Name: 생쥐의 In Vivo 에서 복막강 조직 거주 대식세포의 효율적인 유전자 및 MicroRNA 조절을 위한 렌티바이러스 벡터 준비 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-16T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 33 s
Description: 배우세요 생쥐 복막강 조직 거주 대식세포에서 유전자 및 MicroRNA 조절을 위한 렌티바이러스 벡터 준비 방법을. 안정적인 유전자 통합과 효율적인 발현을 통해 면역대사 및 질병 예방 연구에 활용할 수 있습니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>In Vivo 유전자 조절을 위한 Lentiviral 벡터 준비

<ol><li>Wynn, T. A., Chawla, A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+biology+in+development%2C+homeostasis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Macrophage biology in development, homeostasis and disease.</a> Nature. 496 (7446), 445-455 (2013).</li>
<li>Jantsch, J., Binger, K. J., Muller, D. N., Titze, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+homeostatic+immune+function%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in homeostatic immune function.</a> Front Physiol. 5, 146(2014).</li>
<li>Wynn, T. A., Vannella, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+tissue+repair%2C+regeneration%2C+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Macrophages in tissue repair, regeneration, and fibrosis.</a> Immunity. 44 (3), 450-462 (2016).</li>
<li>Ginhoux, F., Guilliams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+macrophage+ontogeny+and+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident macrophage ontogeny and homeostasis.</a> Immunity. 44 (3), 439-449 (2016).</li>
<li>Epelman, S., Lavine, K. J., Randolph, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+functions+of+tissue+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Origin and functions of tissue macrophages.</a> Immunity. 41 (1), 21-35 (2014).</li>
<li>Amit, I., Winter, D. R., Jung, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+local+environment+and+epigenetics+in+shaping+macrophage+identity+and+their+effect+on+tissue+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of the local environment and epigenetics in shaping macrophage identity and their effect on tissue homeostasis.</a> Nat Immunol. 17 (1), 18-25 (2016).</li>
<li>Gosselin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environment+drives+selection+and+function+of+enhancers+controlling+tissue-specific+macrophage+identities%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Environment drives selection and function of enhancers controlling tissue-specific macrophage identities.</a> Cell. 159 (6), 1327-1340 (2014).</li>
<li>Lavin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+macrophage+enhancer+landscapes+are+shaped+by+the+local+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident macrophage enhancer landscapes are shaped by the local microenvironment.</a> Cell. 159 (6), 1312-1326 (2014).</li>
<li>Davies, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+tissue-resident+macrophages+are+metabolically+poised+to+engage+microbes+using+tissue-niche+fuels%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Peritoneal tissue-resident macrophages are metabolically poised to engage microbes using tissue-niche fuels.</a> Nat Commun. 8 (1), 2047(2017).</li>
<li>Shi, J., Hua, L., Harmer, D., Li, P., Ren, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cre+driver+mice+targeting+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Cre driver mice targeting macrophages.</a> Methods Mol Biol. 1784, 263-275 (2018).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+lentiviral+vectors+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+China+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Recent advances in lentiviral vectors for gene therapy.</a> Sci China Life Sci. 64 (11), 1842-1857 (2021).</li>
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<li>Naldini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+gene+delivery+and+stable+transduction+of+nondividing+cells+by+a+lentiviral+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector.</a> Science. 272 (5259), 263-267 (1996).</li>
<li>Yamashita, M., Emerman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capsid+is+a+dominant+determinant+of+retrovirus+infectivity+in+nondividing+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Capsid is a dominant determinant of retrovirus infectivity in nondividing cells.</a> J Virol. 78 (11), 5670-5678 (2004).</li>
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<li>Burns, J. C., Friedmann, T., Driever, W., Burrascano, M., Yee, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vesicular+stomatitis+virus+G+glycoprotein+pseudotyped+retroviral+vectors%3A+concentration+to+very+high+titer+and+efficient+gene+transfer+into+mammalian+and+nonmammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Vesicular stomatitis virus G glycoprotein pseudotyped retroviral vectors: concentration to very high titer and efficient gene transfer into mammalian and nonmammalian cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 90 (17), 8033-8037 (1993).</li>
<li>Finkelshtein, D., Werman, A., Novick, D., Barak, S., Rubinstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LDL+receptor+and+its+family+members+serve+as+the+cellular+receptors+for+vesicular+stomatitis+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">LDL receptor and its family members serve as the cellular receptors for vesicular stomatitis virus.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (18), 7306-7311 (2013).</li>
<li>Ipseiz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+in+vivo+gene+modification+in+mouse+tissue-resident+peritoneal+macrophages+by+intraperitoneal+delivery+of+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Methods+Clin+Dev%22%5BJournal%5D)">Effective in vivo gene modification in mouse tissue-resident peritoneal macrophages by intraperitoneal delivery of lentiviral vectors.</a> Mol Ther Methods Clin Dev. 16, 21-31 (2020).</li>
<li>Rosas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcription+factor+Gata6+links+tissue+macrophage+phenotype+and+proliferative+renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The transcription factor Gata6 links tissue macrophage phenotype and proliferative renewal.</a> Science. 344 (6184), 645-648 (2014).</li>
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<li>Zufferey, R., Nagy, D., Mandel, R. J., Naldini, L., Trono, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiply+attenuated+lentiviral+vector+achieves+efficient+gene+delivery+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Multiply attenuated lentiviral vector achieves efficient gene delivery in vivo.</a> Nat Biotechnol. 15 (9), 871-875 (1997).</li>
<li>Nasri, M., Karimi, A., Allahbakhshian Farsani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production%2C+purification+and+titration+of+a+lentivirus-based+vector+for+gene+delivery+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Production, purification and titration of a lentivirus-based vector for gene delivery purposes.</a> Cytotechnology. 66 (6), 1031-1038 (2014).</li>
<li>Optimized production and concentration of lentiviral vectors containing large inserts. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22J+Gene+Med%22">J Gene Med</a>. al Yacoub, N., Romanowska, M., Haritonova, N., Foerster, J. 9 (7), 579-584 (2007).</li>
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<li>Sonza, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+of+human+monocytes+to+HIV+type+1+infection+in+vitro+is+not+dependent+on+their+level+of+CD4+expression%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS+Res+Hum+Retroviruses%22%5BJournal%5D)">Susceptibility of human monocytes to HIV type 1 infection in vitro is not dependent on their level of CD4 expression.</a> AIDS Res Hum Retroviruses. 11 (7), 769-776 (1995).</li>
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<li>Brown, L. Y., Dong, W., Kantor, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Improved+protocol+for+the+production+of+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">An Improved protocol for the production of lentiviral vectors.</a> STAR Protoc. 1 (3), 100152(2020).</li>
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<li>Czubala, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGFbeta+induces+a+SAMHD1-independent+post-entry+restriction+to+HIV-1+infection+of+human+epithelial+langerhans+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">TGFbeta induces a SAMHD1-independent post-entry restriction to HIV-1 infection of human epithelial langerhans cells.</a> J Invest Dermatol. 136 (10), 1981-1989 (2016).</li>
<li>Bouabe, H., Okkenhaug, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+targeting+in+mice%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Gene targeting in mice: a review.</a> Methods Mol Biol. 1064, 315-336 (2013).</li>
<li>Kim, J. M., Rasmussen, J. P., Rudensky, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+prevent+catastrophic+autoimmunity+throughout+the+lifespan+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells prevent catastrophic autoimmunity throughout the lifespan of mice.</a> Nat Immunol. 8 (2), 191-197 (2007).</li>
<li>Decalf, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensing+of+HIV-1+entry+triggers+a+Type+I+Interferon+response+in+human+primary+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Sensing of HIV-1 entry triggers a Type I Interferon response in human primary macrophages.</a> J Virol. 91 (15), e00147-e00217 (2017).</li>
<li>Wilson, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amelioration+of+emphysema+in+mice+through+lentiviral+transduction+of+long-lived+pulmonary+alveolar+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Amelioration of emphysema in mice through lentiviral transduction of long-lived pulmonary alveolar macrophages.</a> J Clin Invest. 120 (1), 379-389 (2010).</li>
<li>Markusic, D. M., van Til, N. P., Hiralall, J. K., Elferink, R. P., Seppen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+liver+macrophage+transduction+by+pseudotyping+lentiviral+vectors+with+a+fusion+envelope+from+Autographa+californica+GP64+and+Sendai+virus+F2+domain%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Reduction of liver macrophage transduction by pseudotyping lentiviral vectors with a fusion envelope from Autographa californica GP64 and Sendai virus F2 domain.</a> BMC Biotechnol. 9, 85(2009).</li>
<li>Burke, B., Sumner, S., Maitland, N., Lewis, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+gene+therapy%3A+cellular+delivery+vehicles+and+in+vivo+targets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in gene therapy: cellular delivery vehicles and in vivo targets.</a> J Leukoc Biol. 72 (3), 417-428 (2002).</li>
<li>Bain, C. C., Jenkins, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+serous+cavity+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">The biology of serous cavity macrophages.</a> Cell Immunol. 330, 126-135 (2018).</li>
<li>Milone, M. C., O'Doherty, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+use+of+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Clinical use of lentiviral vectors.</a> Leukemia. 32 (7), 1529-1541 (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.05% 트립신-EDTA (1x) (트립신 500 mg/L 또는 0.02 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>0.22 &mu; m 멸균 millex GP 필터</td><td>Merck</td><td>SLGS033SS</td><td></td></tr><tr><td>0.45 &mu; m 멸균 millex GP 필터</td><td>Merck</td><td>SLHP033RS</td><td></td></tr><tr><td>0.5 mL U-100 인슐린 주사기와 바늘, 0.33 mm x 12.7 mm (29 G)</td><td>BD</td><td>324892</td><td></td></tr><tr><td>1 Litre Sharps 용기</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>2.4G2 항체 (TruStain FcX anti-mouse CD16/32)</td><td>Biolegend</td><td>101320</td><td></td></tr><tr><td>40 &mu; m 스트레이너</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>22363547</td><td></td></tr><tr><td>AimV 배지(연구 등급), AlbuMax Supplement</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>31035025</td><td></td></tr><tr><td>Blocking buffer</td><td>,</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Brewer thioglycolate medium</td>, <td>Sigma-Aldrich</td><td>B2551</td><td>4% 원액, 물에서 준비, 오토클레이브 및 냉동 유지.</td></tr><tr><td>CD11b</td><td>Biolegend</td><td>101222</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>CD11b</td><td>BD</td><td>550993</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>CD11c</td><td>Biolegend</td><td>117317</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>CD11c</td><td>Biolegend</td><td>117333</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>CD19</td><td>BD</td><td>560375</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>CD19</td><td>Biolegend</td><td>152410</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>CD226</td><td>Biolegend</td><td>128808</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>CD3e</td><td>BD</td><td>560527</td><td>희석 및 농도</td></tr><tr><td>CD3e</td><td>Biolegend</td><td>152313</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>CD4</td><td>Biolegend</td><td>100412</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>CD73</td><td>eBioscience</td><td>16-0731-82</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>CD8a</td><td>eBioscience</td><td>48-0081-82</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>세포 배양 플라스크 (T175 fask, 175 cm2, 550 mL)</td><td>Greiner Bio One</td><td>658175</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기 튜브, 원추형 하단 튜브 25 mm x 89 mm</td><td>Beckman Coulter</td><td>358126</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>초원심분리기 및 TC 원심분리기</td></tr><tr><td>콜라겐분해효소 IV형</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>원추형 원심분리기 튜브(15 mL 및 50 mL)</td><td>Greiner Bio One</td><td>11512303 & 11849650</td><td></td></tr><tr><td>Cryotubes</td><td>Greiner Bio One</td><td>123277</td><td>또는 cryotubes</td></tr><tr><td>DMEM medium (1x) + 4.5g/L D-glucose, 400 &micro; M L-글루타민</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>41965-062</td><td></td></tr><tr><td>Dnase I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>Effectene 형질 주입 시약</td><td>Qiagen</td><td>301425</td><td></td></tr><tr><td>F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123123</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123133</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123147</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>FceR1</td><td>eBioscience</td><td>48-5898-80</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>태아 송아지 혈청(FCS)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10270-106</td><td>56°C에서 30분 동안 열 비활성화; C 및 멸균 0.22 &mu를 통해 여과; m 필터</td></tr><tr><td>유세포 분석기</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>&nbsp; Attune NxT</td><td></td></tr><tr><td>유세포 분석법(FACS) 완충액</td><td>사내에서</td><td></td><td></td>제조</tr><tr><td>형광 조직 배양 현미경</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>EVOS FL</td><td></td></tr><tr><td>겸자</td><td>해당 없음 해당</td><td>없음</td><td>사용자 선호</td></tr><tr><td>Hank's balanced salt solution (HBSS)</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>14175-053</td><td></td></tr><tr><td>HEK293T 세포주</td><td></td><td></td><td>형질주입 전 최소 일주일 동안 성장했습니다. 마이코플라스마 무함유</td></tr><tr><td>HIV-1 코어 항원</td><td>벡크만 쿨터</td><td>6604667</td><td></td></tr><tr><td>히알루로니다아제</td><td>시그마-알드리치</td><td>H3506</td><td></td></tr><tr><td>하이드렉스 수술용 스크럽, 클로르헥시딩 글루코네이트 4% w/v 스킨 클렌저</td><td>이콜랩</td><td>3037170</td><td></td></tr><tr><td>I-A/I-E</td><td>Biolegend</td><td>107625</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>ICAM1</td><td>Becton Dickinson</td><td>554970</td><td></td></tr><tr>사용 최소 일주일 전에 성장한<td>Jurkat T 세포주의</td><td></td><td></td> 희석 및 농도에 대해서는 표 1을 참조하십시오<td>. Mycoplasma free</td></tr><tr><td>LIVE/DEAD fixable near-IR dead cell stain kit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>L34975</td><td></td></tr><tr><td>Ly6G</td><td>Biolegend</td><td>127615</td> 희<td>석 및 농도에 대해서는 표 1을 참조하십시오</td></tr>. 여기서 <tr><td>마우스</td><td></td><td></td>는 <td>C57BL/6 암컷, 8-12주 (Charles Rivers)를 사용했으며, 다르게 지정되지 않는 한</td></tr><tr><td>Microcapillary pipettes (부피 범위 0.5-1,000 &mu; L)</td> <td>피셔 사이언티픽 & Starlab</td><td>11963466 & 11943466 & 11973466 & S1111-3700</td><td></td></tr><tr><td>NK1.1</td><td>Biolegend</td><td>108724</td> PBS pCMV-&Delta에서 2% w/v로 제조된 파라포름알데히드 Sigma-Aldrich P6148-500G<td>의 희석 및 농도는 표 1을 참조하십시오</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>. R8.91 패키징 플라스미드</td><td></td><td>Zuffrey, R., et al. 1997</td>은 <td>거대세포바이러스 프로모터에 의해 구동되는 Gag-Pol HIV 단백질을 암호화합니다. 암피실린 저항성.</td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신(100x, 10,000 U/mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>페트리 디쉬</td><td>Greiner Bio One</td><td>664160</td><td></td></tr><tr><td>pHR'SIN-cPPT-SEW 플라스미드</td><td></td><td>Rosas, M. et al. 2014</td><td>shRNA 및 miR 발현 연구를 위해 수정됨. EGFP 마커 다운스트림 SFFV 프로모터 및 Woodchuck 간바이러스 인핸서의 업스트림을 인코딩합니다. 암피실린 저항성.</td></tr><tr><td>pMD2.G 플라스미드</td><td></td><td>Naldini, L. et al. 1996</td>은 <td>수포성 구내염 바이러스 g-당단백질(VSV-G) 외피를 암호화합니다. 암피실린 저항성.</td></tr><tr><td>Rat IgG1, &kappa; isotype control</td><td>Becton Dickinson</td><td>550617</td><td>희석 및 농도에 대해서는 표 1 참조</td></tr><tr><td>쥐 혈청</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R9759-10ML</td><td></td></tr><tr>집에서 <td></td><td></td><td>준비된</td><td>적혈구 ACK 용해 완충액</td></tr><tr><td>RPMI 1640 매체 (1x) + 400 uM L-글루타민</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>21875-091</td><td></td></tr><tr><td>Saponin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4521</td><td></td></tr><tr><td>SiglecF</td><td>BD</td><td>562681</td> 희<td>석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>차아염소산나트륨 정제(표백제, 2,000ppm)</td><td>게스트 메디컬</td><td>H8818</td><td></td></tr><tr><td>멸균 24웰 세포 배양 플레이트</td><td>Greiner Bio One</td><td>662160</td><td></td></tr><tr><td>멸균 Dulbecco's PBS (DPBS) (1x) Mg++ 및 Ca2+ - 무료</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>멸균 EDTA</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15575020</td><td></td></tr><tr><td>멸균 VWR 일회용 이송 피펫(23.0 mL, 30 cm)</td><td>VWR</td><td>612-4515</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15503022</td><td></td></tr><tr><td>수술용 가위</td><td>해당 사항 없음</td><td>사용자</td><td>선호</td></tr><tr><td>주사기(50 mL 및 1 0mL)</td><td>Fisher Scientific</td><td>10084450 & 768160</td><td></td></tr><tr><td>Tim4</td><td>Biolegend</td><td>130007</td><td>희석 및 농도는 표 1 참조</td></tr><tr><td>U-bottom 96-well cell culture plate</td><td>Greiner Bio One</td><td>650180</td><td></td></tr></tbody></table>

생쥐의 in vivo 에서 복막강 조직 거주 대식세포의 효율적인 유전자 및 microrna 조절을 위한 렌티바이러스 벡터 준비

Lentiviral Vector Preparation for Efficient Gene and MicroRNA Modulation of Peritoneal Cavity Tissue&#45;Resident Macrophages In Vivo in Mice

생쥐의 In Vivo 에서 복막강 조직 거주 대식세포의 효율적인 유전자 및 MicroRNA 조절을 위한 렌티바이러스 벡터 준비

Peritoneal tissue-resident macrophages have broad functions in the maintenance of homeostasis and are involved in pathologies within local and neighboring ...

lentiviral-vector-preparation-for-efficient-gene-microrna-modulation

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

마이크로 RNA는 뇌의 구조와 기능에 중요한 역할을한다. 여기에 우리가 과다 발현은 설계 miRNA의 발현 렌티 바이러스의 정위 주사를 사용하여 해마 miRNA의를 적용하는 방법을 설명합니다. 이 방법은을 평가하는 상대적으로 빠른 방법으로 사용할 수...

의 정위 주입 MicroRNA의 발현 마우스 해마 CA1 영역으로 렌티 바이러스 및 행동 결과의 평가

이 프로토콜에서는 Amaxa Nucleofector 96-well Shuttle System을 사용하여 쥐 대식세포 세포주를 siRNA로 효율적으로 transfection하고, 지질다당류로 대식세포를 자극하고, 염증성 사이토카인 생성에 미치는 영향을 모니터링하는 방법을 설명합니다.

마우스 대 식세포의 타고난 면역 반응을 조사하기 위해 RNA 간섭을 사용하여

여기서는 쥐 복막 대식세포를 분리하는 간단한 프로토콜을 설명합니다. 이 절차 다음에는 RNA 추출을 수행하여 Toll-like receptor 자극에 대한 유전자 발현 분석을 수행합니다.

쥐 복막 대 식세포의 분리는 수신자 같은 수용체 자극하면 유전자 발현 분석을 수행하기

유체역학 꼬리 정 맥 주입 transposon 기반 통합 벡터의 수 murine hepatocytes의 안정 되어 있는 transfection vivo에서. 여기, 우리는 단일 transgene의 장기 제정 식 또는 결합 된 제정 및 doxycycline 유도할 수 있는 표현의 transgene 또는 간에서 미르 shRNA 있도록 transfection 시스템을 위한 실용적인 프로토콜 제시.

유체역학 꼬리 정 맥 주입을 사용 하 여 마우스 Hepatocytes의 유전 Vivo에서 수정에 대 한 제정 및 유도할 수 있는 시스템

여기, 선물이 수정된 oocyte의 perivitelline 공간에서 lentiviral 벡터의 간단한 주입에 의해 transgene 통합 및 높은 효능과 설립자 유전자 변형 생쥐의 생산을 촉진 하는 프로토콜.

유전자 변형 마우스 생산을 중재 하는 lentiviral: 창시자의 직접적인 연구를 위한 간단 하 고 매우 효율적인 방법

이 문서에서는, 우리는 murine 골에 형광 성 융해 단백질의 표정에 대 한 자세한 프로토콜 파생 수지상 세포와 대 식 세포 제공 합니다. 메서드를 기반으로 골 수의 변환에 창시자 retroviral 구문 뒤에 대 식 세포로 분화 및 수지상 세포 생체 외에서.

Murine 골 수 유래 수지상 세포와 대 식 세포에 형광 성 융해 단백질의 표정

Polyethyleneimine (페이)를 사용 하는 방법 설명-siRNA와 transfecting 세포에 대 한 superparamagnetic 산화 철 나노 입자를 코팅. 이러한 나노 입자 세포 생체 외에서 그리고 vivo에서 및 침묵 대상 유전자 발현을 효율적으로 siRNA를 제공할 수 있습니다.

Polyethyleneimine 코팅 된 산화 철 나노 입자 작은 간섭 RNA의 세포에 배달 하는 수단으로 생체 외에서 그리고 Vivo에서

타겟 DNA epigenome 나타냅니다 편집 강력한 치료 접근. 이 프로토콜에 설명 합니다 생산, 정화, 그리고 모든-에-하나의 lentiviral 벡터 인간 유도 만능 줄기 세포 (hiPSC)에서 epigenome 편집 응용 프로그램에 대 한 CRISPR-dCas9-DNMT3A transgene 은닉의 농도-신경 파생.

인간으로 Epigenome 편집 도구의 효율적인 배달 lentiviral 벡터 플랫폼 유도 만능 줄기 세포 유래 질병 모델

대식세포, 특히 1차 대식세포는 비자기 기원의 분자를 검출하는 것을 전문으로 하기 때문에 트랜스펙트에 도전하고 있습니다. 우리는 플라스미드와 같은 DNA 템플릿에서 생성된 mRNA를 가진 1 차적인 대식세포의 고도로 능률적인 형질혈을 허용하는 프로토콜을 기술합니다.

체외 전사 mRNA를 가진 1 차적인 대식세포의 고효율 형질감염

이 프로토콜은 유전자 치료를 위한 중간엽 줄기세포(MSC) 유래 세포외 소포 생체 모방제를 생산 및 정제하는 방법을 도입하는 것을 목표로 합니다. 나노소포는 MSC 유래 지질 이중층으로 제한되어 있으며, 관심 유전자를 가진 재조합 AAV를 내강에 캡슐화합니다. 이 나노소포는 생체 내 유전자 전달을 위한 향상된 벡터를 제공합니다.

유전자 전달 증진을 위한 간엽 줄기세포 막 감싸 나노소포 개발

배우세요 생쥐 복막강 조직 거주 대식세포에서 유전자 및 MicroRNA 조절을 위한 렌티바이러스 벡터 준비 방법을. 안정적인 유전자 통합과 효율적인 발현을 통해 면역대사 및 질병 예방 연구에 활용할 수 있습니다.

생쥐의 In Vivo 에서 복막강 조직 거주 대식세포의 효율적인 유전자 및 MicroRNA 조절을 위한 렌티바이러스 벡터 준비

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