마우스에서 연속 국소 키메라 항원 수용체(CAR) T 세포 주입을 위한 두개내 캐뉼라 이식

이 프로토콜은 중추신경계 종양에 대한 CAR T 세포 요법의 국소 전달을 테스트하기 위해 진행 중인 임상 시험에 사용되는 심실내 카테터 시스템을 복제합니다. 이 기술의 주요 장점은 여러 침습적 수술 절차를 수행하지 않고도 국소 국소 CAR T 세포 요법을 여러 번 반복 투여할 수 있다는 것입니다. 이 시스템은 서로 다른 전달 부위에서 서로 다른 치료법을 조사하는 데 사용될 수 있으므로 신경 과학의 수많은 연구 영역에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다.

시작하려면 머리를 깎은 마취 마우스를 수술대에 놓고 주걱을 사용하여 정위 팔의 바닥을 부드럽게 엽니다. 집게로 캐뉼라를 삽입하고 흰색 플라스틱 부분의 절반에서 2/3까지 캐뉼라의 5mm가 개구부 바닥에서 돌출 될 때까지 암의 나사를 조여 고정하십시오. 마우스의 윗니를 정위 장치의 바이트 바에 삽입하고 고정합니다.

노즈 콘을 앞으로 당기고 조여 마우스가 이소플루란을 흡입하도록 합니다. 그런 다음 과도한 압력을 피하면서 이어 커프 또는 이어 바를 사용하여 따뜻하게 한 입체 장치에 마우스를 장착하십시오. 수술 부위를 소독하고 원고에 설명 된대로 두개골과 평행하게 절개하십시오.

면봉을 사용하여 근막을 밀어냅니다. 두개골 판이 만나는 전방 및 후방 표시에 해당하는 두개골의 랜드 마크, bregma 및 lambda를 식별하십시오. 아크릴을 부착 할 표면을 만들려면 메스를 사용하여 두개골을 가로 질러 여러 개의 슬릿을 부드럽게 만듭니다.

정위 팔을 사용하여 캐뉼라를 관심있는 랜드 마크로 현지화하십시오. 캐뉼라 팁을 두개골 표면에서 1-2 밀리미터 위로 올리고 원하는 좌표로 이동하십시오. 18게이지 바늘이나 수술용 드릴을 사용하여 캐뉼라가 들어가는 곳에서 노출된 두개골에 두 개의 나사 구멍을 만들어 캐뉼라를 위한 충분한 공간을 확보합니다.

드릴이 두개골에 부착될 때까지 나사 구멍을 통해 드릴을 비틀십시오. 일자 드라이버를 사용하여 두 개의 나사를 구멍에 삽입하고 조입니다. 그런 다음 나사를 부드럽게 위로 당겨 고정되었는지 확인합니다.

캐뉼라를 삽입하려면 18 게이지 바늘이나 수술 용 드릴을 사용하여 식별 된 좌표로 두개골에 구멍을 뚫습니다. 정위 암을 사용하여 캐뉼라를 원하는 DV 좌표로 내립니다. 도자기 12 웰 플레이트에 약 0.3 그램의 아크릴 수지 분말과 10-15 방울의 액체에서 준비된 점성 백색 물질을 1 밀리리터 주사기에 넣는다.

두개골을 코팅하고 캐뉼라와 나사 주변의 공간을 채웁니다. 시멘트가 유연할 때 정위 암의 나사를 풉니다. 주걱을 부드럽게 사용하여 하단 개구부의 홀더에서 캐뉼라를 풀고 정위 팔을 마우스에서 빼냅니다.

시멘트가 건조되면 더미 캐뉼라를 가이드 캐뉼라에 삽입하고 시계 방향으로 돌려 단단히 고정합니다. 절차가 완료되면 회복을 위해 마우스를 따뜻하게 한 홈 케이지로 되돌립니다. 치료 캐뉼라를 준비하려면 상단을 PKG 튜브에 삽입하십시오.

그런 다음 치료 주사기에 CAR T 세포 현탁액을 채우고 PKG 튜브의 다른 쪽 끝을 통해 삽입하여 치료 캐뉼라의 상단을 덮습니다. 마우스를 마취 한 후 집게를 사용하여 가이드 캐뉼라를 바닥에 고정하십시오. 더미 캐뉼라의 나사를 풀고 제거하여 가이드 캐뉼라에 접근할 수 있도록 합니다.

CAR T 세포를 1분 동안 주입하고 치료 캐뉼라를 추가로 1분 동안 제자리에 유지합니다. 치료 캐뉼라를 제거한 후 더미 캐뉼라를 단단히 조입니다. 그런 다음 통증 조절을 위해 멜록시캄을 피하 투여합니다.

GPC2 지시 CAR T 세포 요법은 수모세포종에서 유의미한 종양 퇴행을 유도하고 시상 미만성 정중선 신경아교종 모델에서 생존을 유의하게 연장했습니다. 가이드 캐뉼라를 종양 내 위치에 삽입할 때 더미 및 치료 캐뉼라 돌출 길이를 설명하기 위해 등-복부 좌표가 종양 주사보다 더 표면적일 수 있음을 이해하는 것이 중요합니다.