Name: 쥐의 자궁 이식을 위한 외과적 접근, 과제 및 해결 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 22 s
Description: 학습하세요 쥐의 오른쪽 자궁 이식을 위한 정밀 현미외과 기법으로, 중앙 복부절개와 혈관 해부를 통해 높은 출생률을 달성하는 방법을. 이 프로토콜은 임상 적용을 위한 연구 기반을 제공합니다.

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이 연구는 스위스 국립 과학 재단 (프로젝트 보조금 번호 310030_192736)의 지원을 받았습니다. 조직병리학적 지원을 해주신 취리히 대학교 수의병리학 연구소의 Frauke Seehusen 박사에게 감사드립니다.

모든 동물 실험은 스위스 연방 동물 규정에 따라 수행되었으며 취리히 수의과(n° 225/2019)의 승인을 받아 인간의 보살핌을 보장합니다. 암컷 처녀 루이스 쥐(체중 170-200g)와 암컷 처녀 브라운 노르웨이 쥐(170-200g)를 자궁 기증자/수혜자로 사용했으며 수컷 루이스 쥐(300-320g)를 짝짓기에 사용했습니다. 쥐는 12-15 개월에서 숙성되었습니다. 동물들은 상업적 출처 ( 재료 표 참조)에서 얻었으며 물과 표준 식품에 자유롭게 접근 할 수있는 통제 된 조건과 풍부한 환경에서 사육되었습니다.
1. 자궁 회수
참고: 절차에 대한 자세한 내용은 이전에 게시된 보고서12,13,15를 참조하십시오.
<ol><li>동봉된 플렉시글라스 용기(14cm x 25cm x 13cm) 내에서 이소플루란과 산소로 1-2분 동안 마취를 유도합니다(O2 중 5부피% 이소플루란).<ol><li>수술 30분 전에 계획된 복부 절개 부위에 부프레노르핀(0.05mg/kg)과 부피바카인(0.5%, 8mg/kg)을 피하 투여한다.</li>
		<li>전기 면도기로 쥐의 모든 복부 피부를 면도하십시오.</li>
		<li>수술 중 동물을 가열판에 고정시키기 위해 테이프를 사용하십시오. 양쪽 눈에 눈 연고를 바릅니다.</li>
		<li>작은 코 콘을 통해 지속적으로 투여하여 산소에 2-4 vol % isoflurane으로 시술 중 마취를 유지하십시오.</li>
		<li>특별한 도구 없이 임상 매개변수로 마취 깊이를 모니터링합니다(호흡수 ~70-120/min-마취 중 50%의 느린 속도 저하가 허용됨, 발가락 꼬집음으로 마취 깊이 확인, 점막의 색상은 파란색이나 회색이 아닌 분홍색이어야 함)16, 그에 따라 이소플루란 농도를 조정합니다. 참고: 선택 사항: 수술 중 빈번한 호흡 모니터링은 보조자의 도움을 받아 가능합니다.</li>
		<li>발가락 꼬집을 수행하여 마취 깊이를 확인하십시오.</li>
		<li>방부제와 70 % 알코올을 번갈아 가며 3 번 면봉으로 원을 그리며 복부 피부를 청소하십시오. 말리십시오.</li>
		<li>동물 위에 복부 창이 있는 멸균 드레이프( 재료 표 참조)를 놓습니다.</li>
	</ol></li>
	<li>중앙 개복술을 시행하십시오.<ol><li>xiphisternum 아래 0.5cm에서 hypogastrium쪽으로 6-8cm 정중선 긴 절개를 통해 복부를 엽니 다. 피부 절개에는 10번 메스를 사용하고 리네아 알바 절개에는 작고 날카로운 가위를 사용하십시오. 간이나 방광을 손상시키지 마십시오.</li>
		<li>면봉을 사용하여 내장을 복강 밖으로 옮기고 멸균 식염수를 적신 거즈로 부드럽게 덮고 더 나은 단열을 위해 멸균 비닐 봉지로 보호하십시오.</li>
		<li>왼쪽 및 오른쪽 복벽 폴더에 견인기 또는 클립( 재료 표 참조)을 삽입하여 복막 근육을 옆으로 유지하고 복부를 열어 자궁 및 관련 혈관에 대한 최적의 접근과 가시성을 얻습니다. 테이프로 클립/견인기를 고정합니다.</li>
		<li>수술 부위와 내장을 촉촉하게 유지하고 내장이 건조하지 않도록 예열 식염수를 바르십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>일반적인 자궁강과 자궁 경부와 오른쪽 자궁, 내부 및 총 장골 혈관을 포함한 혈관 척추경으로 오른쪽 자궁 뿔을 수확합니다.<ol><li>합자(4/0 polyglactin, 재료 표 참조), 소작 및 공통 자궁강에서 분기에 인접한 왼쪽 자궁 뿔을 절단합니다.</li>
		<li>자궁과 질을 둘러싼 과도한 지방을 제거하십시오. 알림: 자궁-혈관 시스템 주변의 지방을 유지하십시오.</li>
		<li>자궁 경부에 부착 된 방광을 해부하여 모든 배액 및 수유 방광 혈관을 소작하십시오. 소작하는 동안 자궁 경부와 질 사이에 적절한 거리를 유지하여이 두 구조에 대한 불필요한 소작을 피하십시오. 그렇지 않으면 이식편 괴사의 위험이 증가합니다. 알림: 대부분의 외과적 조작은 방광에 영향을 미칩니다. 혈관 클램프( 재료 표 참조)를 사용하여 방광을 꼬리 쪽으로 집어넣거나 당겨 excavatio vesicouterina를 더 잘 볼 수 있습니다.</li>
		<li>가능한 한 자궁 경부 원위까지 요관 수준에서 하강하는 자궁 혈관을 소작하고 절단하십시오. 참고: 분열하는 동안 질과 자궁경부 주변의 미세 순환을 가능한 한 많이 유지하십시오.</li>
		<li>미래 이식편의 자궁경부/질 부분을 직장 부착물과 질주위 및 경추주위 인대에서 분리합니다. 참고: 이식편 질에 소작을 하지 마십시오.</li>
		<li>자궁 경부의 꼬리 2-3mm 주위에 투열 요법을 통해 질을 조심스럽게 해부합니다. 참고: 질 내강 내부에는 융모(자궁경부)가 보이지 않습니다.</li>
		<li>자궁 동맥과 정맥을 모두 기원 지점에 배치합니다. Ligate(8/0 폴리아미드, 재료 표 참조), 둔부 혈관과 자궁 혈관의 꼬리에 있는 모든 혈관을 소작 및 절단합니다. 참고: 일반적으로 대정맥에 대한 대정맥 꼬리의 직접 결찰이 가능합니다.</li>
		<li>무딘 해부에 의해, 대동맥과 대정맥의 분기점에서 자궁 혈관의 분열에 이르기까지 일반적인 장골 혈관을 서로 분리시킵니다. 참고: 하나 또는 두 개의 인접한 림프절을 제거하여 해당 부위에 대한 더 나은 외과적 접근을 얻을 수 있습니다.</li>
		<li>자궁 - 난소 척추경을 같은 수준으로 소작 한 후 나팔관에서 3mm 떨어진 오른쪽 자궁 뿔을 절제하십시오. 이것은 이식편 자궁 뿔을 수용자 자궁 뿔의 상부에 문합하는 것을 가능하게 합니다.</li>
		<li>합자(8/0 폴리아미드)를 대동맥 및 기갑 분기점 근위부에 있는 오른쪽 총장골 동맥 및 정맥 주위에 직접 배치합니다. 분기점에 인접한 오른쪽 총 장골 동맥에 작은 절개 (0.5-1 mm)를하고 구부러지고 무딘 30G 바늘 또는 곧고 무딘 25G 바늘을 내강에 삽입합니다 (세척 용). 합자(6/0 폴리아미드)로 고정합니다. 알림: 추가 옵션은 불독 cl로 추가 고정하는 것입니다.amp 바늘 및/또는 용기의 변위를 방지합니다.</li>
		<li>홍조 동안 유출을 가능하게 하기 위해 오른쪽 총장골 정맥에서 합자의 꼬리 부분에 있는 총장골 정맥을 해부합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>아래 단계에 따라 이식편을 세척하십시오.<ol><li>약 9mL의 차가운 링거 용액(RHX: 50IU/mL 헤파린 및 0.4mg/mL 자일라진이 보충된 링거)과 함께 3mL 주사기를 사용하여 6mL/분의 유속으로 자궁을 수동으로 세척합니다. 헤파린(50IU/mL)과 자일라진(0.4mg/mL)이 보충된 장기 보존 용액 6mL로 다시 씻어냅니다( 재료 표 참조). 알림: 높은 세척 압력을 피하고 바늘을 적절하게 배치하십시오.</li>
		<li>자궁 조직이 창백 해지면 이식을 제거하십시오. 복부 대동맥의 분기점에서 합자의 꼬리 방향으로 총 장골 동맥을 자릅니다.</li>
	</ol></li>
	<li>이식 전에 백 테이블 준비 및 보관을 위해 차가운 장기 보존 용액(4°C)에 이식을 놓습니다.</li>
	<li>이식편을 제거한 후, 먼저 이소플루란 설정을 최대로 돌린 다음 양측 기흉을 유도한 후 방혈을 유발하여 동물을 안락사시킨다17.</li>
</ol>2. Syngeneic 자궁 이식
참고: 절차에 대한 자세한 내용은 이전에 게시된 보고서12,13,15를 참조하십시오.
<ol><li>마취를 유도하고 단계 1.1에서 언급한 대로 동물을 준비한다.<ol><li>수술 30분 전에 효과적인 진통제(1.1.1단계에 설명된 대로)와 200IU/kg 고분자량 헤파린을 투여합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>중앙 개복술을 시행하십시오.<ol><li>xiphisternum 아래 0.5cm에서 hypogastrium쪽으로 6-8cm 길이의 정중선 절개를 통해 복부를 엽니 다. 피부 절개에는 10번 메스를 사용하고 리네아 알바 절개에는 작고 날카로운 가위를 사용하십시오. 간과 방광을 손상시키지 마십시오.</li>
		<li>면봉을 사용하여 소장을 복강 밖으로 옮기고 멸균 된 축축한 거즈로 싸서 더 나은 단열을 위해 멸균 비닐 봉지로 덮으십시오.</li>
		<li>왼쪽 및 오른쪽 복벽 폴더에 견인기 또는 클립을 삽입하여 복막 근육을 옆으로 유지하고 복부를 열어 자궁 및 관련 혈관의 최적 접근과 가시성을 얻습니다. 테이프로 클립/견인기를 고정합니다.</li>
		<li>수술 부위와 내장을 촉촉하게 유지하고 내장이 건조하지 않도록 예열 식염수를 바르십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>직장과 방광에서 질의 상부 1/3을 해부하고 동원하여 자궁 적출술을 시행하십시오.<ol><li>자궁, 자궁경부, 질 주위의 미세혈관을 소작합니다. 자궁 불길한 자궁의 미세 순환을 보호하기 위해 장기에 가까운 주변 구조에서 자궁을 자르고 분리하십시오.</li>
		<li>주변의 지방 조직을 제거하십시오.</li>
		<li>소작으로 왼쪽 뿔을 절단하십시오. 오른쪽에는 자궁 이식편에 대한 문합을 위해 자궁 상부의 7-8mm 부분을 보존하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>자궁 이식을 수행하십시오.<ol><li>자궁 혈관의 기원에서 대동맥/기갑 분기점까지 올바른 공통 장골 혈관을 동원하고 분리합니다.</li>
		<li>복강에 이식편을 배치하십시오. 차가운 장기 보존 용액에 담근 거즈에 이식편을 싸십시오. 참고: 이식편은 문합 중에 차갑게 유지해야 합니다.</li>
		<li>비외상성 혈관 클램프를 양쪽의 오른쪽 총장골 정맥에 배치하여 미래의 문합 부위를 구성합니다. 참고: 마취를 1-1.5vol% 이소플루란으로 낮추어 심장 예압의 급격한 감소와 그에 따른 저혈압에 적응합니다.</li>
		<li>이식 정맥의 개구부보다 약간 큰 슬릿을 일반적인 장골 정맥으로 자릅니다.</li>
		<li>이식편 정맥을 배치합니다.</li>
		<li>하나의 스테이 봉합사(10/0 폴리아미드, 재료 표 참조)를 오른쪽 총장골 정맥의 슬릿 각 모서리에 놓습니다. 알림: 더 나은 조정과 지갑 끈 효과를 방지하기 위해 꼬리 모서리의 봉합사 매듭을 느슨하게 유지하십시오.</li>
		<li>혈전증을 예방하기 위해 시술 중에 냉각 된 RHX로 문합 부위를 정기적으로 세척하십시오.</li>
		<li>이식 정맥의 한쪽을 6-8개의 연속 봉합 루프로 수혜자의 정맥에 문합합니다(그림 1). 참고: 두개골 스테이 봉합사(10/0 폴리아미드)로 시작하여 먼저 혈관의 인바운드 부분을 문합합니다.</li>
		<li>이번에는 바깥 쪽에서 시작하여 같은 방식으로 선박의 다른 쪽을 문합하십시오.</li>
		<li>두개골 스테이 봉합사에 매듭을 묶은 다음 꼬리 스테이 봉합사(10/0 폴리아미드)에 매듭을 묶고 양쪽의 문합을 마친 후 매듭을 묶습니다. 알림: 지갑 끈 효과를 방지하기 위해 필요한 만큼만 연속 봉합사를 조입니다.</li>
		<li>비외상성 혈관 클램프를 양쪽의 오른쪽 총장골 동맥에 배치하여 미래의 문합 부위를 구성합니다.</li>
		<li>중단된 봉합사(10/0 폴리아미드)를 사용하여 8-10 루프를 통해 동맥 문합(오른쪽 총장골동맥[RCIA])을 수행합니다. 참고: 중단된 봉합사는 연속 봉합사보다 제어하기 쉽습니다("물고기 입" 기술에서 선택 사항)18. 시술 중 냉각 된 RHX로 문합 부위를 지속적으로 플러싱하면 혈전증을 예방할 수 있습니다. 연속 봉합사를 사용할 때는 정맥 문합과 유사하게이 단계를 수행하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>이식편 재관류를 수행합니다.<ol><li>두 문합 부위가 모두 특허로 나타나고 출혈이 중단되면 이식편 혈관의 혈관 클램프를 풉니다(그림 2).</li>
		<li>이식편에 붉어짐, 정맥 채우기 또는 이식 동맥의 맥동과 같은 재관류 징후가 있는지 검사합니다.</li>
		<li>6-7개의 관내(6/0 폴리글락틴) 중단 봉합사를 사용하여 이식의 질 커프를 수혜자의 질 금고에 연결합니다. 알림: 먼저 12시 위치에서 단일 봉합사로 시작하고 다음 봉합사를 10시 및 1시 위치에 놓습니다. 9시와 3시 방향의 두 봉합사는 앞줄19,20의 봉합사 후에 묶어야합니다.</li>
		<li>5-7개의 중단된 봉합사(7/0 폴리아미드)를 사용하여 수용자 자궁의 나머지 두개골 자궁 부분에 이식편 자궁 뿔을 끝에서 끝까지 문합합니다. 알림: 루멘을 꿰매지 마십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>연속 봉합사로 복부를 닫으십시오. 근육층을 봉합하기 위해 4/0 폴리 글락틴을 사용하고 피부에 6/0 폴리 아미드 또는 수술 상처 클립을 사용하십시오.</li>
	<li>이식이 완료되면 동물이 따뜻한 케이지에서 회복되도록하십시오. 흉골 누운 능력을 회복 할 때까지 동물과 함께 있고 완전히 회복 될 때까지 단일 주택을 유지하십시오. 부프레노르핀(0.05mg/kg)과 적절한 NSAID를 피하 투여하여 근수술진통 치료를 제공하되, 첫 마취 투여 후 4-8시간 전에는 투여하지 마십시오. 수술 후 3일 동안 식수(1mg/kg, 경구, 160mL 음용수(0.3mg/mL)에 5mL 부프레노르핀)를 통해 부프레노르핀을 지속적으로 제공합니다.</li>
	<li>피부 봉합사는 보증 후 10-14 일 후에 제거됩니다.</li>
</ol>

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저자는 경쟁 이익이 없다고 선언합니다.

여기에 제시된 프로토콜은 쥐의 자궁 이식 이면에 있는 외과적 접근에 대한 자세한 지침을 제공합니다. 이 프로토콜은 UTx 및 후속 짝짓기 후 출생 확률을 높이도록 최적화되었습니다. 원래 프로토콜은 Akouri et al.10의 마우스 작업에서 영감을 받아 Brännström 그룹12,13에서 인수되었으며 지난 몇 년 동안 저자의 경험을 기반으로 수정되었습니다. 따라서 수정은 실패한 이식에서 재현 가능한 결과로의 발전을 반영하는 진정한 학습 곡선에 의해 주도되었습니다.
결정적인 주요 수정은 다음과 같습니다: (1) 장기 회수 및 문합 중에 세척 용액에 자일라진을 첨가하여 혈전 위험을 감소시키는 혈관 확장을 자극했습니다. (2) 동맥 종단 간 문합을 위한 중단 봉합사의 사용. 중단 된 봉합사는 개통에 대한 외과 적 통제를 증가시킬뿐만 아...

자궁 이식(UTx)은 절대 자궁 인자 불임(AUFI)에 대한 새로운 치료법입니다. AUFI는 자궁의 부재(선천적 또는 후천적) 또는 기형으로 인해 발생하며 전 세계 여성의 3%-5%에 영향을 미칩니다1. 윤리적, 법적 또는 종교적 이유로 모성에 대한 욕구가 있지만 AUFI2로 고통받는 많은 여성의 입양이나 대리모를 배제합니다. 이 여성들에게 UTx는 자신의 가족을 시작할 수 있는 유일한 옵션으로 남아 있습니다. UTx는 엇갈린 성공을 거두었지만 클리닉에 적용되었습니다. 이 절차는 기술적으로 까다롭고 임상 확립을 위해 꾸준한 개선이 필요합니다.
2014년, 살아있는 기증자(LD)로부터 자궁을 이식하여 성공적인 임신을 이룩한 것은 스웨덴의 선구적인 그룹인 Brännström3에 의해 수행되었습니다. 사망한 기증자(DD)의 UTx 이후 첫 번째 출생은 2016년 브라질에서 보고되었습니다4. 2021년까지 전 세계적으로 80개 이상의 UTx가 수행되었지만 성공률은 약 50%이고 대다수는 LD에서 이식편이 나왔습니다1.
생명을 구하는 것은 아니지만 UTx는 자신의 자손에 대한 욕구를 충족시키기 위해 점점 더 인기 있는 절차입니다. 따라서 이식편에 대한 수요가 증가하여 DD 기증이 미래의 초점이 되고 있습니다. 그러나 DD 기증은 상당히 긴 추위(심장사의 경우 따뜻함) 허혈성 노출로 인해 복잡하여 이식편 기능 장애 및 거부 반응의 위험이 높아집니다 5,6. 수술 기술, 까다로운 호환성 일치 및 관련 면역 억제는 UTx 결과와 관련하여 중요한 문제로 남아 있습니다7.
클리닉에서 위의 위험을 관리하기 위해서는 허혈 및 면역 억제 탐색을 위한 적절한 동물 모델이 필요합니다. 동물 모델에 대해 임상적으로 가장 관련성이 높은 종점은 성공적인 출산입니다. 현재까지, 실험적인 UTx에 따른 임신은 생쥐, 쥐, 양, 토끼, 시노몰구스 원숭이8에서 이루어졌다. 더 큰 동물은 수술 기술을 습득하고 최적화하도록 예정되어 있지만 설치류는 짧은 임신 기간이라는 뚜렷한 이점이 있습니다. 따라서 설치류 모델은 실질적, 재정적, 윤리적 고려 사항에서 우수하다9. 그러나 생쥐에서 UTx의 주요 과제는 작은 해부학이며, 매우 까다로운 수술은 쥐 UTx10의 낮은 재현성과 관련이 있습니다. 대조적으로, 쥐는 외과적으로 더 쉽게 접근할 수 있고 짧은 임신 기간의 이점을 유지합니다. 따라서 쥐는 UTx9의 선택 모델이되었습니다. Wranning et al. 2008년에 동소 UTx의 쥐 모델을 도입했으며, 이 모델을 사용하여 UTx 및 자연 교배 후 첫 번째 출생이 보고되었습니다11,12,13. 후속 연구는 인간에서 UTx를 구현하는 데 결정적인 기여를 했습니다9.
그럼에도 불구하고 UTx는 쥐에게 여전히 도전적이며 아직 소수의 그룹만이 이 수술 기술을 마스터했습니다. 연구자들 사이에서 쥐 UTx의 확산에 대한 한 가지 관련 장애물은 개별 미세 수술 단계, 함정 및 문제 해결을 위한 적절한 조치에 대한 정확한 설명이 부족하다는 것입니다14. 이 프로토콜은 이 동물 모델을 향후 연구에 쉽게 구현할 수 있도록 이 매우 복잡한 미세 수술 절차에 대한 자세한 지침을 제공하는 것을 목표로 합니다.

<table><tbody><tr><td>측면 가위 5mm</td><td>F.S.T</td><td>15008-08</td><td></td></tr><tr><td>큰 종이 클립</td>에 각을 이루<td>지 않음</td><td></td><td>견인</td></tr>기로 <tr><td>사용 무딘 굽힘 바늘 G30</td><td>Unimed S.A.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>부피바카인 0.5%</td><td>신테카</td><td></td><td></td></tr><tr><td>부프레노르핀 0.3 mg/mL</td><td>템게식</td><td></td><td></td></tr><tr><td>도시에나델 G25</td><td>H.SIGRIST & PARTNER AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5SF 집게</td><td>F.S.T</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 10/0</td><td>Ethicon</td><td>2810G</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 6/0</td><td>Ethicon</td><td>667H</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 7/0</td><td>Ethicon</td><td>EH7446H</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 8/0</td><td>Ethicon</td><td>2808G</td><td></td></tr><tr><td>Femal Brown 노르웨이 쥐 (150-170 g)</td><td>Janvier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Femal Lewis Rats (150-170 g)</td> <td>Charles River Deutschland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fine Scissors - Sharp</td><td>F.S.T</td><td>14060-09</td><td>다른 작은 가위도 작동합니다</td></tr><tr><td>Halsey Micro Needle Holder</td><td>F.S.T</td><td>12500-12</td><td>다른 작은 needholder도 작동합니다</td></tr><tr><td>Heparin Natrium 25000 I.E./ 5 mL</td><td>B. Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Institute Georges Lopez 관류 용액 ( IGL)</td><td>Institute Georges Lopez</td><td></td><td>장기 보존 솔루션&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>수컷 루이스 쥐 (300-320 g)</td><td>Charles River Deutschland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micro Serrefines 13 mm</td><td>F.S.T</td><td>18055-04&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Micro Serrefines 16 mm gebogen</td><td>F.S.T</td><td>18055-06</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Serrefine 클램프 애플리케이터와 잠금장치&nbsp; &nbsp;</td><td>F.S.T</td><td>18056-14&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>엠&옴; lnlyncke Op 타월</td><td>M&ouml; lnlyncke</td><td>800300</td><td>멸균 드레이프</td></tr><tr><td>NaCl 0.9%</td><td>B.Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Octenisept</td><td>Sch&uuml; lke</td><td></td><td></td></tr><tr><td>종이 테이프</td><td>Tesa</td><td></td><td>동물 고정용</td></tr><tr><td>Philips Avent Schneller Flaschenw&auml; rmer SCF358/02</td><td>Philips</td><td>12824216</td><td></td></tr><tr><td>Ringerfundin</td><td>B.Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rompun 2%</td><td>Bayer</td><td></td><td>Xylazine</td></tr><tr><td>둥근 손잡이 바늘 홀더</td><td>F.S.T</td><td>12075-12</td><td></td></tr><tr><td>둥근 손잡이 바늘 홀더</td><td>F.S.T</td><td>12075-12</td><td></td></tr><tr><td>S& T 혈관 확장 집게 - 각도 45&deg;</td><td>F.S.T</td><td>00276-13</td><td></td></tr><tr><td>Sacryl Naht</td><td>KRUUSE</td><td>152575</td><td></td></tr><tr><td>Scapel No 10</td><td>Swann Morton</td><td>201</td><td></td></tr><tr><td>Small Histo-Container</td><td></td><td></td><td>모든 작은 히스토 컨테이너는 이식편의 냉장 보관에 적합합니다</td></tr><tr><td>Small Plastik Bags</td><td></td><td></td><td>모든 투명 비닐 백은 괜찮습니다</td></tr><tr><td>멸균 면봉</td><td>Lohmann-Rauscher</td><td></td><td>모든 멸균 면봉은 미세</td></tr>합니다 <tr><td>멸균 거즈</td><td>Lohmann-Rauscher</td><td></td><td>모든 멸균 거즈는 미세</td></tr>합니다 <tr><td>스트레이트 가위 8mm</td><td>F.S.T</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>수술 현미경 &ndash; SZX9</td><td>Olympus</td><td>OLY-SZX9-B</td><td></td></tr><tr><td>Sutter Non Stick GLISS 0.4 mm</td><td>Sutter</td><td>78 01 69 SLS</td><td></td></tr><tr><td>봉합 묶는 펑크&nbsp;</td><td>F.S.T</td><td>00272-13</td><td></td></tr><tr><td>ThermoLux 온난화 매트</td><td>ThermoLux</td><td></td><td></td></tr><tr><td>피부용</td><td></td><td></td> 조직 <td>펜치 모든 티슈 펜치는 세밀한</td></tr><tr><td>Vesseldilatator 펜치</td><td>F.S.T</td><td>00125-11</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl&nbsp; 플러스 4/0</td><td>Ethicon</td><td>VCP292H</td><td></td></tr></tbody></table>

쥐의 자궁 이식을 위한 외과적 접근, 과제 및 해결 방법

Surgical Approach, Challenges, and Resolutions for Uterus Transplantation in Rats

자궁 이식(UTx)은 절대 자궁 인자 불임(AUFI)이 있는 여성을 치료하기 위한 새로운 접근 방식입니다. 여성의 약 3%-5%가 AUFI를 앓고 있습니다. 이 여성들은 UTx가 출현 할 때까지 아이를 가질 수있는 선택권을 박탈 당했습니다. UTx의 임상적 적용은 동물에 대한 실험적 연구에 의해 주도되었으며, 최초의 성공적인 UTx는 쥐에서 달성되었습니다. 생리학적, 면역학적, 유전적, 생식적 특성을 감안할 때 쥐는 이러한 이식에 적합한 모델 시스템입니다. 특히, 실험적 UTx의 일반적인 종점은 출산을 통한 성공적인 임신이기 때문에 짧은 임신 기간은 분명한 이점입니다. 쥐 모델의 가장 큰 과제는 고급 미세 수술 기술과 경험이 필요한 작은 해부학으로 남아 있습니다. UTx가 클리닉에서 임신으로 이어졌지만 절차가 확립되지 않았으며 지속적인 실험 최적화가 필요합니다. 여기에서는 쥐 UTx에 대한 필수 문제 해결을 포함하여 자세한 프로토콜이 제시되며, 이는 이러한 유형의 미세 수술에 대한 경험이 없는 사람들이 전체 절차를 더 쉽게 이해할 수 있도록 할 것으로 기대됩니다.

두 그룹의 쥐의 결과가 제시됩니다. UTx는 수정 전(그룹 1, n = 8) 및 후(그룹 2, n = 8) 프로토콜 조정(표 1)을 수행하여 수정의 효과를 입증했습니다(수정에 대한 설명은 토론 참조)12,15,21.
쥐 UTx의 결과는 세 가지 주요 단계와 관련이 있습니다. 첫 번째 단계는 UTx에서 성공적으로 복구하는 것입니다. 일반적으로 수혜자는 수술 후 처음 2일 이내에 회복되어야 합니다. 두 번째 단계는 수술 후 2 주 후 이식편의 건강 상태와 관련이 있으며, 이는 짝짓기 과정에 포함시키는 것을 결정합니다 (표 2). 세 번째 단계는 자발적인 짝짓기 후 생식력의 증거로 성공적인 출산을 포함합니다.
<p clas...

본 프로토콜은 쥐의 성공적인 자궁 이식(UTx)을 위한 모든 필수 단계를 설명합니다. 래트 모델은 UTx의 임상적 구현을 촉진하는 데 적합한 것으로 입증되었습니다. 그러나 쥐 UTx는 신중한 지침이 필요한 매우 복잡한 절차입니다.

Uterine transplantation (UTx) is a new approach for treating women with absolute uterine factor infertility (AUFI). An estimated 3%-5% of women suffer ...

오른쪽 자궁 이식은 소수만이 마스터하는 가장 복잡한 미세 수술 절차 중 하나에 속합니다. 우리의 프로토콜은 우측 자궁 이식을 실험 단계에서 적용 가능한 방법론으로 전환합니다. 우리의 프로토콜은 자궁 이식 후 높은 출생률로 이어집니다.곧 실제 연구를 위한 우측 자궁 이식의 적용을 촉진할 것입니다. 인내심과 체력은 전체 절차에서 중요한 특성입니다. 마취 된 쥐에서 중앙 개복술을 시행 한 후 혈관 척추 경부와 함께 자궁강과 자궁 경부가있는 오른쪽 자궁 경적을 수확합니다.상처를 소작하고 왼쪽 자궁 뿔을 4-0 폴리갈락틴 봉합사로 결찰합니다. 이제 일반적인 자궁강에서 분기에 인접한 왼쪽 자궁 뿔을 절단하십시오. 미래 이식편의 자궁 경부와 질 부분을 직장 부착물에서 분리하십시오.paravaginal 및 paracervical ligaments에서 미래 이식편을 분리하십시오. 투열 요법을 사용하여 자궁 경부의 꼬리 약 2-3 밀리미터 정도에서 질을 해부합니다. 자궁 동맥과 정맥의 기원을 찾으십시오.자궁 혈관의 꼬리에 있는 모든 혈관을 8-0으로 Ligate 폴리 아미드 장소. 장소 8-0 폴리아미드 합자는 대동맥 및 기과 분기점에 근접한 오른쪽 총장골 동맥과 정맥 바로 주위에 있습니다. 분기점에 직접 인접한 오른쪽 총 장골 동맥에 0.5-1 밀리미터 길이의 절개를하십시오.뭉툭한 직선 25게이지 바늘을 루멘에 삽입하여 씻어냅니다. 6-0 폴리아미드 합자로 바늘을 고정합니다. 세척하는 동안 유출을 가능하게하려면 오른쪽 총 장골 정맥의 합자에 꼬리 총 장골 정맥을 해부하십시오.3 밀리리터 주사기를 사용하여 차가운 링거 용액으로 자궁을 씻어 낸 다음 헤파린과 자일라진이 보충 된 장기 보존 용액을 만듭니다. 복부 대동맥 분기점에서 합자의 일반적인 장골 동맥 꼬리를 자릅니다. 그런 다음 뭉툭한 절개를 사용하여 자궁 혈관의 분할에서 대동맥 정맥 분기점에서 일반적인 장골 혈관을 절단합니다.그리고 자궁 조직이 창백 해지면 이식을 제거하십시오. 이식 전에 백 테이블 준비 및 보관을 용이하게 하기 위해 이식을 차가운 장기 보존 용액에 넣습니다. 이식편을 복강에 배치하고 이식편 정맥을 배치한 후 10-0 폴리아미드 스테이 봉합사 1개를 두개골 모서리에 배치하고 느슨한 봉합사 1개를 오른쪽 총장골 정맥 슬릿의 꼬리 모서리에 놓습니다.이식 정맥의 한쪽을 6-8 개의 연속 봉합사 루프를 사용하여 수혜자의 정맥에 문합합니다. 유사하게, 바깥 쪽에서 시작하여 혈관의 다른면을 문합하십시오. 그런 다음 10-0 폴리아미드를 사용하여 두개골 스테이 봉합사에 하나의 매듭을 묶고 꼬리 스테이 봉합사에 다른 매듭을 묶습니다.8-10개의 루프가 있는 오른쪽 총장골 동맥에서 10-0 폴리아미드 중단 봉합사를 사용하여 동맥 문합을 수행합니다. 이식편 관류를 시작하려면 부위가 특허로 나타나면 이식편 혈관의 혈관 클램프를 풀고 이식편에 재관류 징후가 있는지 확인하십시오. 6-7 개의 6-0 폴리 갈 락틴 중단 봉합사를 사용하여 이식의 질 커프를 질 금고에 연결하십시오.5 내지 7개의 폴리아미드 7-0 중단 봉합사를 사용하여, 나머지 수용자 두개골 자궁 분절에 대한 그래프 자궁 뿔 끝단을 문합한다. 쥐 사후 작업을 모니터링합니다. 자궁 이식 후, 두 마리의 그룹 1 쥐가 임신의 징후를 보였다.그러나 검사 결과 자궁이 확장된 것으로 밝혀져 새끼는 정상적으로 발달했지만 쥐는 새끼를 분만하지 못했습니다. 태아의 조직 학적 검사는 새끼가 분만까지 발달 한 것으로 나타났습니다. 5마리의 그룹 2 쥐가 임신을 보였고 3마리는 새끼를 낳았습니다.루이스 여성은 두 번 출산했습니다. 첫 번째 새끼의 모든 새끼는 살아남았고 두 번째 새끼의 새끼 세 마리 중 두 마리만 살아남았습니다. 갈색 노르웨이 암컷도 두 번 출산했으며 살아남은 모든 새끼는 정상적인 발달을 보였습니다.프로토콜 적응은 직접적인 수술 결과와 자궁 이식 후 출생률을 모두 개선했습니다. 2주 이식편 생존율은 그룹 1의 50%에서 그룹 2의 75%로 증가했습니다. 더 나은 조정과 오므린 끈 효과를 방지하기 위해 꼬리 모서리의 봉합사 매듭을 느슨하게 유지하는 것이 중요합니다.오른쪽 자궁 이식은 생체 외 피하 장기 관류 또는 장기 손상 완화를 위한 기타 기술과 같은 자궁 이식 결과를 개선할 수 있는 이식 전 접근 방식을 평가하는 데 특히 적합합니다. 일반적으로 동물에서의 자궁 이식은 클리닉에서 자궁 이식을 확립하기 위해 도입되어야 하며 필수입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 시궁창에서 orthotopic 간 이식을위한 클래식 두 커프스 기술의 쉬운 설정 개정을 제시.

쥐에게 Orthotopic 간 이식

쥐의 Orthotopic 간 이식은 생명 의학 연구에 필수적인 실험 모델입니다. 여기 50 % 부분 이식을 사용하여 간장 동맥 재건과 orthotopic 쥐의 간 이식에 대한 수술 절차를 제시한다.

간 간선 재건과 부분 Orthotopic 간 이식의 쥐 모델에 대한 외과 절차

Suprahepatic 베 나 정 맥 (SHVC)의 재건 쥐 orthotopic 간 이식에 어려운 단계에 남아 있다. 이 문서에서 우리는 소설 자석 문 합 기술을 사용 하 여 쥐에서 SHVC 재건에 대 한 단계별 프로토콜을 보여줍니다.

Orthotopic의 쥐 모델 간 이식 Suprahepatic 베 나 정 맥 재건에 대 한 새로운 자석 문 합 기술을 사용 하 여

이 원고와 프로토콜의 목적은 쥐에서 직교 신장 이식의 외과 수술을 상세히 설명 하 고 입증 하는 것입니다. 이 방법은 기증자 신장의 정확한 관류를 달성 하 고 정 맥 및 요 추 팔목 문 합 기술을 사용 하 여 재 관류 시간을 단축 하기 위해 단순화 된다.

직교 쥐 신장 이식: 새롭고 단순화 된 외과 접근

이 프로토콜은 심장 판막의 동종 활성에 대한 연구를 허용하기 위해 신장 캡슐 아래에 대동맥 판막 전단지를 이식하는 간단하고 효율적인 방법을 설명합니다.

설치류의 이종 주제 심장 판막 이식을위한 단순화 된 모델

쥐 동위원소 신장 이식 모델은 신장 동종이식편 거부의 메카니즘을 조사하는 데 기여한다. 현재의 모델은 신장 이식의 종단 간 해부학과 요관 방광 문합술의 종단 간 "터널"방법을 사용하여 혈액 공급 및 정맥 역류에 간섭하지 않고 수혜자의 생존을 증가시킵니다.

신장 동종이식편 거부반응을 위한 쥐 동위원소 신장 이식 모델

골반 장기 탈출증은 전 세계 수백만 명의 여성에게 영향을 미치지만 일부 일반적인 외과 적 개입은 실패율이 40 %에 이릅니다. 이 상태를 조사하기 위한 표준 동물 모델의 부족은 진행을 방해합니다. 우리는 uterosacral ligament suspension 및 in vivo tensile testing의 모델로 다음 프로토콜을 제안합니다.

자궁천골 인대 서스펜션 쥐 모델 개발

이 연구는 중증 대동맥 협착증 또는 저형성 좌심 증후군과 같은 선천성 심장 결함에서 볼 수 있는 내피에서 중간엽으로의 전이 유도 섬유증의 동물 모델을 제시하여 상세한 조직학적 조직 평가, 조절 신호 경로 식별 및 치료 옵션 테스트를 가능하게 합니다.

내피에서 중간엽으로의 전환 연구를 위한 신생아 이종성 쥐 심장 이식 모델

여기에서는 쥐 자궁내막 상피 줄기세포(reESC)를 분리 및 배양하여 쥐 자궁내막 오가노이드를 생성하는 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 자궁내막 질환의 체외 연구를 용이하게 하여 유전자 편집 및 기타 세포 조작을 가능하게 합니다.

쥐 자궁내막 상피 줄기세포에서 쥐 자궁 오가노이드의 생성 및 특성화

이 프로토콜은 쥐의 정소성 좌측 폐 이식을 위한 개선된 기술을 설명하며, 수술의 어려움을 줄이고 생존율을 개선하는 데 중점을 둡니다.

쥐의 정소성 좌측 폐 이식

학습하세요 쥐의 오른쪽 자궁 이식을 위한 정밀 현미외과 기법으로, 중앙 복부절개와 혈관 해부를 통해 높은 출생률을 달성하는 방법을. 이 프로토콜은 임상 적용을 위한 연구 기반을 제공합니다.

쥐의 자궁 이식을 위한 외과적 접근, 과제 및 해결 방법

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