저산소증 유도 마우스 폐동맥 고혈압 모델에서 다중 정맥 볼루스 투여 및 침습적 혈류역학 평가

혈류에 직접 투여해야 하는 화합물의 경우 정맥 투여를 최적화하는 것이 실험 절차의 핵심 부분입니다. 당사의 상세한 프로토콜은 마우스 경정맥을 통해 여러 정맥 주사 볼루스 투여를 수행하기 위한 단계별 지침과 마우스 저산소증 폐동맥 고혈압 모델에서 정확한 혈류역학적 평가를 위해 동맥 및 우심실 카테터 삽입을 수행하는 방법을 제공합니다. 여기에 제시된 절차는 원발성 동맥 고혈압 치료법을 개발하기 위해 화합물 투여 플랫폼의 IV 루트에 관심이 있는 연구자에게 중요한 결과입니다.

조사관은 모든 마우스 질병 모델에서 약물 개발 화합물 스크리닝을 위해 이 경정맥 볼루스 주입 방법을 사용할 수 있습니다. 성공적인 IV 볼루스 주사 및 혈압 측정에는 많은 연습이 필요합니다. 시작하려면 마취실에서 마우스를 제거합니다.

마취된 마우스를 해부 현미경 아래의 주입 플랫폼에 누운 자세로 놓습니다. 1.5% 이소플루란이 함유된 노즈콘을 통해 마취를 유지하고 접착 테이프로 네 다리를 부드럽게 고정하여 몸을 고정시킵니다. 포비돈 요오드 용액과 70% 에탄올을 번갈아 가며 3회 사용하여 수술 부위를 부드럽게 문지릅니다.

0.5cm 세로로 절개한 후 겸자를 사용하여 근육과 지방 조직을 분리하고 오른쪽 외부 경정맥을 찾습니다. 그런 다음 28G 멸균 바늘을 경정맥에 삽입합니다. 바늘 경사가 위를 향하게 합니다.

주사기 플런저를 천천히 눌러 화합물을 정맥에 주입합니다. 역류를 방지하기 위해 바늘을 추가로 10초 동안 정맥 내에 두십시오. 바늘을 제거하고 면봉으로 주사 부위에 압력을 가하여 출혈을 막습니다.

5/0 봉합사로 피부를 봉합하고 침구 없이 종이 타월로 케이지 바닥을 덮은 상태에서 동물을 회복 케이지에 넣습니다. 먼저 카테터 삽입 부위에서 원하는 카테터 팁 위치까지의 거리를 측정합니다. 삽입 깊이를 시각적으로 표시하기 위해 두 개의 카테터 거리 표시를 표시하고, 건조를 방지하기 위해 수의학 연고를 쥐 눈의 안구 표면에 직접 바르십시오.

마우스를 해부 현미경 아래의 주입 플랫폼에 누운 자세로 놓습니다. 하악에서 흉골까지 피부를 절개한 후 침샘을 분리하고 기관을 노출시킵니다. 0.5ml의 PBS를 캐비티에 넣어 경동맥을 조작하면서 혈관 경련의 진행을 늦춥니다.

오른쪽 경동맥의 5mm 부분을 혈관 아래에 배경으로 흰 종이를 놓아 조심스럽게 분리합니다. 8-0 사용 봉합, 혈관의 두개골 끝을 막기 위해 영구 매듭을 묶습니다. 그런 다음 첫 번째 느슨한 매듭을 묶어 대동맥의 혈류를 일시적으로 차단합니다.

그런 다음 처음 두 봉합사 사이에 두 번째 느슨한 매듭을 묶습니다. 25G 바늘을 사용하여 영구 매듭과 두 번째 느슨한 매듭 사이의 혈관과 일직선으로 카테터를 통과할 수 있을 만큼 충분히 큰 작은 구멍을 만듭니다. 카테터 끝에서 1.5인치 떨어진 곳에서 카테터 끝을 잡고 동맥 구멍을 통해 카테터 끝을 부드럽게 삽입합니다.

카테터가 통과할 수 있는 카테터와 혈관 주위의 두 번째 느슨한 매듭을 조입니다. 첫 번째 느슨한 매듭을 부드럽게 풉니다. 압력 분석 결과 동맥 혈압 프로파일이 나타날 때까지 카테터의 표시에 따라 상행 대동맥 쪽으로 카테터를 계속 삽입합니다.

데이터 수집 시스템 및 소프트웨어를 사용하여 전신 혈압 데이터를 기록합니다. 카테터가 당겨질 수 있도록 중간 봉합사를 풉니다. 그런 다음 출혈을 방지하기 위해 첫 번째 느슨한 매듭을 조이고 경동맥에서 카테터를 빼냅니다.

주변 결합 조직에서 오른쪽 외부 경정맥을 조심스럽게 분리합니다. 8-0 사용 봉합하고 모든 작은 가지를 결찰하고 영구적 인 매듭을 묶어 혈관의 두개골 끝을 닫습니다. 그런 다음 선박의 꼬리 끝에 느슨한 매듭을 묶습니다.

25G 바늘을 사용하여 영구 매듭 근위부에 작은 구멍을 만듭니다. 카테터를 잡고 카테터를 정맥 절단부에 삽입하고 카테터와 혈관 주위의 꼬리 매듭을 조입니다. 카테터를 오른쪽 심장에 천천히 밀어 넣습니다.

카테터 마크를 기준으로 카테터 팁 깊이를 모니터링합니다. 소프트웨어의 압력파 추적에 따라 카테터 팁 위치를 평가합니다. 카테터의 끝이 우심실에 있으면 모니터에 일반적인 우심실 수축기 압력 추적이 표시됩니다.

카테터를 안정적으로 유지하고 5분 동안 데이터를 수집합니다. 녹음이 완료되면 카테터를 조심스럽게 당겨 빼내고 압력 녹음이 없는지 관찰합니다. 용기 주위에 꼬리 매듭을 묶습니다.

카테터를 PBS 용액에 다시 넣습니다. 정상 산소 제어 C57 블랙 식스 마우스에서 우심실 카테터를 삽입하는 동안 정맥계의 다른 영역에서 혈류역학적 파형의 변화에서 볼 수 있듯이 성공적인 우심실 접근이 이루어졌습니다. 전신 혈압 및 우심실 수축기 혈압은 저산소증 또는 정상 산소증에 노출된 후 4주 후에 닫힌 흉부 쥐에서 측정되었습니다.

정상산소증 그룹에 비해 저산소증 그룹에서 우심실 수축기 혈압이 유의하게 증가했다. 7C1/let-7 마이크로 RNA 화합물을 사용한 치료는 저산소증 그룹에 비해 우심실 수축기 혈압이 유의하게 감소한 반면, 전신 혈압은 어떤 그룹에서도 변하지 않았습니다. 폐쇄된 흉부 마우스의 적심실 수축기 혈압을 평가하는 것은 복잡한 적심실 해부학적 구조로 인해 어려운 일입니다.

조사관은 적심실 카테터 삽입에 대한 장기적이고 반복적인 시도를 피해야 합니다. 당사의 경정맥 및 볼루스 투여 절차는 모든 마우스 질병 모델에서 약물 개발 화합물 스크리닝에 사용할 수 있습니다. 복합 투여 플랫폼의 IV 루트를 사용하여 폐동맥 고혈압 치료법을 개발할 수 있습니다.