산화 질소 및 그 유도체의 검출을위한 화학 발광 기반 분석 및 자동 산화 및 니트로화 화합물

이 프로토콜을 통해 연구원은 현장에서 전담 인력을 고용하는 지침이나 비용없이 산화 질소 대사 산물 측정을 위해 화학 발광 검출기를 능숙하게 사용할 수 있습니다. Chemiluminescence-based assay는 주어진 생물학적 샘플에서 산화 질소 및 그 대사 산물의 수준의 변화를 최소화하는 가장 민감한 방법입니다. 흡입 된 산화 질소는 다양한 질병에 사용되는 치료 가스입니다.

질병 진행과 회복이 산화 질소 대사 산물 수준과 정확하게 관련되는 것이 중요합니다. 항균제 인 흡입 된 산화 질소는 기도 전염병 환자를 치료할 때 약속을 보여줍니다. 화학 발광 방법은 산화 질소 복용량과 그 대사 산물을 미생물 학적 및 병리 생리학 적 변화와 상호 연관시키는 것에 대한 통찰력을 제공합니다.

DETA-NONOate 용액을 제조하기 위해, pH 7.4의 PBS 중의 10밀리몰 수산화나트륨 610마이크로리터에 DETA-NONOate 10밀리그램을 첨가하여 100밀리몰의 DETA-NONOate를 생성하고 얼음 위에 보관한다. 계속하려면 산소 라인을 화학 발광 검출기에 연결하고 텍스트에 제공된 제조업체의 지시에 따라 압력으로 산소 탱크를 엽니 다. 그런 다음 강도장 유전체 필터 라인을 화학 발광 검출기에 연결하십시오.

화학발광 검출기 인터페이스에서 액상 분석을위한 검출 프로그램을 실행하여 산소 공급이 적절하고 검출기가 샘플링을 시작하여 밀리볼트 단위의 신호로 감지를 나타내며 그렇지 않으면 음성 진단 신호를 프롬프트합니다. 퍼지 용기를 준비하려면 바늘 밸브를 오른쪽으로 완전히 조이고 입구 및 출구 정지 콕을 닫아 세 포트 모두에서 퍼지 용기를 닫으십시오. 퍼지 용기에서 캡을 제거하십시오.

샘플을 주입하는 데 사용되는 주사기 바늘이 안정하고 원하는 기준선의 존재를 검증하면서 유체 컬럼에 도달할 수 있도록 계획된 분석에 특이적인 충분한 양의 시약을 반응 챔버에 첨가한다. 퍼지 가스 흐름을 시작하려면 불활성 가스 탱크에 두 단계 조절기가 장착되어 있는지 확인하고 불활성 가스 탱크를 용기의 가스 입구와 연결하십시오. 그런 다음 퍼지 용기의 출구를 열고 평방 인치당 하나 ~ 다섯 파운드의 조절기에서 출구 압력으로 가스를 엽니 다.

그런 다음 퍼지 용기의 입구를 열고 퍼지 용기의 바늘 밸브를 천천히 열어 가스의 유입을 허용하고 퍼지 용기 내에서 버블 링을 확인합니다. 가스 흐름을 조정하려면 주변 공기를 샘플링하는 강렬 필드 유전체 필터 라인으로 화학 발광 검출기에 의해 측정 된 세포 압력을 기록하십시오. 퍼지 용기에 캡을 재배치하고 인텐트 필드 유전체 필터 라인을 퍼지 용기에 연결합니다.

바늘 밸브를 사용하여 주변 공기에 기록 된 화학 발광 검출기 수준에서 동일한 세포 압력에 도달하십시오. 화학발광 신호 수집 프로그램을 시작하려면 화학발광 검출기의 직렬 포트를 수집 프로그램이 설치된 컴퓨터의 직렬 포트에 연결하십시오. 그런 다음 분석 프로그램을 실행하십시오.

획득을 클릭 한 다음 데이터 파일을 저장할 폴더를 선택하고 파일 이름을 입력 한 다음 저장을 클릭하십시오. 샘플 주입을 준비하는 동안 최소 및/또는 최대 버튼을 클릭한 다음 원하는 값을 입력하여 대상 기준선을 제어하도록 화면의 전압 스케일을 조정합니다. 샘플 주입을 수행하려면 각 샘플을 회수하기 전에 탈이온수 및 증류수로 주사기를 적어도 두 번 이상 헹구고 작업 닦아내기에서 방해받지 않는 물 분출을 보장하십시오.

그런 다음, 주사기와 튜브를 모두 가까운 거리로 유지하면서 시료 튜브에 주사기를 삽입하고 플런저를 원하는 부피로 끌어 올리면서 기포 또는 균질화되지 않은 고체 부품이 갇히지 않도록하십시오. 작업 와이퍼로 주사기의 끝을 청소하고 주사기를 주입 포트의 세터 캡에 삽입하십시오. 주사기의 팁이 액상 내에 있는지 확인한 후 샘플을 반응 챔버에 주입하십시오.

소프트웨어 프로그램에서 주입을 표시하려면 샘플 이름 아래의 회색 상자를 클릭하여 샘플 이름을 입력 한 다음 마크 인젝션을 클릭하고 주입이 신호의 상향 또는 무세포 헤모글로빈 분석에 의한 산화 질소 소비의 하향 변화를 유발하는지 확인하십시오. 무세포 헤모글로빈과 산화질소 소비 사이의 용량 반응 관계는 심폐 바이패스 후 화학발광을 통해 측정하였다. 산화질소를 소거한 상태에서 고농도의 헴기가 있다고 가정할 수 있다.

심폐 우회 중에 산화 질소를받는 환자의 경우, 대신 헴 그룹의 대다수가 감소하고 산화 질소를 섭취하지 않습니다. 무세포 헤모글로빈 농도의 측정은 심폐 우회 후 12시간 이내에 혈장으로부터 느리게 제거됨을 나타내었다. 그러나 산화 질소 소비는 15 분에서 최고조에 달했으며 무세포 헤모글로빈의 제거를 반영하지 않았습니다.

무세포 헤모글로빈에 의한 산화질소 소비의 선형 회귀 곡선은 심폐 우회 후 기준선 4시간 및 12시간에서 더 감소된 헤모글로빈과는 대조적으로 15분에 산화된 산화질소 및 산화질소 소비 헤모글로빈의 유병률을 나타내었다. 산화질소 가스 투여가 산화질소 소비에 미치는 영향을 모니터링하였다. 환자가 수술 후 산화질소 가스로 치료되었을 때, 심폐 우회술 후 유리 헤모글로빈의 관찰된 증가는 산화질소 소비의 어떠한 증가와도 결합되지 않았다.

결과는 외인성 산화 질소가 유리 헤모글로빈의 대부분을 감소시키고 산화 질소 소거를 예방한다는 것을 나타냈다. 실험은 모든 조건이 동일하게 유지되는 경우에만 유효합니다. 액체 수준의 높이가 반응 컬럼을 초과하면 새로운 교정을 중단하고 수행해야합니다.