Name: 전립선암 바이오뱅킹을 위한 샘플링 절차를 안내하기 위해 자기 공명 영상 및 생검 데이터 사용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 49 s
Description: 학습하세요 전립선암 조직 샘플링 프로토콜을 통해 MRI 영상으로 종양 위치를 정확히 파악하고 생검으로 신선한 종양 조직을 채취하는 방법을. 이 기술은 전립선암 연구에 필수적인 생물학적 분석을 위한 고품질 조직 확보에 활용됩니다.

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저자는 전립선 암 영국 우수 및 여행 상 펠로우십 (TLD-PF16-004)와 혁신 (PG14-018-TR2)에서 HP의 밑에 자금 조달을 위한 전립선 암 UK를 인정하고 자합니다. 이 일은 건강 연구 대학 대학 런던 병원 생물 의학 연구 센터에 있는 연구원에 의해 지원되었습니다.

이 프로토콜은 현지 지침을 준수하며 UCL/UCLC 바이오뱅크 연구 윤리 위원회(참조 15/YH/0311)의 승인을 받았습니다.
참고: 이 방법은 인체 조직의 샘플링을 포함하므로 프로토콜을 시작하기 전에 윤리 및 동의에 관한 모든 국소 절차를 준수해야합니다. 급진적 전립선 절제술 케이스는 MRI와 생검 데이터가 수술 의 앞에 유효하다면, 종양 직경 ≥5 mm. 케이스는 색인 병변이 잘 정의되지 않는 경우에 제외되어야 합니다, 즉, 단지 확산 변경은 MRI에 의해 보입니다.
1. 전립선 슬라이스 장치
<ol><li>전립선 슬라이스 장치(재료 표)를구입 하십시오. 또는 이전에 게시된10과같이 3D 프린터를 사용하여 블레이드 핸들을 인쇄합니다. 참고: 여기에 사용되는 장치와 일회용 블레이드는 영국 런던 암 연구소에서 재료 이전 계약에 따라 구입했습니다.</li>
</ol>2. 종양 표적
<ol><li>진단 생검에 의해 지시된 것과 같이 색인 병변을 확인하기 위하여 임상 노트를 검토하십시오, 예를 들면, 좌측 후방.</li>
	<li>MRI 이미지를 검토하여 위 종양의 위치를 측정합니다.<ol>
<li>종양이 축 평면에서 가장 눈에 띄는 서열을 찾습니다(예: T2 가중치)</li>
		<li>축 이미지를 스크롤하여 종양이 가장 큰 이미지를 찾고 참조용 이미지를 인쇄합니다.</li>
		<li>상응하는 관상 이미지에서, 선택한 축 위치까지의 전립선 기저부로부터의 거리, 그리고 정점에서 염기(mm)까지의 전립선의 전체 길이를 측정하고, 참조를 위해 인쇄한다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 전립선의 컬렉션
<ol><li>환자 노트를 확인하여 이 절차 및 다운스트림 연구 응용 프로그램에 대해 적절한 정보에 입각한 동의가 얻어졌음을 확인하십시오.</li>
	<li>급진적 인 전립선 절제술에 따라 마른 냄비에 전립선을 수집하십시오. 포르말린이나 다른 고정제가 전립선에 첨가되지 않았는지 확인하십시오.</li>
	<li>샘플링을 위한 적합한 멸균 위치로 이송, 예를 들어, 병리학 실험실에서 층류 후드.</li>
	<li>신선한 조직이 필요한 경우 가능한 한 빨리 샘플링을 진행하십시오. 참고: 특정 응용 프로그램 (예를 들어, RNA만큼 빨리 저하되지 않아야 하는 DNA의 평가)를 위해, 견본을 냉장하고 다음날 견본을 취하는 것이 적색일지도 모릅니다.</li>
</ol>4. 표본 준비
<ol><li>멸균 기술을 사용하여 국소 오염 제거 절차에 따라 라미나 흐름 후드 및 전립선 슬라이싱 장치를 준비합니다. 여기서 70% 에탄올을 분사하고 모든 표면을 닦으소세요. 멸균 일회용 바늘과 메스를 사용하십시오. 슬라이서 블레이드를 최대 3 회 사용하십시오. 뜨거운 비눗물에 사용할 때마다 씻은 다음 70 % 에탄올로 스프레이하고 닦으하십시오.</li>
	<li>표준 척도를 사용하여 전립선 (g)을 계량하십시오.</li>
	<li>전립선에 잉크를. 왼쪽에 파란색 잉크를, 오른쪽은 검은색 잉크로 칠합니다. 나중에 수술 마진을 나타내기 위해 잉크로 전체 캡슐과 정액 소포를 덮습니다. 참고: 수동 처리 절차는 로컬로 다를 수 있으며 그에 따라 수정할 수 있습니다.</li>
</ol>5. 전립선 슬라이스
<ol><li>벽을 스탠드의 베이스에 수직으로 삽입하여 슬라이싱 장치를 조립합니다(그림1A).</li>
	<li>전립선을 배치하여 전립선과 정점을 반대쪽 벽을 향하여 뒤쪽쪽을 아래로 그리고 앞쪽으로 향합니다. 전립선 주위에 금핀을 놓습니다. 슬라이스 하는 동안 전립선을 지원 하는 아늑한 적합을 얻기 위해 필요한 경우 약간 안쪽으로 전립선을 밀어.</li>
	<li>눈금자를 사용하여 기지에서 정점에 이르기까지 전립선 길이를 측정하고 MRI로 측정한 전립선 길이와 비교합니다. 전립선이 줄어든 경우, 기지에서 대상 횡방향 슬라이스까지 예상 거리에 임시 보정을 적용합니다. 예를 들어, MRI 이미지에서 전립선의 전체 길이가 50 mm이지만 이 시점에서 눈금자로 측정하면 45mm로 축소된 경우 예상 슬라이싱 위치를 10% 줄입니다.</li>
	<li>베이스에서 원하는 횡방향 슬라이스로 측정합니다. 이 측정값에 가장 가까운 핀을 선택하여 슬라이스합니다.</li>
	<li>부상을 방지하기 위해 체인 메일 장갑을 착용하고 슬라이스 장치(그림 1B)를잡고 식별 된 핀의 양쪽에 블레이드를 배치하고 스페이서를 사용하여 블레이드를 5mm 간격으로 유지하십시오. 긴스트로크(그림 1C)를통해 블레이드를 아래, 앞뒤로 천천히 단단히 움직여 슬라이스합니다. 장치를 분해하기 전에 전체 슬라이스가 분리되었는지 확인합니다.</li>
	<li>벽과 핀을 제거하고 조심스럽게 장갑을 사용하여 코르크 보드의 멸균 시트에 슬라이스를 꺼내.</li>
</ol>6. 조직 샘플링
<ol><li>가로 슬라이스를 시각적으로 검사하고 축 MRI 이미지와 비교합니다. 어떤 경우에, 종양 지역은 주변 조직 보다는 창백한 나타날 수 있습니다.</li>
	<li>가로 슬라이스를 부드럽게 만져주세요. 어떤 경우에, 종양은 주변 조직 보다는 더 단단하게 느낄 수 있습니다.</li>
	<li>축 MRI 이미지를 가이드로 사용하여 샘플링을 위해 하나 이상의 영역을 선택합니다.</li>
	<li>
조직의 원하는 영역의 생검 펀치를 가져 가라.
	<ol>
<li>6mm 펀치를 사용하여 원하는 조직 부위를 밀어 내세요.</li>
		<li>조직 펀치를 코르크에 대고 비틀어 완전히 분리하고 필요한 경우 날카로운 메스를 사용하여 분리하십시오.</li>
		<li>플런저를 사용하여 분출하여 필요에 따라 펀치를 제거하고 튜브/몰드에 넣습니다.</li>
		<li>필요에 따라 별도의 멸균 생검 펀치로 추가 종양 및 양성 샘플을 반복하십시오. 펀치가 빨간색으로 찍은 구멍을 잉크로 만듭니다.</li>
		<li>전립선의 무게와 조직 색상 / 견고성에 대한 관찰과 함께 각 펀치의 위치를 주목하십시오.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. 지역 진단을 위한 전립선 제출
<ol><li>조직 수축 및 뒤틀기를 방지하기 위해 고정하기 전에 멸균 일회용 바늘로 코르크에 전립선을 고정, 이는 수술 마진의 모양을 변경할 수 있습니다.</li>
	<li>코르크에 고정 한 후, 표준 임상 진단을위한 조직 병리학 부서에 전립선을 제출하십시오.</li>
</ol>8. 장치의 오염 제거
<ol><li>일회용 모든 장비는 생의학 폐기물 스트림 및/또는 현지에서 지정된 용기에 버리십시오.</li>
	<li>인간 조직에 적합한 국소 위험 평가에 따라 층류 후드 및 전립선 슬라이스 장치를 오염 제거합니다(예를 들어, 70% EtOH 및 닦아내).</li>
</ol>

<ol><li>Sooriakumaran, P., Henderson, A., Denham, P., Langley, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+of+obtaining+prostate+tissue+for+gene+expression+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Surgical+Pathology%22%5BJournal%5D)">A novel method of obtaining prostate tissue for gene expression profiling.</a> International Journal of Surgical Pathology. 17 (3), 238-243 (2009).</li>
<li>Jhavar, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Processing+of+radical+prostatectomy+specimens+for+correlation+of+data+from+histopathological%2C+molecular+biological%2C+and+radiological+studies%3A+a+new+whole+organ+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Processing of radical prostatectomy specimens for correlation of data from histopathological, molecular biological, and radiological studies: a new whole organ technique.</a> Journal of Clinical Pathology. 58 (5), 504-508 (2005).</li>
<li>Wheeler, T. M., Lebovitz, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fresh+tissue+harvest+for+research+from+prostatectomy+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22The+Prostate%22%5BJournal%5D)">Fresh tissue harvest for research from prostatectomy specimens.</a> The Prostate. 25 (5), 274-279 (1994).</li>
<li>Esgueva, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Next-generation+prostate+cancer+biobanking%3A+toward+a+processing+protocol+amenable+for+the+International+Cancer+Genome+Consortium%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostic+Molecular+Pathology%22%5BJournal%5D)">Next-generation prostate cancer biobanking: toward a processing protocol amenable for the International Cancer Genome Consortium.</a> Diagnostic Molecular Pathology. 21 (2), 61-68 (2012).</li>
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<li>Tolkach, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blind+Biobanking+of+the+Prostatectomy+Specimen%3A+Critical+Evaluation+of+the+Existing+Techniques+and+Development+of+the+New+4-Level+Tissue+Extraction+Model+With+High+Sampling+Efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Prostate%22%5BJournal%5D)">Blind Biobanking of the Prostatectomy Specimen: Critical Evaluation of the Existing Techniques and Development of the New 4-Level Tissue Extraction Model With High Sampling Efficacy.</a> The Prostate. 77 (4), 396-405 (2017).</li>
<li>Warren, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+sampling+tissue+for+research+which+preserves+pathological+data+in+radical+prostatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Prostate%22%5BJournal%5D)">Method for sampling tissue for research which preserves pathological data in radical prostatectomy.</a> The Prostate. 73 (2), 194-202 (2013).</li>
<li>Heavey, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PatiEnt+prOstate+samPLes+for+rEsearch%2C+a+tissue+collection+pathway+utilizing+magnetic+resonance+imaging+data+to+target+tumor+and+benign+tissue+in+fresh+radical+prostatectomy+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22The+Prostate%22%5BJournal%5D)">PatiEnt prOstate samPLes for rEsearch, a tissue collection pathway utilizing magnetic resonance imaging data to target tumor and benign tissue in fresh radical prostatectomy specimens.</a> The Prostate. 79 (7), 768-777 (2019).</li>
<li>Bailey, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VERDICT+MRI+validation+in+fresh+and+fixed+prostate+specimens+using+patient-specific+moulds+for+histological+and+MR+alignment%5BTitle%5D)+AND+%22NMR+in+Biomedicine%22%5BJournal%5D)">VERDICT MRI validation in fresh and fixed prostate specimens using patient-specific moulds for histological and MR alignment.</a> NMR in Biomedicine. 32 (5), 4073(2019).</li>
<li>Bourne, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apparatus+for+Histological+Validation+of+In+Vivo+and+Ex+Vivo+Magnetic+Resonance+Imaging+of+the+Human+Prostate%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Oncology%22%5BJournal%5D)">Apparatus for Histological Validation of In Vivo and Ex Vivo Magnetic Resonance Imaging of the Human Prostate.</a> Frontiers in Oncology. 7, 47(2017).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

이 프로토콜 내의 중요한 단계는 샘플링을 위한 종양 지역, 전립선의 측정 및 조직 샘플링을 포함합니다. 첫째, 샘플링의 정확한 영역을 식별하기 위한 MRI의 측정이 중요합니다. 우리는 함께 비디오에서이 방법을 보여 줍니다. 그러나, 우리는 또한 첫번째 인스턴스에 있는 방사선 전문의와 측정을 확인하는 것을 추천합니다. 인덱스 병변을 포함하는 MRI 심상의 지역을 향해 연구원을 가리키는 명확한 임상 노트는 이상적이다. 둘째, 전립선의 측정은 눈금자가 전립선의 앞쪽과 평행하게 기지에서 정점에 이르는 전체 길이를 측정하기 위해 각도로 유지되도록주의하여 수행되어야합니다. 셋째, 종양 부위는 원래 MRI 이미지와 관련하여 조직 조각을 육안으로 검사하고 조직을 촉지 (어떤 경우에는 종양 영역이 더 조밀하게 느낄 수 있음) 및 조직의 색상을 시각적으로 평가하여 샘플링하기 전에 확인되어야합니다 (일부 경우) 종양이 주변 양성 조직보다 더 창백하게 나타날 것입니다).
이 프로토콜은 비 임상 박사 후 연구원, 병리학 연구원, 병리학 컨설턴트 및 연구 기술자에 의해 UCL/UCLH에서 전체적으로 수행되었습니다. 우리의 경험에서 프로토콜의 모든 단계는 기술적 배경에 관계없이 10 가지 미만의 사례에서 배울 수 있습니다. 그러나, 우리는 MRI 측정및 첫번째 인스턴스에 있는 슬라이스에 관하여 병리학자에게서 훈련에 관하여 방사선학자에게서 훈련을 추천합니다. 프로토콜은 이전에 게시된10과같이 3D 인쇄 슬라이싱 핸들을 사용하여 수정할 수 있습니다.
기술의 잠재적인 한계는 진단에 방해의 리스크를 포함합니다. 전립선을 자르는 것은 중요한 단계이며, 잘못 수행하면 등급 또는 양수 마진율에 방해가 될 수 있습니다. 여기에는 두 가지 잠재적인 문제가 있습니다. 첫째, 모든 색인 병변이 제거되고 신선한 조직 실험을 위해 즉시 사용되는 경우, 일상적인 임상 진단은 이 병변에 대해 수행되지 않으며 환자는 더 낮은 등급의 암을 갖는 것으로 잘못 진단될 수 있다. 이를 피하기 위해 연구원은 샘플링 전에 사례를 정기적으로 검토하고 촬영 할 샘플의 수와 위치에 동의하는 컨설턴트 병리학자와 샘플링 계획을 논의해야합니다. 작은 종양은 이러한 이유로 국소적으로 제외될 수 있다. 둘째, 전립선 캡슐이 고정하기 전에 코르크 보드에 올바르게 고정되지 않으면 내부 조직이 고정 중에 바깥쪽으로 부풀어 오르도록하여 수술 마진을 변경할 수 있습니다. 이것은 거짓 양성 마진으로 이끌어 낼 수 있었습니다, 나머지 종양은 조직 뒤틀기 때문에 순전히 캡슐에 상주하는 것처럼 보입니다.
기존 방법에 관하여 이 기술의 중요성은 주로 종양 표적으로 거짓말. 급진적 인 전립선 절제술 표본을 샘플링하기위한 방법의 범위는 현재까지 출판되었습니다; 그러나, 이들은 모두 완전히 또는 부분적으로 임의의 샘플링 접근 방식에 의존1,2,3,4,5,6,7. 여기에서 생검 및 특히 MRI 데이터의 사용은 종양 조직을 얻기의 증가한 신뢰와 감소된 표본 추출을 허용하는 효율성을 향상시켰습니다8.
이 방법의 향후 응용 프로그램은 이전 샘플링 방법보다 더 넓은 범위의 다운스트림 기술을 채택할 수 있습니다. 예를 들면, 종양인의 높은 확률이 있는 신선한 조직의 가용성은 많은 견본이 종양의 존재를 지키기 위하여 요구되지 않기 때문에 더 비싸고 노동 집약적인 신선한 조직 기술이 이용될 수 있다는 것을 의미합니다. 이는 전 생체 배양, 생체 내 MRI, 고급 이미징 및 전사체를 포함하며 이에 한정되지 않을 수 있다.

고품질 인간 전립선암 조직에 대한 접근은 현장에서 효과적인 연구를 추진하는 데 중요한 요구 사항입니다. 연구를 위한 급진적인 전립선 절제술다음 전립선 조직을 견본하는 기존 방법의 수가 있습니다. 전형적으로 이들은 전립선 조직의 신선, 동결 또는 고정된 조각에서 무작위 견본을 취하기 위하여 펀치 생검을 사용하여 관련시키고, 에 의해 평가된 것과 같이 헤마톡실린 & 에오신 (H&E)에 의해 각 견본에서 종양이 존재하는지 여부를 소급확인합니다 비뇨기과 의사1,2,3,4,5. 최근 검토는 이러한 기존 방법의 개요를컴파일했다 6. 이러한 방법은 국제 암 게놈 컨소시엄 (ICGC) 및 암 게놈 아틀라스 (TCGA)와 같은 대규모 게놈 분석과 같은 나중에 종양 함량을 위해 조직을 저장하고 평가 할 수있는 특정 다운 스트림 응용 프로그램에 유용합니다. 4,7. 그러나, 이 방법은 우리가 자기 공명 화상 진찰 (MRI) 및/또는 생검 데이터를 표본 추출을 위한 전립선의 특정 지역을 표적으로 하기 위하여 이용하는 경우에 에 향상될 수 있었습니다. 이렇게 하면 두 가지 방법으로 방법론이 향상됩니다. 첫째, 수집된 조직 샘플의 수를 줄이고, 효율성을 높이고, 병리학 부서에 대한 압력과 저장 비용을 감소시킴으로써, 둘째, 신선한 조직이 즉각적인 확인 없이 즉시 사용될 수 있도록 함으로써 종양 함량, 살아있는 조직 화상 진찰, 오르가노이드 생성 또는 생체 배양과 같은 예술 다운스트림 기술의 새로운 상태에 대한. 이러한 연구의 필요성은 PEOPLE(rEsearch용 PatiEnt prOstate samPLes) 방법의 개발로 이어졌으며, PEOPLE을 이용한 바이오뱅크의 첫 84례의 결과는 최근8건의공표되었다. 이 방법의 변형은 또한 3차원(3D) 인쇄슬라이싱 장치 및 환자 특이적 몰드와 함께 출판되었으며, 사전 및 사후 고정 조직9,10에생체 내 MRI를 용이하게 하기 위해.

<table><tbody><tr><td>6mm 생검 펀치</td><td>Fisher Scientific</td><td>13404607</td><td>6mm 조직 샘플 제거를 위한 일회용 생검 펀치</td></tr><tr><td>블랙 잉크</td><td>Leica Biosystems</td><td>3801753</td><td>조직 마킹 및 마진 염료</td></tr><tr><td>블루 잉크</td><td>Leica Biosystems</td><td>3801751</td><td>조직 마킹 및 마진 염료</td></tr><tr><td>체인 메일 핸드 장갑</td><td>Arco</td><td>1456803</td><td>손을 보호하는 체인 장갑 </td></tr><tr><td>코르크 보드를</td> 자르는 동안 <td>피셔 사이언티픽</td><td>12396447</td><td>샘플링 절차에 따라 전립선을 고정하기위한 코르크 보드</td></tr><tr><td>바늘</td><td>SLS (Scientific Laboratory supplies)</td> <td>SYR6112</td><td>샘플링 후 코르크 보드에 조직을 고정하는 데 사용하는 멸균 바늘</td></tr><tr><td>전립선 슬라이스 aparatus</td><td>Insitute of Cancer Research, London</td><td>NA - MTA</td><td>에 따라 얻어야합니다.슬라이서 핸들, 블레이드, 스페이서, 베이스, 벽 및 핀이 포함된 키트</td></tr></tbody></table>

전립선암 바이오뱅킹을 위한 샘플링 절차를 안내하기 위해 자기 공명 영상 및 생검 데이터 사용

Use of Magnetic Resonance Imaging and Biopsy Data to Guide Sampling Procedures for Prostate Cancer Biobanking

바이오 뱅킹 전립선 조직에 대한 이전 방법, 급진적 인 전립선 절제술다음, 일반적으로 무작위 샘플링을 포함. 효율성을 높이고 더 넓은 범위의 다운스트림 응용을 가능하게 하기 위해 전립선 조직을 샘플링하는 보다 표적화된 방법이 개발되었습니다. 여기에서 우리는 자기 공명 화상 진찰 (MRI) 및 생검 데이터를 둘 다 샘플링을 위한 기관의 특정 지역을 표적으로 하기 위하여 이용합니다. 이 방법은 전립선의 소정의 영역에서 5mm 횡방향 슬라이스를 제거하고, 이 슬라이스의 소정의 영역에서 6mm 펀치 생검을 제거한 다음 이전에 출판된 전립선 슬라이스 장치의 사용을 포함한다. 이러한 샘플은 바이오뱅킹 을 목적으로 냉동 또는 고정저장될 수 있거나, 무작위 샘플링 접근법으로부터 10% 신뢰와 비교하여 종양 함량의 70% 신뢰도를 가지고 즉시 신선히 사용할 수 있다. 이것은 게놈, proteomics 또는 조직학 일과 같은 모든 표준 다운스트림 기술의 사용을 가능하게 합니다, 그러나 또한 살아있는 조직 화상 진찰 또는 ex vivo 문화와 같은 신선한 조직을 요구하는 작동합니다.

PEOPLE 방법을 사용하여 샘플링된 신선한 전립선 조직은 게놈 염기서열 분석 및 생체 내 배양을 포함하는 다양한 다운스트림 기술에 사용될 수 있다. 이 메서드를 사용하여 샘플링된 처음 59개의 사례는 초기 다운스트림 데이터8과함께 메서드의 이전 버전과 비교하여 이전에 게시되었습니다. 전립선을 처음 슬라이스에서 펀치 생검을 동결/고정하는 데까지의 시간은 약 1분이었으며, RNA의 분해를 피하기 위해 최소한으로 유지되었습니다. 전립선 슬라이스의 제거에서 전립선 슬라이스에 시간 또한 최소로 유지 되어야 한다, 비록 여기이 약 했다 20 다른 위치에 있는 우리의 극장 및 병 리 실험실 으로 인해 분.
다운스트림 적용에 따라, 전형적으로 적어도 2개의 견본은 취합니다: 예상되는 종양 조직의 지역에서 하나 및 예상되는 양성 조직의 지역에서 하나. 샘플링 방법 자체에 대한 성공의 주요 척도는 주어진 샘플에서 종양 함량을 평가하는 것이다.
100,000게놈 프로젝트에 진입하려면 H&amp;E 염색 된 조직 섹션은 비뇨기과 의사에 의해 평가되어야하며 샘플에는 적어도 40 % 종양 세포가 포함되어야합니다. 40% 미만의 종양을 포함하는 견본은 성공적으로 macrosected인 경우에 프로젝트에 아직도 포함될 수 있습니다. 이러한 방식으로 샘플링된 처음 92건 중 64%는 적어도 40% 종양을 포함하고 거시적 해부 없이 100,000게놈 프로젝트에 제출하였다. DNA를 추출하고 모든 경우에 충분한 수율 및 품질을하였다(표 1). 이러한 샘플 중 59개의 초기 하위 집합은 이전 방법8과비교하여 이전에 게시되었습니다.
ex vivo 배양물의 경우, 일치하는 종양 및 양성 조직은 현저한 분해 없이 72시간 배양을 견딜 수 있는 충분한 품질이어야 한다. 총 3명의 환자로부터다중의 다중 조직 샘플을 성공적으로배양하였고 8.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60216/60216fig1.jpg"> 그림 1: 전립선 슬라이스 장치. 이 장치는 암 연구 연구소로부터 물질 이전 계약에 따라 수득되었다. (A)벽은 염기에 수직으로 삽입되고, 금 핀은 전립선을 둘러싼 염기에 삽입된다 (전립선은 그림이 아님). (B)교체 가능한 병렬 블레이드가 블레이드 핸들에 삽입됩니다. (C)블레이드는 전립선의 5mm 부분을 슬라이스하기 위해 골드 핀 사이를 통과합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60216/60216fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>n (%)</td>
		</tr>
<tr>
<td>히트 (&gt;40% 종양)</td>
			<td>59 (64%)</td>
		</tr>
<tr>
<td>부분 적중 (5-30 % 종양)</td>
			<td>6 (7%)</td>
		</tr>
<tr>
<td>미스 (0% 종양)</td>
			<td>27 (29%)</td>
		</tr>
<tr>
<td>총</td>
			<td>92 (100%)</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1: 종양 적중률. 종양 적중률은 H&amp;E 염색 된 조직의 검토에 따라 전립선암 전문 컨설턴트 병리학자에 의해 결정되었습니다. &gt;40%의 종양 세포 함량은 유전체학 영국 지침에 따라 100,000 게놈 프로젝트에 포함시키기에 적합한 것으로 결정되었다.

이 방법은 급진적 인 전립선 절제술을 따르는 바이오 뱅킹 조직이 샘플링 절차를 안내하기 위해 전립선 암 환자에 대한 임상 진단 데이터를 활용하는 것을 포함합니다. 이것은 다운스트림 응용의 넓은 범위에 대한 새로운 조직의 효율성과 가용성에 관한 이전에 게시 된 방법과 문제를 극복한다.

Previous methods for biobanking prostate tissue, following radical prostatectomy, generally involved random sampling. In order to increase efficiency, and ...

이전 전립선 샘플링 방법에 대한이 프로토콜의 중요성은 연구를 위해 신선한 종양 조직을 표적으로 하는 더 높은 자신감을 제공한다는 것입니다. 따라서, 우리는 새로운 조직을 실험실로 바로 데려가서 어떤 샘플이 종양이고 양성인지에 대한 높은 확신을 가지고 있기 때문에 문화 또는 이미징을 위해 사용할 수 있습니다. 이 기술을 배울 때 나의 중요한 조언은 최종 조직 진단 및 보고가 손상되지 않도록 현지 병리학자와 함께 일하는 것입니다.종양 위치를 표적으로 하기 위하여는, MRI 심상을 검토하여 종양 위의 위치를 측정하고 종양이 축 평면에서 가장 보이는 서열을 찾아냅니다. 축 이미지를 스크롤하여 종양이 가장 큰 이미지를 식별하고 참조를 위해 이미지를 인쇄합니다. 해당 관상 동맥에서, 전립선의 기지에서 선택된 축 위치로의 거리를 측정하고 밀리미터 단위로 정점에서 전립선의 전체 길이를 측정한다.그런 다음 이러한 측정값을 인쇄하고 참조를 위해 종양의 위치를 표시합니다. 시편을 수집한 후, 70%에탄올로 라미나르 플로우 후드와 전립선 슬라이싱 장치를 살균하고 전립선의 무게를 그램단위로 측정한다. 그런 다음 오른쪽을 파란색 잉크로 칠하고 수술 마진을 차별할 수 있도록 잉크로 전체 캡슐과 정액 소포를 덮는 검은 잉크로 표본의 왼쪽을 페인트합니다.전립선을 슬라이스하려면, 기지와 정점을 가진 조직을 후방 측아래로, 앞쪽면을 위로 향하게 한다. 필요한 경우 전립선을 약간 안쪽으로 밀어내는 조직 표본 주위에 골드 핀을 놓고 염기부터 정점에 이르는 전립선 길이를 측정하여 MRI에 의해 측정되는 전립선 길이와 비교합니다. 전립선이 축소된 경우 예상 슬라이싱 위치를 적절한 백분율로 조정합니다.그런 다음 베이스에서 원하는 횡방향 슬라이스로 측정하고 이 측정에 가장 가까운 핀을 선택하여 슬라이스합니다. 부상을 방지하기 위해 체인 메일 장갑을 착용하고, 식별 된 핀의 양쪽에 슬라이스 장치의 블레이드를 배치하고 스페이서를 사용하여 블레이드를 5 밀리미터 떨어져 유지합니다. 슬라이스를 획득하려면 긴 스트로크를 사용하여 블레이드를 천천히, 앞으로, 뒤로 움직여 장치를 분해하기 전에 전체 슬라이스가 분리되었다고 느끼게 합니다.그런 다음 벽과 핀을 제거하고 장갑을 사용하여 조각을 코르크 보드의 멸균 조각으로 조심스럽게 옮기습니다. 시편을 획득한 후 축 MRI 이미지와 비교하기 위해 가로 슬라이스를 육안으로 검사합니다. 경우에 따라, 종양 영역은 주변 조직 보다 창백 한 나타날 수 있습니다.횡방향 슬라이스를 부드럽게 만지릅니다. 종양은 주변 조직보다 더 단단하게 느낄 수 있습니다. 축 MRI 이미지를 가이드로 사용하여 샘플링을 위해 하나 이상의 영역을 선택하고 6밀리미터 펀치를 사용하여 관심 있는 조직 영역을 밀어붙입니다.필요에 따라 생검 샘플을 시편에서 분리하기 위해 날카로운 메스를 사용하여 전체 분리를 보장하기 위해 코르크에 대한 조직 펀치를 비틀어. 샘플을 획득한 경우 펀치를 제거하고 플런저를 사용하여 샘플을 후속 다운스트림 분석을 위한 적절한 용기로 배출합니다. 그런 다음 펀치가 빨간색으로 찍은 구멍을 잉크로 각 펀치의 위치와 전립선의 무게와 조직 색상과 탄력에 대한 관찰을 기록합니다.고정 하는 동안 담즙을 방지 하기 위해 코르크에 전립선 캡슐을 고정. 전립선과 코르크를 고정으로 담그면 샘플이 완전히 잠겼습니다. 본 대표적인 분석에서, 입증된 바와 같이 샘플링된 처음 92례중 64%는 종양40% 이상을 함유하고 미세절 없이 100, 000 게놈 프로젝트에 제출되었다.DNA는 추출되었고 모든 경우에 충분한 수율과 품질이 있었으며 이들 샘플의 59개 초기 하위 집합은 이전 시편 샘플링 방법과 비교하여 출판되었다. 이 절차에 따라, 신선한 종양 샘플은 우리가 새로운 바이오 마커, 약물을 테스트하고 종양 생물학에 대해 자세히 알아 낼 수 있도록 살아있는 이미징 또는 문화에 사용할 수 있습니다. 이제 우리는 이 방법을 일상적으로 사용했기 때문에, 나는 전립선암을 위한 전임상 치료의 새로운 조합을 보기 위하여 전 생체 권 문화에 대한 이 조직을 사용하여 프로젝트를 앞으로 가져올 수 있었습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 비디오는 샘플링을 위해 전립선 조직의 특정 종양 함유 영역을 표적으로 하는 MRI 데이터 기반 기술을 보여줍니다. 수집된 생검 검체는 바이오뱅킹 목적으로 보관하거나 후속 다운스트림 분석에 사용할 수 있습니다.

바이오뱅킹을 위한 전립선암 조직 샘플링: 신선한 종양 조직에서 생검 펀치를 제거하기 위한 MRI 유도 표적 기술

인간 게놈의 8 %를 차지 인간 내인성 레트로 바이러스 (HERV)는, 부족한 코딩 능력 만 십만 긴 터미널 반복 (LTR에 의해 둘러싸) 유지. 사용자 지정 Affymetrix의 마이크로 어레이는 개별 HERV의 궤적 표현을 식별하도록 설계되었으며, 향후 임상 연구에 대한 개념의 증거로 전립선 암 조직에 사용되었다.

전립선 암의 바이오 마커 발견에 신청 : 개인 HERV 궤적 발현 마이크로 어레이 기반의 식별

본 발표는 MRI 초음파 퓨전 시스템을 사용 하 여 전립선의 타겟된 생을 수행 하는 프로토콜이 이다.

달성 하기 위해 MRI 초음파 퓨전의 사용 대상 전립선 생 검

이 프로토콜은 근치적 전립선 절제술 표본에서 샘플 수집을 용이하게 하는 방법을 설명합니다. 목표는 해부병리학적 기준에 따라 표본의 조직 샘플을 Biobank에 저장하기 전에 매핑, 특성화 및 미시적 매크로 절개하는 것입니다.

개선된 샘플링 기법 및 조직학적 특성 분석을 통한 전립선 종양 바이오뱅킹 신뢰성 향상

이 기사에서는 바이오뱅킹, 맞춤형 의학 및 기타 연구 응용 분야에 대한 유용성을 최적화하도록 설계된 유방암 샘플 수집을 위한 자세한 프로토콜을 제시합니다. 유방 생검 및 유방 절제술 절차를 포함한 샘플 수집 작업 흐름은 조직 손상을 최소화하고 샘플 품질을 극대화하는 데 중점을 두고 자세히 설명합니다.

바이오뱅킹, 맞춤형 의학 및 연구 응용을 위한 유방 생검 및 유방 절제술 샘플 수집 절차의 최적화

전립선 생검은 전립선암의 황금 표준 진단 방법입니다. 경직장 초음파와 사전 측정된 MRI 매개변수를 결합한 인지 융합 유도 전립선 생검은 생검의 정확도를 개선하고 임상적으로 유의한 전립선암의 발견률을 향상시킵니다.

다파라메트릭 자기공명영상(Multiparametric Magnetic Resonance Imaging and Transrectal Ultrasound)을 이용한 인지 융합 유도 전립선 생검(A Cognitive Fusion-guided Prostate Biopsy Using Multiparametric Magnetic Resonance Imaging and Transrectal Ultrasound)

이 연구는 원뿔 모양의 이중 구멍 방법과 이중 평면 프로브 가이드를 사용하여 향상된 경회음부 전립선 생검 기술을 제시합니다. 이러한 수정은 외상을 줄이고, 환자 회복을 향상시키며, 생검 정확도를 개선하여 전립선암 진단을 위한 신뢰할 수 있고 최소 침습적인 접근 방식을 만듭니다.

Dual-plane probe guidance와 함께 원뿔 모양의 이중 구멍 방법을 사용한 경회음부 전립선 생검

여기에서는 기존 조직병리학에 비해 장점이 있어 생검 샘플에 대해 자극 라만 조직학(SRH)을 사용하여 전립선암을 검출하기 위한 표준화된 프로토콜을 제시하며, 암 대 조직 비율을 개선하기 위해 샘플 준비, 이미징 및 인공 지능에 중점을 둡니다. 또한 전사체학, 오가노이드 또는 이종이식 모델, 수술 중 수술 마진 식별을 위한 바이오뱅킹을 지원합니다.

Detection and Isolation of Cancer in Prostate Biopsies Using Stimulated Raman Histology and Artificial Intelligence

심근 조직의 변형과 같은 매개 변수를 측정하는 정확하고 실용적인 방법은 그것이 게재되어 있기 때문에, 그 변형이 자주 사용하는 매개 변수 EF보다 수축성 장애에 대한보다 민감한 이전 마커이며, 훌륭한 임상 가치입니다.

기능 추적을 사용하여 자기 공명이 유래 심근 스트레인 평가

기관지 thermoplasty 과도한기도 평활근을 줄이기 위해 정확하게 제어 방식으로기도 벽에 열에너지를 제공 심각한 영구적인 천식을위한 비 약물 절차입니다. 기도 평활근을 줄이면함으로써 천식 발작의 빈도를 감소, 수축에 대한기도의 능력을 감소시킵니다.

기관지 Thermoplasty : 심한 천식에 소설 치료 접근

학습하세요 전립선암 조직 샘플링 프로토콜을 통해 MRI 영상으로 종양 위치를 정확히 파악하고 생검으로 신선한 종양 조직을 채취하는 방법을. 이 기술은 전립선암 연구에 필수적인 생물학적 분석을 위한 고품질 조직 확보에 활용됩니다.

전립선암 바이오뱅킹을 위한 샘플링 절차를 안내하기 위해 자기 공명 영상 및 생검 데이터 사용

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