2023년 10월 6일
현재까지 동일한 마우스에서 모든 주요 중추 신경계 상주 세포 유형을 동시에 분리하기 위한 프로토콜은 충족되지 않은 수요입니다. 이 프로토콜은 신경 염증 중에 복잡한 세포 네트워크를 조사하고 동시에 필요한 마우스 수를 줄이기 위해 순진하고 실험적인 자가면역 뇌척수염 마우스에 적용할 수 있는 절차를 보여줍니다.
다발성 경화증과 같은 자가면역 질환의 분자 및 세포 메커니즘을 조사하기 위해서는 재현 가능하고 정교한 세포 분리 프로토콜의 생성이 충족되지 않은 요구입니다. CNS에 상주하는 세포를 분리하고 분석하는 현재 기술의 대부분은 한 가지 세포 유형에만 초점을 맞추거나 출생 후 마우스에만 초점을 맞추는 등 심각한 단점을 보입니다. 하나의 CNS 복제에서 모든 주요 CNS 상주 세포 유형을 동시에 분리하기 위한 현재 프로토콜은 건강한 마우스와 실험적 자가면역 뇌척수염 환자에게 적용할 수 있는 복잡한 신경 네트워크와 새로운 염증 경로(생체 외)를 하나의 단일 세포 현탁액에서 분석할 수 있는 가능성을 제공합니다.
또한, 생쥐 수가 감소합니다 건강한 생쥐와 EAE 생쥐에서 4가지 주요 CNS 상주 세포 유형을 모두 동시에 분리하기 위한 당사의 프로토콜은 새로운 염증 경로를 연구하는 연구 그룹에 유용한 도구로 사용될 수 있어 생체 외 복잡한 생체 분자 메커니즘 및 세포 네트워크를 훨씬 더 정확하게 분석할 수 있습니다. 우리의 의정서의 도움으로 응답될 수 있던 새로운 과학적인 질문은 neuroinflammation, neurodegeneration 및 관해 같이 질병 과정의 다른 단계 도중 EAE에 있는 동적인 수사입니다. 또한 세포 간 상호 작용 및 생화학적 경로를 개별 수준에서 연구할 수 있습니다.
마찬가지로, 배양된 세포로 기능적 분석을 수행할 수 있습니다. 우리는 EAE 시점당 하나의 개별 CNS 균질액에서 다중 오믹 분석을 위한 EAE 과정의 동적 연구에 중점을 둘 계획입니다.
본 연구는 정상 및 실험적 자가면역성 뇌척수염(EAE) 모델 모두에 적용 가능한, 단일 마우스로부터 모든 주요 중추신경계(CNS) 상주 세포 유형을 동시에 분리하는 새로운 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 기존 세포 분리 기술의 한계를 해결하여 연구자가 사용되는 마우스 수를 최소화하면서 신경 염증 동안의 복잡한 세포 간 상호작용을 조사할 수 있도록 하는 것을 목적으로 합니다.
성체 EAE 마우스로부터 모든 주요 CNS 상주 세포 유형을 동시에 분리함으로써, 단일 실험 내에서 신경 염증 메커니즘에 대한 종합적인 조사가 가능해집니다. 이러한 접근 방식은 동물 사용량을 줄이면서 고함량 멀티오믹 분석을 지원하며, 이는 신경면역학 포트폴리오의 초기 발견 및 타겟 검증에 직접적인 영향을 미칩니다. 본 프로토콜은 자가면역 CNS 질환 모델에서 경로 위험 제거를 위한 예측 신뢰도와 중개 바이오마커 개발을 향상시킵니다.
이 프로토콜은 EAE 모델 마우스와 건강한 마우스로부터 여러 세포 유형을 동시에 분석할 수 있게 함으로써, 가설 기반 연구와 탐색적 연구 모두를 지원하며 발견 단계부터 전임상 단계까지의 연속성을 통합합니다.