이트(MgCl 2Cl) ·6H2O), 망간 염화물 테트라하이드레이트 0.06 g(MnCl2·4H 2O), 코발트염화헥사하이드레이트 0.06 g(CoCl 2·6H2O),황산암모늄 5.4 g(NH4)2SO4 1,000 mL에 총 볼륨을 만들기 위해 탈이온 수에서.</li>
		<li>용액 B (1,000 mL): 탈이온수에서 2.7 g의 칼륨 수소 인산염 (K2HPO4)을 용해하여 총 부피를 1000 mL로 만듭니다.</li>
		<li>미량 미네랄 용액 (1,000 mL): 디틸렌디아민 테트라 아세테이트 이수산염 500 mg (Na2EDTA), 철 황산염 헵타하이드레이트 200 mg (FeSO4·7H 2O), 10 mg의 황산테 헵타하이드레이트(ZnSO4) ·7H2O), 망간 3 mg(II) 염화물 테트라하이드레이트(MnCl2·4H 2O), 인산 30 mg(H3 PO4),CoCl2·6H 2O, 컵릭 염화물 이수산 1mg(CuCl2) ·2H2O), 2 mg의 니켈(II) 염화물 헥사하이드레이트(NiCl 2·6H 2O) 및 몰리브데이트 나트륨 3 mg(Na2MoO4·2H 2O)을 탈이온수에서 1,000 mL로 총 부피를 만든다. 참고: 이 솔루션은 빛에 민감하므로 어두운 / 검은 색 또는 알루미늄 포장 튜브 / 병에 보관해야합니다.</li>
		<li>수용성 비타민 용액 (1,000 mL): 티아민 염산 100 mg (티아민-HCl), D-판토테닉 산 100 mg, 니아신 100 mg, 피리독신 100 mg, P-aminobenzoic 산 5 mg, 비타민 B12 0.25 mg을 용해하십시오. 1,000 mL.</li>
		<li>엽산: 비오틴 용액 (1,000 mL): 엽산 10 mg, D-비오틴 2 mg, 중탄산 암모늄 100 mg(NH4HCO 3)을 탈이온수에 용해하여 총 부피를 1,000 mL로 만듭니다.</li>
		<li>리보플라빈 용액(1,000 mL): 리보플라빈 10 mg을 5mM HEPES(1.19 g/L) 용액에 녹여 총 부피를 1,000mL로 만듭니다.</li>
		<li>헤민 용액 (10 mL): 10 mMM 수산화 나트륨 (NaOH) (0.4 g / L) 용액에 헤민 5,000 mg을 용해하여 총 부피를 10 mL로 만듭니다.</li>
		<li>짧은 사슬 지방산 혼합 (10 mL): N-valerate의 2.5 mL, 이소발레의 2.5 mL, 이소부티레이트 2.5 mL 및 2.5 mL: DL-α-메틸부티레이트. 참고: 이 솔루션은 냄새와 연기를 피하기 위해 연기 후드에 사용하는 것이 좋습니다.</li>
		<li>Resazurin (1,000 mL): 탈이온수에서 레사주린 1 g을 녹이고 총 부피를 1,000 mL로 만듭니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
시험관 내 혐기성 발효에 사용되는 배지
	<ol>
<li>이 매체를 준비하려면 용액 A 330 mL, 용액 B 330 mL, 미량 미네랄 용액 10 mL, 수용성 비타민 용액 20 mL, 엽산 5 mL : 비오틴 용액, 5 mL의 리보플라빈 용액을 혼합하십시오. 헤민 용액의 2.5 mL, 짧은 사슬 지방산 혼합의 0.4 mL, Resazurin의 1 mL, 효모 추출물 0.5 g, 탄산 나트륨 4 g (Na2CO3),0.5 g의 시스테인 HCl-H2O, 및 0.5 g의 트립티케이스를 첨가하고, 증류수 296.1 mL을 첨가한다.</li>
		<li>pH를 확인하고 7.0 정도인지 확인하십시오( 그렇지 않은 경우)는 1 N HCl 또는 1 N NaOH로 pH를 조정합니다. 무균 워크스테이션 하에서 병 필터를 사용하여 매체를 진공 여과하여 살균합니다.</li>
		<li>또는 모든 성분(비타민 및 헤민 용액 제외)과 오토클레이브를 121°C에서 20분간 혼합하고 실온으로 식힙니다. 동시에 0.22 μm 멤브레인 필터를 사용하여 비타민과 헤민 용액을 필터 살균하고 분주하기 전에 오토클레이브 및 냉각 매체에 첨가하십시오.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 혐기성 챔버 및 필수 재료의 준비
<ol><li>실험 시작 최소 48시간 전에 혐기성 챔버 내부의 발효 실험에 필요한 모든 재료, 용액 및 도구를 보관하여 완충제/용액의 공구 및 수용성 산소와 관련된 잔류 산소가 제거하고 모든 재료는 설정 혐기성 조건에 적응된다. 참고: 혐기성 챔버 내부에 필요한 물질 (48 시간 전에 실험을 시작): (i) 발효 매체; (ii) 혐기성 용액 (섹션 4.1에 따라 제조), (iii) 소용돌이, (iv) 계량 저울, (v) 모슬린 치즈 천, (vii) 깔때기, (viii) 1.5, 2.0, 15, 50 mL 튜브, (ix) 파이프터 (2, 20, 200 및 1,000 μt) 파이펫 및 피펫 (5 및 10 mL), (xi) 종이 조직, (xii) 마커, (xiii) 튜브는 다른 튜브, (xiv) 폐기물 상자, (xv)O2 표시기 및 (xvi) 70 % 에탄올 스프레이 병 (소독제).</li>
</ol>3. 튜브 및 섬유의 준비
<ol><li>무게 300 mg의 이눌린을 50 mL 튜브로 이송한 후 혐기성 챔버에 이미 제조 및 저장된 발효매체 26 mL의 무균 첨가를 하였다. 각 대변 샘플 유형 및 실험 튜브(시험중인 화합물의 수에 따라)에 대해 하나의 빈 튜브를 삼중항으로 준비합니다.</li>
	<li>발효 실험을 시작하기 전에 샘플의 수화를 허용하기 위해 약 24 시간 동안 혐기성 챔버 내부에이 튜브를 둡니다. 접종 시 튜브 온도가 37 °C인지 확인하고 혐기성 챔버 내에 둘러싸인 인큐베이터에 튜브를 가져 오십시오.</li>
</ol>4. 접종준비
<ol><li>혐기성 희석 액 (발효 실험 전에 적어도 48 시간): NaCl 5 g, 포도당 2 g 및 시스테인-HCl 0.3 g을 탈이온수에서 용해시키고 총 부피를 1,000 mL로 만듭니다. Autoclave 및 사용 하기 전에 적어도 48 시간 혐 기성 챔버 안에 저장.</li>
	<li>대변 접종 준비 (발효 실험 당일): 50 mL 원추형 튜브에 신선한 배설물 샘플 5g을 계량하고, 최종 부피 50 mL (1:10 w/v)에 혐기성 희석 액을 추가하고 15 분 동안 또는 완전히 균질화 될 때까지 소용돌이를 추가하십시오. 균질화된 혼합물을 4층의 멸균 치즈클로스(오토클레이브)를 통해 걸링하고 매체를 함유한 튜브에서 즉시 접종하는 데 사용한다. 참고: 실험 목적이 일반적으로 병에 걸린 배설물 microbiota 대 전반적인 건강에 주어진 화합물 /성분의 효과를 비교하는 경우 과목의 그룹에서 배설물 샘플풀 수 있습니다.</li>
</ol>5. 발효 및 샘플링
<ol><li>섹션 4.2에 따라 튜브를 준비하고 희석 및 여과 된 배설물 접종4 mL로 빈 / 제어 및 실험 튜브를 접종하십시오. 혐기성 챔버 내부의 37°C에서 접종된 튜브를 배양한다. 섬유와 접종을 다시 중단부드럽게 반전하여 매 시간 마다 한 번 튜브를 흔들어.</li>
	<li>필요에 따라 매시간 0, 3, 6, 9 및 24h로 매시간 시료를 수집하여 2 mL aliquot 샘플을 각각의 발효 튜브로부터 2 mL 튜브로 꺼내어 발효시.</li>
	<li>실험실 pH 미터를 사용하여 aliquots의 pH를 측정합니다 (샘플에 pH 전극을 직접 삽입하여); 나머지 샘플을 4°C에서 10분 동안 14,000 x g에서 원심분리합니다. 액체 질소에 상류층과 펠릿을 즉시 동결시키고, 스냅 동결 후, 상층부(scfa) 분석을 위해 상급체를 저장하고-80°C에서 미생물군유전체 분석을 위한 펠릿을 저장한다.</li>
</ol>6. 짧은 사슬 지방산 (SCFA) 및 젖산 정량화
참고: 미생물군유전체 배양의 상급제에서의 SCFA 및 락테이트는13,14,15,16의 다른 곳에 상세한 방법에 따라 정확하게 측정될 수 있다.
<ol><li>간단히, 얼음에 제어 및 처리 샘플에서 섹션 5에서 얻은 스냅 냉동 초자연자를 해동하고 얼음에 대한 모든 추가 처리 단계를 수행합니다. 0.45 μm 멤브레인 필터를 통해 상판체를 걸러내고 무세포 샘플을 사용하여 HPX-87H 컬럼이 장착된 210nm의 DAD 검출기를 사용하여 HPLC 시스템을 사용하여 SCFA 및 젖산의 농도를 측정합니다. 각 샘플에 대해 10 μL의 주입 부피를 사용하고 H2SO4 (0.005 N)를 사용하여 35 °C에서 0.6 mL / min의 유량으로 컬럼을 용출하십시오.</li>
</ol>7. 배설물 미생물군유전체 분석
참고: 7,13,14,17의 방법 및 파이프라인에 따라 미생물군유전체 분석을 수행한다.
<ol><li>간략하게, 배설물 DNA 추출 키트(13)를 이용하여 약 200mg의 배설물 슬러리 펠릿으로부터 게놈 DNA를 추출한다.</li>
	<li>13에 기재된 방법에 따라 바코드된 프라이머를 이용하여 세균 16S rRNA 유전자의 초가변 영역을 증폭하고, 지구 미생물군유전체 프로젝트 프로토콜(18)에 기재된 바와 같은 프라이머 서열을 사용한다.</li>
	<li>자기 정제 비드로 결과 앰플리콘을 정화하고 Picogreen 또는 동등한 방법으로 정량화. 정제된 PCR 제품을 시퀀서(13)에 동등한어금니 농도 및 서열로 풀.</li>
	<li>다중화, 품질 필터링 및 클러스터링, 분류학적 할당 및 희귀도, 미생물 생태학(QIIME) 소프트웨어에 대한 정량적 통찰력을 사용하여 다운스트림 분석을 위한 결과 시퀀스를 처리합니다. 카포라소 외19.</li>
</ol>

<ol><li>Shreiner, A. B., Kao, J. Y., Young, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gut+microbiome+in+health+and+in+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">The gut microbiome in health and in disease.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 31 (1), 69-75 (2015).</li>
<li>Xu, Z., Knight, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+effects+on+human+gut+microbiome+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Dietary effects on human gut microbiome diversity.</a> British Journal of Nutrition. 113, 1-5 (2015).</li>
<li>Jiang, C., Li, G., Huang, P., Liu, Z., Zhao, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gut+microbiota+and+Alzheimer%E2%80%99s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Alzheimers+Disease%22%5BJournal%5D)">The gut microbiota and Alzheimer’s disease.</a> Journal of Alzheimers Disease. 58 (1), 1-15 (2017).</li>
<li>Clemente, J. C., Ursell, L. K., Parfrey, L. W., Knight, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+the+gut+microbiota+on+human+health%3A+an+integrative+view%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+Cell%22%5BJournal%5D)">The impact of the gut microbiota on human health: an integrative view.</a> The Journal Cell. 148 (6), 1258-1270 (2012).</li>
<li>Yadav, H., Jain, S., Marotta, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probiotics+mediated+modulation+of+gut+flora+might+be+biotherapeutical+approach+obesity+and+type+2+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolomics+%3A+Open+Access%22%5BJournal%5D)">Probiotics mediated modulation of gut flora might be biotherapeutical approach obesity and type 2 diabetes.</a> Metabolomics : Open Access. 1 (3), 1-3 (2011).</li>
<li>Ahmadi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+Polysaccharides+in+the+Amelioration+of+Gut+Microbiome+Dysbiosis+and+Metabolic+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Obesity+and+Control+Theries%3A+Open+Access%22%5BJournal%5D)">Dietary Polysaccharides in the Amelioration of Gut Microbiome Dysbiosis and Metabolic Diseases.</a> Obesity and Control Theries: Open Access. 4 (3), (2017).</li>
<li>Nagpal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity-Linked+Gut+Microbiome+Dysbiosis+Associated+with+Derangements+in+Gut+Permeability+and+Intestinal+Cellular+Homeostasis+Independent+of+Diet%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Diabetes+Research%22%5BJournal%5D)">Obesity-Linked Gut Microbiome Dysbiosis Associated with Derangements in Gut Permeability and Intestinal Cellular Homeostasis Independent of Diet.</a> Journal of Diabetes Research. , 1-9 (2018).</li>
<li>Paul, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influences+of+diet+and+the+gut+microbiome+on+epigenetic+modulation+in+cancer+and+other+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Epigenetics%22%5BJournal%5D)">Influences of diet and the gut microbiome on epigenetic modulation in cancer and other diseases.</a> Journal of Clinical Epigenetics. 7 (1), 112(2015).</li>
<li>O’mahony, S., Clarke, G., Borre, Y., Dinan, T., Cryan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+tryptophan+metabolism+and+the+brain-gut-microbiome+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Serotonin tryptophan metabolism and the brain-gut-microbiome axis.</a> Journal of Behavioural Brain Research. 277, 32-48 (2015).</li>
<li>Sharon, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specialized+metabolites+from+the+microbiome+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Specialized metabolites from the microbiome in health and disease.</a> Journal of Cell Metabolism. 20 (5), 719-730 (2014).</li>
<li>Faber, T. A., Bauer, L. L., Price, N. P., Hopkins, A. C., Fahey, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+digestion+and+fermentation+characteristics+of+temulose+molasses%2C+a+coproduct+of+fiberboard+production%2C+and+select+temulose+fractions+using+canine+fecal+inoculum%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">In vitro digestion and fermentation characteristics of temulose molasses, a coproduct of fiberboard production, and select temulose fractions using canine fecal inoculum.</a> Journal of Agricultural Food Chemistry. 59 (5), 1847-1853 (2011).</li>
<li>Bourquin, L. D., Titgemeyer, E. C., Fahey, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vegetable+fiber+fermentation+by+human+fecal+bacteria%3A+cell+wall+polysaccharide+disappearance+and+short-chain+fatty+acid+production+during+in+vitro+fermentation+and+water-holding+capacity+of+unfermented+residues%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Vegetable fiber fermentation by human fecal bacteria: cell wall polysaccharide disappearance and short-chain fatty acid production during in vitro fermentation and water-holding capacity of unfermented residues.</a> Journal of Nutrition. 123 (5), 860-869 (1993).</li>
<li>Nagpal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human-origin+probiotic+cocktail+increases+short-chain+fatty+acid+production+via+modulation+of+mice+and+human+gut+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Human-origin probiotic cocktail increases short-chain fatty acid production via modulation of mice and human gut microbiome.</a> Scientific Reports. 8 (1), 12649(2018).</li>
<li>Nagpal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+microbiome+signatures+and+short-chain+fatty+acids+in+mouse%2C+rat%2C+non-human+primate+and+human+feces%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Comparative microbiome signatures and short-chain fatty acids in mouse, rat, non-human primate and human feces.</a> Frontiers in Microbiology. 9, 2897(2018).</li>
<li>Thangamani, S., Guinan, J., Wang, S., Yadav, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic-induced+decreases+in+the+levels+of+microbial-derived+short-chain+fatty+acids+promote+gastrointestinal+colonization+of+Candida+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Antibiotic-induced decreases in the levels of microbial-derived short-chain fatty acids promote gastrointestinal colonization of Candida albicans.</a> bioRxiv. , 428474(2018).</li>
<li>Ahmadi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prebiotics+from+acorn+and+sago+prevent+high-fat+diet-induced+insulin+resistance+via+microbiome-gut-brain+axis+modulation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Nutritional+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Prebiotics from acorn and sago prevent high-fat diet-induced insulin resistance via microbiome-gut-brain axis modulation.</a> The Journal of Nutritional Biochemistry. , (2019).</li>
<li>Nagpal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+Microbiome+Composition+in+Non-human+Primates+Consuming+a+Western+or+Mediterranean+Diet%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Gut Microbiome Composition in Non-human Primates Consuming a Western or Mediterranean Diet.</a> Frontiers in Nutrition. 5, 28(2018).</li>
<li>Caporaso, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultra-high-throughput+microbial+community+analysis+on+the+Illumina+HiSeq+and+MiSeq+platforms%5BTitle%5D)+AND+%22ISME+Journal%22%5BJournal%5D)">Ultra-high-throughput microbial community analysis on the Illumina HiSeq and MiSeq platforms.</a> ISME Journal. 6 (8), 1621-1624 (2012).</li>
<li>Caporaso, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((QIIME+allows+analysis+of+high-throughput+community+sequencing+data%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">QIIME allows analysis of high-throughput community sequencing data.</a> Nature Methods. 7 (5), 335-336 (2010).</li>
<li>Garcia-Villalba, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+method+for+gas+chromatography-mass+spectrometry+analysis+of+short-chain+fatty+acids+in+faecal+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Seperation+Science%22%5BJournal%5D)">Alternative method for gas chromatography-mass spectrometry analysis of short-chain fatty acids in faecal samples.</a> Journal of Seperation Science. 35 (15), 1906-1913 (2012).</li>
<li>Lee, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frozen+vs+Fresh+Fecal+Microbiota+Transplantation+and+Clinical+Resolution+of+Diarrhea+in+Patients+With+Recurrent+Clostridium+difficile+Infection%3A+A+Randomized+Clinical+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Frozen vs Fresh Fecal Microbiota Transplantation and Clinical Resolution of Diarrhea in Patients With Recurrent Clostridium difficile Infection: A Randomized Clinical Trial.</a> JAMA. 315 (2), 142-149 (2016).</li>
<li>Chen, M. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+fermentation+of+xylooligosaccharides+produced+from+Miscanthus%C3%97+giganteus+by+human+fecal+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">In vitro fermentation of xylooligosaccharides produced from Miscanthus× giganteus by human fecal microbiota.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 64 (1), 262-267 (2015).</li>
<li>Cook, S., Sellin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+chain+fatty+acids+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Alimentary+Pharmacology+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Short chain fatty acids in health and disease.</a> Alimentary Pharmacology & Therapeutics. 12 (6), 499-507 (1998).</li>
<li>Rastelli, M., Knauf, C., Cani, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbes+and+health%3A+a+focus+on+the+mechanisms+linking+microbes%2C+obesity%2C+and+related+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Obesity%22%5BJournal%5D)">Gut microbes and health: a focus on the mechanisms linking microbes, obesity, and related disorders.</a> Obesity. 26 (5), 792-800 (2018).</li>
<li>Zou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiber-mediated+nourishment+of+gut+microbiota+protects+against+diet-induced+obesity+by+restoring+IL-22-mediated+colonic+health%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+%26+Microbe%22%5BJournal%5D)">Fiber-mediated nourishment of gut microbiota protects against diet-induced obesity by restoring IL-22-mediated colonic health.</a> Cell Host & Microbe. 23 (1), e44 41-53 (2018).</li>
<li>Dinan, T. G., Cryan, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut%E2%80%93brain+axis+in+2016%3A+Brain%E2%80%93gut%E2%80%93microbiota+axis%E2%80%94mood%2C+metabolism+and+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+%26+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Gut–brain axis in 2016: Brain–gut–microbiota axis—mood, metabolism and behaviour.</a> Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. 14 (2), 69(2017).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

여기에 제시 된 시험관 내 배설물 슬러리 발효 모델은 인간 배설물 미생물의 조성에 대한 다른 기질 및 미생물 균주 (예를 들어, 프리 바이오틱스 및 프로바이오틱스)의 효과를 근사화하는 간단한 단일 배치 모델입니다. 대변 pH 및 SCFAs 수준의 신진 대사 활동. 본 명세서에 제시된 결과는 이눌린의 접종이 배설물 pH를 감소시키고 비처리된 배설물 미생물 배양에 비해 이눌린 처리된 배설물시편에서 SCFA 및 젖산의 수준을 현저하게 증가시킨다는 것을 입증한다(도 1). 또한, 장내 미생물 시그니처는 또한 이눌린 처리 및 미처리 샘플 간에 상이한 것으로 보인다(도2 및 도3). 이 데이터는 이 시스템이 배설물 미생물군유전체의 다양성과 조성뿐만 아니라 대사 활동에 대한 이눌린의 효과를 어떻게 반영할 수 있는지를 보여줍니다. 또한, 특정 실험 목표 및 가설에 따라, 다른 요인의 ...

인간 미생물은 박테리아, 고고학, 바이러스 및 진핵 미생물1로구성된 복잡한 커뮤니티로, 인체내외적으로 서식합니다. 최근 증거는 비만, 당뇨병을 포함한 다양한 인간 질병에서 창자 미생물과 장내 미생물군유전체 (인간 위장관에서 발견되는 미생물및 유전자의 전체 수집)의 근본적인 역할을 확립했습니다. 심혈관 질환,암 1,2,3. 또한, 우리의 창자에 살고있는 미생물은 크게 우리의 건강에 영향을 미치는 대사 산물의 넓은 스펙트럼을 생산하고 또한 여러 질병의 병리 생리학뿐만아니라 다양한 대사 기능에 기여할 수 4, 5.이 창자 미생물 집단의 구성 및 기능에 있는 이상한 변경 (섭동)은 일반적으로 "창자 dysbiosis"로 불거지됩니다. Dysbiosis는 일반적으로 호스트의 건강에 해로운 상태와 연관되고 그러므로 호스트의 건강한 통제 상태와 관련되었던 정상 (정규성) 미생물 공동체에서 분화될 수 있습니다. 창자 미생물 군비 병의 특정 패턴은 종종 다양한질병1, 2,3,6,7에서발견된다.
소화되지 않은 음식, 특히 발효 가능한 탄수화물/섬유의 발효는 에너지를 생산할 뿐만 아니라 짧은 사슬 지방산(SCFA), 젖산, 포메이트, 이산화탄소, 메탄, 수소 및 에탄올6. 또한, 장내 미생물은 엽산, 비오틴, 트리메틸아민-N-산화물, 세로토닌,트립토판, 감마-아미노부티르산, 도파민, 노르에피네프린, 아세틸콜린, 히스타민, 데옥시콜산, 4-에틸페닐 황산염. 이것은 주로 여러 신체 과정, 대사 기능 및 후생 유전학 변화에 기여하는 호스트 미생물 틈새 시장 내의 본질적인대사 플럭스의 활용을 통해 발생 1,8,9, 10. 그러나, 이러한 미생물 제품에 대한 다양한 개입의 효과는 쉽고 효율적이며 재현 가능한 프로토콜의 부족으로 인해 불분명하거나 불분명하게 남아 있습니다. 인간의 창 자 microbiota 구성은 매우 복잡 하 고 다양 한 생태계, 따라서, 인간의 건강 및 질병 병 리에 그것의 역할에 대 한 많은 질문 여전히 대답 남아. 장내 미생물의 조성 및 대사 기능에 대한 많은 일반적인 장내 미생물 군비세포 조절제(예: 프로바이오틱스, 프리바이오틱스, 항생제, 대변 이식 및 감염)의 효과는 대체로 애매합니다. 또한, 생체 내에서 이러한 효과의 검사 및 검증이 어렵다, 특히 장내 미생물에 의해 생성 된 영양소와 대사 산물의 대부분이 흡수 또는 동시에 그리고 창자에 신속하게 폐기되기 때문에; 따라서, 생체 내에서 이들 대사산물(예를 들어, SCFA)의 생산, 양 및 처리를 측정하는 것은 여전히 실질적인 과제로 남아 있다. 실제로, 동물과 인간 피험자와 같은 생리학적 모델은 장내 미생물군유전체의 역할과 숙주 건강에 대한 변조를 결정하는 데 중요하지만, 이로 인해 다양한 유형의 미생물군유전체 변조기의 대규모 스크리닝에는 적합하지 않을 수 있습니다. 윤리적, 금전적 또는 시간적 제약을 가할 수 있습니다. 이를 위해, 체외 및/또는 생체 내 생체 내 모델, 체외에서 창 자 microbiota의 배양 하 고 다음 다른 microbiota 변조기와 개입, 시간 및 비용 절약 기회를 제공할 수 있습니다 및 따라서 예비 또는 대규모 스크리닝을 허용할 수 있습니다. 다양 한 구성 요소 (프로바이오틱스 등, prebiotics, 그리고 다른 내정간섭 화합물) 검사/배설물 microbiota 다양성에 미치는 영향을 예측, 구성 및 신진 대사 프로필. 장내 미생물군유전체의 이러한 생체외 및 생체내 시스템을 이용한 연구는 숙주 건강과 질병에 기여하는 숙주 미생물군유전체 상호작용에 대한 추가 이해를 촉진할 수 있으며, 또한 미생물군유전체를 표적으로 하는 새로운 치료법을 찾는 것으로 이어질 수 있다. 숙주 건강을 개선하고 다양한 질병을예방하고 치료합니다 1.
시험관 내 장 내 미생물 배양 시스템은 실제 장 조건을 진정으로 복제 할 수 없지만, 여러 실험실은 이러한 모델을 개발하기 위해 노력했으며, 그 중 일부는 어느 정도 실용적이라고 밝혀졌으며 성공적으로 사용되었습니다. 다른 목적을 가지고 있습니다. 최근 창자 모델 중 하나는 인간 장 미생물 생태계의 시뮬레이터, 전체 인간의 위장을 모방, 위 포함 하 여, 소장, 그리고 결 장의 다른 영역. 그러나 이러한 기술적으로 복잡한 모델은 전 세계 다른 연구 시설에서는 접근하지 못할 수 있습니다. 따라서, 미생물군유전체 변조기와 장내 미생물 군비유및 숙주 건강에 미치는 영향을 연구하는 실험실에 대해 비교적 간단하고 저렴하며 실용적인 새로운 대체 모델의 개발에 대한 중요한 필요성이 여전히 존재합니다. 따라서, 시험관내(또는 생체내) 배설물 미생물 배양 시스템의 사용은 이러한 내정간섭의 효과를 연구하는데 유용할 것이다11,12. 구체적으로, 장내 미생물의 다양성과 조성, 배설물 pH 및 SCFAs 및 락테이트를 포함한 미생물 대사산물의 주기적인 변화의 관점에서 미생물발효 능력에 대한 상이한 프리바이오틱스의 효과를 연구할 수 있다. 13.본 명세서에서, 이눌린(가장 널리 연구된 프리바이오틱 성분 중 하나)을 마이크로바이브로메 변조기의 예로 사용하여, 이러한 간단한 생체내 미생물 배치 배양 시스템의 단계별 프로토콜을 사용하여 이를 추정하는 데 그 사용을 입증하는 것으로 설명되어 있다. 대변 미생물 및 미생물 대사 산물의 변화는 미생물 군변기와 의한 개입에 따른다.

<table><tbody><tr><td>암모늄 바이카보네이트 (NH4HCO<>3)시</td><td>그마-알드리치</td><td>217255</td><td></td></tr><tr><td>황산 암모늄 (NH4)2SO4 </td><td>TGI</td><td>C2388</td><td>독성</td></tr><tr><td>염화칼슘 이수화물 (CaCl2&bull; 2H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3306</td><td>자극성</td></tr><tr><td>코발트 클로라이드 헥사하이드레이트 (CoCl2&bull; 6H2O)</td><td>시그마-알드리치</td><td>255599</td><td></td></tr><tr><td>염화구리 이수화물(CuCl2&bull; 2H2O)</td><td>아크로스 유기물</td><td>2063450000</td><td>독성, 자극성</td></tr><tr><td>시스테인-HCl</td><td>시그마-알드리치</td><td>C121800</td><td></td></tr><tr><td>D-비오틴</td><td>시그마-알드리치</td><td>B4501</td><td></td></tr><tr><td>D-판토텐산</td><td>Alfa Aesar</td><td>A16609</td><td></td></tr><tr><td>디소듐 에틸렌디아민테트라아세테이트 이수화물(Na2EDTA)</td><td>바이오라드</td><td>1610729</td><td></td></tr><tr><td>DL-&alpha;-methylbutyrate</td><td>시그마-알드리치</td><td>W271918</td><td></td></tr><tr><td>철 황산염 헵타하이드레이트 (FeSO4&bull; 7H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F8263</td><td>독성</td></tr><tr><td>엽산</td><td>Alfa Aesar</td><td>J62937</td><td></td></tr><tr><td>포도당</td><td>시그마-Aldrich</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>Hemin</td><td>시그마-Aldrich</td><td>H9039</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Alfa Aesar</td><td>A14777</td><td></td></tr><tr><td>이소부티레이트</td><td>Alfa Aesar</td><td>L04038</td><td></td></tr><tr><td>Isovalerate</td><td>Alfa Aesar</td><td>A18642</td><td></td></tr><tr><td>마그네슘 클로라이드 육수화물 (MgCl2&bull; 6H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>망간 클로라이드 테트라하이드레이트 (MnCl2&bull; 4H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221279</td><td></td></tr><tr><td>Niacin (Nicotinic acid)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N4126</td><td></td></tr><tr><td>Nickel(Ii) Chloride Hexahydrate (NiCl2&bull; 6H2O)</td><td>Alfa Aesar</td><td>A14366</td><td>독성</td></tr><tr><td>N-발레레이트</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>240370</td><td></td></tr><tr><td>P-아미노벤조산</td><td>MP 중국</td><td>102569</td><td>독성, 자극성</td></tr><tr><td>인산(H3PO4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5811</td><td></td></tr><tr><td>인산이수소칼륨(KH2PO4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5504</td><td></td></tr><tr><td>인산수소칼륨(K2HPO4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1551128</td><td></td></tr><tr><td>피리독신</td><td>Alfa Aesar</td><td>A12041</td><td></td></tr><tr><td>레사주린</td><td>시그마-알드리치</td><td>R7017</td><td></td></tr><tr><td>리보플라빈</td><td>알파 Aesar</td><td>A11764</td><td></td></tr><tr><td>탄산나트륨 (Na2CO3)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1613757</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨 (NaCl)</td><td>Fisher BioReagents</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>수산화나트륨 (NaOH)</td><td>Fisher Chemicals</td><td>S320</td><td></td></tr><tr><td>몰리브덴산나트륨 이수화물(Na2MoO4&bull; 2H2O)</td><td>아크로스 유기물</td><td>206375000</td><td></td></tr><tr><td>티아민 염산염(Thiamin-HCl)</td><td>아크로스 유기물</td><td>148991000</td><td></td></tr><tr><td>트립티카제</td><td>BD Biosciences</td><td>211921</td><td></td></tr><tr><td>비타민 B12</td><td>시그마-알드리치</td><td>V2876</td><td></td></tr><tr><td>효모 추출물</td><td>시그마-알드리치</td><td>70161</td><td></td></tr><tr><td>아연 황산염 헵타하이드레이트 (ZnSO4&bull; 7H2O)</td><td>시그마-알드리치</td><td>Z0251</td><td></td></tr><tr><td>0.22 &마이크로; m 멤브레인 필터</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>AMPure 자기 정화 구슬</td><td>Agencourt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터가 있는 혐기성 챔버</td><td>Forma 혐기성 시스템, Thermo Scientific, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>병 필터</td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cheesecloth</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Illumina MiSeq 시퀀서</td><td>Miseq 시약 키트 v3</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pH 측정기</td><td></td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>Qiagen, PowerFecal, 키트</td>, <td>Qiagen</td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>QIIME(Quantitative Insights into Microbial Ecology), 소프트웨어</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>, Qubit-3, 형광측정기</td><td>, InVitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>, Vortex</td><td>, Thermoscientific</td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>Waters-2695, Alliance, HPLC, 시스템, Waters</td><td>Corporation</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

인체 배설물 미생물에 대한 중재 식이요법의 효과를 추정하는 시험관 내 배치 배양 모델

An In Vitro Batch-culture Model to Estimate the Effects of Interventional Regimens on Human Fecal Microbiota

몇몇 인간적인 질병에 있는 창자 microbiome의 새로운 역할은 새로운 공구, 기술 및 기술의 돌파구를 요구합니다. 이러한 개선은 인간의 건강 혜택에 대 한 미생물 계전체 변조기의 활용을 해독 하는 데 필요한. 그러나, 미생물군유전체 변조를 검증하고 관련 건강상의 이점을 예측하기 위해 변조기의 대규모 스크리닝 및 최적화는 많은 수의 동물 및/또는 인간 피험자의 필요성으로 인해 실질적으로 어려울 수 있다. 이를 위해, 시험관내 또는 생체외 모델은 미생물군유전체 변조기의 예비 스크리닝을 용이하게 할 수 있다. 본 명세서에서, 프로바이오틱스, 프리바이오틱스 및 기타 식품 성분을 포함한 장내 미생물 군비암 변조기의 다양한 개입의 효과를 조사하는데 사용될 수 있는 생체내 배설물 미생물 배양 시스템을 최적화및 입증하였으며, 이외에도 건강 기능 식품 및 약물, 인간의 창 자 microbiota의 다양성과 구성에. 가장 널리 연구된 프리바이오틱 화합물 및 미생물군유전체 변조기 중 하나인 이눌린(Inulin)은 건강한 배설물 미생물 성분과 배설물 pH 및 유기산의 배설물 수준과 같은 대사 활동에 미치는 영향을 조사하기 위해 여기에 사용됩니다. 젖산 및 짧은 사슬 지방산을 포함 하 여 (SCFAs). 이 프로토콜은 배설물 미생물 프로필에 대한 변조기의 다양한 개입의 효과를 추정하고 건강에 미치는 영향을 예측하는 연구에 유용할 수 있습니다.

이 프로토콜은 특정 프리바이오틱(즉, 대변 pH의 변화 및 건강한 인간 피험자의 대변에서 젖산 및 SCFA의 농도 측면에서 미생물 구성 및 대사 활동에 대한 이눌린)의 효과를 입증하는 데 사용됩니다. 이눌린으로 치료 후 다른 시간 포인트). 배설물 pH, 젖산 및 SCFA의배설물 수준(그림 1), 및 미생물 구성 (그림2 및 그림3)은 이눌린유무에 관계없이 배양의 0(baseline), 9 및 24h의 배양에서 측정된다. 결과는 배설물 microbiota 조성물 및 그것의 신진 대사 활동이 이눌린 처리의 유무에 관계없이 시험관 내 발효 도중 변조되는 방법을 보여줍니다.
<img alt="Figure 1" ...

이 프로토콜은 인체 배설물 미생물의 체외 배치 배양 발효 시스템을 설명하며, 이눌린(잘 알려진 프리바이오틱 및 가장 널리 연구된 미생물 변조기 중 하나)을 사용하여 특정 한 효과의 효과를 추정하는 데 이 시스템의 사용을 입증합니다. 대변 미생물 구성 및 대사 활동에 대한 개입.

The emerging role of the gut microbiome in several human diseases demands a breakthrough of new tools, techniques and technologies. Such improvements are ...

다양한 인간 질환에서 장 내 미생물군유전체의 새로운 역할을 고려할 때, 프로바이오틱스, 프리바이오틱스, 다이어트 및 약물과 같은 여러 장내 미생물군유전체 변조기는 장내 미생물군유전체 관련 건강 질환을 개량하는 데 도움이 될 수 있습니다. 그러나 빠르고 저렴한 선별 시스템은 이러한 장내 미생물군유전체 변조기의 효과를 예측할 수 없지만, 이 시스템은 특정 내정간섭이 궁극적으로 숙주 건강에 영향을 미칠 수 있는 창자 미생물군유전체에 어떤 영향을 미칠 수 있는지 예측할 만큼 간단합니다. 이 프로토콜은 창자 미생물군유전체 변조기와 미생물및 숙주 건강에 미치는 영향을 조사하는 실험실에서 간단하고 저렴하며 실용적입니다.무균 및 혐기성 조건의 유지 보수는이 실험에 매우 중요합니다. 또한 배설물 표본은 수집 시 즉시 새롭게 사용해야 합니다. 그렇지 않으면 실험이 나중에 계획되면 주변 온도와 공기에 노출되지 않고 수집 시 즉시 마이너스 80에 샘플을 저장해야합니다.aliquot 준비 및 파이펫 팅 중 정확도를 처리하는 것도 정확성과 재현성을 유지하는 데 중요합니다. 낮에는 12시간 미만이 소요됩니다. 24시간 안에 샘플을 필요로 하는 경우 하룻밤 사이에 문화를 구축할 수 있습니다.그런 다음, 짧은 사슬 지방산과 미생물군유전체 결정의 뒤를 따랐다. 이 과정은 두 위대한 유니 학생에 의해 입증 될 것이다, 쇼코 아마디와 라비나 마날리 내 실험실에서. 연기 후드 아래 발효 매체를 준비하려면 자석 혼합물의 시약 병에, 혼합 용액 A, 용액 B, 미량 미네랄 용액, 수용성 비타민 용액, 엽산 비오틴 용액, 리보플라빈 용액, 헤민 용액, 짧은 사슬 지방산 믹스 및 레사쥐린.그런 다음 병 효모 추출물, 탄산 나트륨, 시스테인 염산염 모노 하이드레이트 및 트립티케이스에 넣습니다. 증류수 296.1 밀리리터를 추가하고, 일반 염산염 또는 수산화 나트륨으로 pH를 조정하여 약 7.0이 되도록 합니다. 비커를 무균 워크스테이션으로 옮기고, 0.22 마이크로미터의 모공 크기가 있는 진공 필터를 사용하여 멸균을 위해 미디어를 필터링합니다.1리터 혐기성 희석 액액을 준비하려면 염화 나트륨 5그램, 포도당 2그램, 이온화 물에 시스테인 염산염 모노하이드레이트 0.3그램을 녹입니다. 시약 병을 섭씨 121.1도에서 15분간 오토클레이브하고 혐기성 챔버 안에 보관합니다. 발효 실험이 시작되기 전에 혐기성 챔버 내부의 발효 실험에 필요한 모든 재료, 솔루션 및 도구를 최소 48시간 동안 유지하여 잔류산소가 제거되도록 합니다.발효 실험 전에 적어도 24 시간, 무게 300 이눌린의 밀리 그램, 그리고 50 밀리 리터 튜브로 전송, 다음 혐기성 챔버 내부에 배치됩니다. 26 밀리리터의 멸균 발효 매체를 튜브에 넣고 소용돌이를 섞어 넣습니다. 약 24시간 동안 섬유질을 수분하게 하십시오.발효 실험의 날은 대변 접종을 준비합니다. 첫째, 50 밀리리터 원모 튜브에 신선한 배설물 샘플 5 그램의 무게를 측정합니다. 튜브에 혐기성 희석 용액을 추가하여 최종 50 밀리리터에 도달합니다.15 분 동안 또는 완전히 균질화 될 때까지 소용돌이. 혐기성 챔버 내부의 섭씨 37도에서 접종 된 튜브를 유지하고 섬유와 접종을 다시 중단하기 위해 매 시간마다 부드럽게 반전하십시오. 3, 6, 9 또는 24 시간 후에, 발효 된 매체의 적당한 양을 꺼내고, 4섭씨에서 10 분 동안 14, 000 배 g에서 샘플을 원심 분리합니다.즉시 액체 질소에 상체와 펠릿을 동결, 다음 스냅 동결 후, 짧은 사슬 지방산 분석을위한 상체를 저장하고, 미생물군유전체 분석을위한 펠릿, 영하 80섭씨. 이 프로토콜은 특정 프리바이오틱의 효과를 입증하는 데 사용됩니다. 건강한 인간 과목의 대변은 이눌린으로 치료한 후 9시간 동안 비교적 안정된 pH를 보였으며 24시간 후에 극적으로 떨어졌습니다.이눌린의 접종은 비처리 배설물 미생물 배양과 비교하여 이눌린 처리된 대변 시편에서 짧은 사슬 지방산 및 젖산의 수준을 현저히 증가시켰습니다. 주요 좌표 분석은 이눌린 처리및 처리되지 않은 견본 사이 베타 다양성의 가중 및 무가중치 UniFrac 측정에 다른 microbiota 조성물을 보여줍니다. PD 전체 나무, 종 풍부함, 운영 분류학 단위, 종 균등뿐만 아니라 주요 필라와 제네라의 상대적 풍부를 통해 알파 다양성 대 물리 유전 적 다양성의 지수는 모두 이눌린 처리 및 치료되지 않은 샘플 사이의 다른 장 내 미생물 을 제시한다.16S 서열의 선형 차별 효과 크기 분석에서 파생된 분류학 클라도그램은 다양한 샘플 그룹 간의 차별화된 풍부한 taxa를 나타낸다. 모든 단계를 신중하게 따르십시오. 가장 중요한 것은 엄격한 무균 및 혐기성 조건을 유지하는 것입니다.상체 및 실험에서 섬유에 기반한 발효의 결과로 단락 지방산 수준 변화를 치료하는 데 사용할 수 있다. 추가적으로, 펠릿내는 장내 미생물군유전체 조성물의 변화를 분석하는 데 사용될 수 있다. 문화 매체를 만드는 데 사용되는 일부 화학 물질은 잠재적으로 위험합니다.MSDS 시트를 기재해 그에 따라 주의하십시오.

an-vitro-batch-culture-model-to-estimate-effects-interventional

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

출처: 아흐마디, S. 외. 인체 대변 미생물군에 대한 중재적 요법의 효과를 추정하기 위한 시험관 내 배치 배양 모델. J. Vis. 경험 (2019).이 영상은 식이 발효성 섬유를 배양하여 장내 미생물 미생물의 대사물 생성을 연구하기 위해 장내 미생물 발효를 모델링하는 방법을 시연합니다.

시험관 내 인간 장내 미생물군에 의한 대장 발효를 모방하는 배치 배양 모델

출처: 칼라타유드 아로요, M. 외. 시험관 내 숙주-미생물 인터페이스에서 합성 박테리아 컨소시엄의 생존 가능성 평가. J. Vis. 경험 (2018).이 영상은 박테리아의 생존 가능성을 연구하기 위한 시험관 내 장 숙주-미생물 모델을 시연합니다. Caco-2와 HT29-MTX 세포의 공동 배양은 모의 소화 조건 하에 사전 처리된 박테리아와 함께 배양됩니다. 상피 장벽의 완전성을 경상피 전기 저항을 이용해 평가하며, 배양지에서 분획, 용해된 점액, 세포 용해액, 세포 잔해물을 수집하여 후속 분석을 수행합니다.

박테리아 부착 및 내부 흡수를 평가하기 위한 시험관 내 장 모델

이 비디오에서는 쥐의 장 조직 조각과 특정 장내 세균 간의 상호 작용을 연구하기 위해 생체 외 장 장기 배양 시스템을 설정하는 방법론을 설명합니다. 이 장치는 두 쌍의 입력-출력 포트로 구성되며, 첫 번째는 장 조직 내강을 연결하고 특정 박테리아 현탁액을 공급하고, 두 번째는 생체 외 조직 생존력을 유지하기 위해 장치의 웰에 매체를 지속적으로 공급합니다.

숙주-미생물총(Microbiota) 상호작용을 연구하기 위한 생체 외 장기 배양 시스템

우리는 인간의 장 - 온 - 어 - 칩 microphysiological 시스템을 사용하여 확장 된 기간 동안 체외 프로토콜 공동 문화 장내 마이크로 바이 옴과 장 융모에 대해 설명합니다.

에 Microengineered 인간의 장내 융모와 생활 마이크로 바이 옴의 공동 문화 창자 - 온 - 어 - 칩 미세 유체 장치

창 자 미생물 호스트 상호 작용은 합성 구두 커뮤니티, 생체 외에서 위장 소화, 그리고 소장 상피의 모델을 결합 하 여 새로운 접근 방식을 사용 하 여 평가 됐다. 우리 세포 침입 병원 체와 다중 종 biofilms의 평가 또는 테스트 probiotic 정립 생존 적응 될 수 있는 방법 제시.

생체 외에서 직감 호스트 미생물 인터페이스에 합성 세균 컨소시엄의 생존 능력을 평가

여기, 선물이 위장 장 관의 생리 조건을 시뮬레이션 bioreactors의 시리즈를 사용 하 여 콜론 생체 외에서, 의 본질적인 microbiota 경작을 위한 프로토콜.

인간의 본질적인 Microbiota 공부 기술을 경작 하는 체 외에서 고급 적용

여기서 설명된 프로토콜은 시험관 내 배치 발효 시스템을 사용하여 내생생물학과 인간 장내 미생물 간의 상호작용을 조사하는 프로토콜이다.

체외 목욕 발효 시스템을 사용하여 내분비병제와 인간 장내 미생물 간의 상호 작용 분석

이 문서는 전 생체 내 실험을 위한 새로운 창자 기관 배양 시스템을 사용하여 호스트-미생물군유전체 상호 작용을 분석하기 위한 독특한 방법을 제시합니다.

호스트-미생물군유병 상호 분석을 위한 장 내 장관 장기 배양 시스템

이 프로토콜은 혐기성 조건에서 복잡한 배설물 군집의 연속 유동 배양에 활용되는 미니 생물반응기 어레이의 조립에 대해 자세히 설명합니다. 또한 추가 분석을 위해 반응기의 조립, 접종 및 샘플링 방법에 대해서도 논의합니다.

복잡한 분변 군집의 지속적인 배양을 위한 Bioreactor Assembly

MBRA(Minibioreactor Array)는 복잡한 미생물 군집의 배양을 가능하게 하는 고처리량, 맞춤형 연속 흐름 배양 시스템으로, 마이크로바이옴 역학, 치료 상호 작용 및 환경 요인에 대한 미생물 반응을 연구하기 위한 병렬 실험을 지원합니다.

Minibioreactor Array(MBRA)의 조립 및 사용을 위한 업데이트된 프로토콜

배우세요 인체 배설물 미생물에 대한 중재 식이요법의 효과를 추정하는 시험관 내 배치 배양 모델을 활용한 장내 미생물 연구 방법을. 이 프로토콜은 장 건강 개입 효과를 평가하는 데 유용한 도구입니다.

인체 배설물 미생물에 대한 중재 식이요법의 효과를 추정하는 시험관 내 배치 배양 모델

더 많은 동영상 탐색