Name: Xenopus 올챙이에서 망막 손상 모델 생성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-13T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: 학습하세요 Xenopus laevis 올챙이를 이용한 망막 손상 모델 생성 방법으로, 뮬러 신경교세포와 신경염증이 재생에 미치는 영향을 탐구합니다. 이 연구는 인간 망막 퇴행성 질환 치료 개발에 중요한 통찰을 제공합니다.

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이 연구는 ITMO NNP (Institut Thématique Multi-Organisme Neurosciences, sciences cognitives, neurologie, psychiatrie) / AVIESAN (Alliance Nationale pour les sciences de la vie et de la santé)과 협력하여 Association Retina France, Fondation de France, FMR (Fondation Maladies Rares), BBS (Association du syndrome de Bardet-Biedl) 및 UNADEV (Union Nationale des Aveugles et Déficients Visuels)의 M.P. 보조금으로 지원되었습니다.

Xenopus의 세포 복구 전략을 조사하기 위한 망막 변성 생성

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<li>Hamon, A., Roger, J. E., Yang, X. -J., Perron, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M%C3%BCller+glial+cell-dependent+regeneration+of+the+neural+retina%3A+An+overview+across+vertebrate+model+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Müller glial cell-dependent regeneration of the neural retina: An overview across vertebrate model systems.</a> Developmental Dynamics. 245 (7), 727-738 (2016).</li>
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<li>Todd, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+stimulation+of+retinal+regeneration+from+M%C3%BCller+glia+in+adult+mice+using+combinations+of+proneural+bHLH+transcription+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Efficient stimulation of retinal regeneration from Müller glia in adult mice using combinations of proneural bHLH transcription factors.</a> Cell Reports. 37 (3), 109857(2021).</li>
<li>Hoang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+regulatory+networks+controlling+vertebrate+retinal+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Gene regulatory networks controlling vertebrate retinal regeneration.</a> Science. 370 (6519), (2020).</li>
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<li>Wlizla, M., McNamara, S., Horb, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+and+care+of+Xenopus+laevis+and+Xenopus+tropicalis+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Generation and care of Xenopus laevis and Xenopus tropicalis embryos.</a> Methods in Molecular Biology. 1865, 19-32 (2018).</li>
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<li>Lee, D. C., Hamm, L. M., Moritz, O. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenopus+laevis+tadpoles+can+regenerate+neural+retina+lost+after+physical+excision+but+cannot+regenerate+photoreceptors+lost+through+targeted+ablation%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Xenopus laevis tadpoles can regenerate neural retina lost after physical excision but cannot regenerate photoreceptors lost through targeted ablation.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 54 (3), 1859-1867 (2013).</li>
<li>Martinez-De Luna, R. I., Kelly, L. E., El-Hodiri, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+retinal+homeobox+%28Rx%29+gene+is+necessary+for+retinal+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The retinal homeobox (Rx) gene is necessary for retinal regeneration.</a> Developmental Biology. 353 (1), 10-18 (2011).</li>
<li>Choi, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cone+degeneration+following+rod+ablation+in+a+reversible+model+of+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Cone degeneration following rod ablation in a reversible model of retinal degeneration.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 52 (1), 364-373 (2011).</li>
</ol>

저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.

Xenopus 올챙이의 다양한 망막 손상 패러다임의 장점과 단점
기계적 망막 손상 신경 망막의 다양한 외과적 손상은 Xenopus 올챙이에서 발생했습니다. 신경 망막은 완전히 제거되거나 15,16 부분적으로만 절제될 수 있다16,17. 여기에 제시된 기계적 손상은 망막 절제술이 아니라 이전에 Xenopus 올챙이6에서 개발한 간단한 눈 천자를 포함합니다. 이러한 기계적 망막 손상 모델의 수동 절차를 감안할 때, 표현형은 올챙이마다 크게 다를 수 있습니다. 또한 복제 가능성과 손상 정도는 실험을 수행하는 사람에 따라 달...

전 세계 수백만 명의 사람들이 색소성 망막염, 당뇨병성 망막병증 또는 연령 관련 황반 변성(AMD)과 같은 실명으로 이어지는 다양한 망막 퇴행성 질환으로 고통받고 있습니다. 현재까지 이러한 질환은 대부분 치료가 불가능한 상태로 남아 있습니다. 현재 평가 중인 치료 접근법에는 유전자 치료, 세포 또는 조직 이식, 신경 보호 치료, 광유전학 및 보철 장치가 포함됩니다. 또 다른 새로운 전략은 줄기 세포 잠재력을 가진 내인성 세포의 활성화를 통한 자가 재생을 기반으로 합니다. 망막의 주요 신경교세포(glial cell) 유형인 뮐러(Müller) 신경교세포(glial cell)는 이러한 맥락에서 관심의 세포 공급원 중 하나입니다. 손상을 입으면 분화, 증식 및 뉴런 1,2,3을 생성할 수 있습니다. 이 과정은 제브라피시나 제노푸스에서는 매우 효과적이지만 포유류에서는 대체로 비효율적입니다.
그럼에도 불구하고, 유사분열 단백질을 사용한 적절한 치료 또는 다양한 요인의 과발현이 포유류 뮐러 신경교세포 세포 주기 재진입을 유도할 수 있고, 어떤 경우에는 후속 신경 발생 헌신 1,2,3,4,5를 유발할 수 있는 것으로 나타났습니다. 그러나 이것은 치료에 크게 불충분하다. 따라서 재생의 기초가 되는 분자 메커니즘에 대한 지식을 늘리는 것은 Müller 줄기 유사 세포 특성을 새로운 세포 치료 전략으로 효율적으로 전환할 수 있는 분자를 식별하는 데 필요합니다.
이 목표를 가지고 우리는 Xenopus에서 망막 세포 퇴화를 유발하는 몇 가지 손상 패러다임을 개발했습니다. 여기서는 (1) 세포 유형에 특이적이지 않은 기계적 망막 손상, (2) 간상 세포를 표적으로 하는 NTR-MTZ 시스템을 이용한 조건부 및 가역적 세포 절제 모델, (3) 진행성 간상 세포 퇴화를 유발하는 색소성 망막염 모델인 CRISPR/Cas9 매개 로돕신 녹아웃, (4) CoCl2를 제시합니다-용량에 따라 원추세포를 특이적으로 표적으로 삼거나 더 넓은 망막 세포 변성을 유발할 수 있는 유도 세포독성 모델. 각 패러다임의 특징, 장점 및 단점을 강조합니다.

<table><tbody><tr><td>1,2-프로판디올(프로필&에그레이브; ne 글리콜)</td> <td>시그마 알드리치</td><td>398039</td><td></td></tr><tr><td>절대 에탄올 &ge; 99.8%</td><td>VWR chemicals</td><td>20821-365</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Cleaved Caspase 3 항체 (토끼)</td><td>세포 신호</td><td>9661S</td><td>희석 1/300</td></tr><tr><td>Anti-GFP 항체 (닭)</td><td>Aveslabs</td><td>GFP-1020</td><td>희석 1/500</td></tr><tr><td>Anti-M-Opsin 항체 (토끼)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>AB5405</td><td>희석 1/500</td></tr><tr><td>Anti-mouse 2차 항체, Alexa Fluor 594 (염소)</td><td>Invitrogen Thermo Scientific</td><td>A11005</td><td>Dilution 1/1,000</td></tr><tr><td>Anti-Otx2 항체(토끼)</td><td>Abcam</td><td>Ab183951</td><td>Dilution 1/100</td></tr><tr><td>Anti-rabbit 2차 항체, Alexa Fluor 488(염소)</td><td>Invitrogen Thermo Scientific</td><td>A11008</td><td>Dilution 1/1,000</td></tr><tr><td>Anti-rabbit 2차 항체, Alexa Fluor 594(염소)</td><td>Invitrogen Thermo Scientific</td><td>A11012</td><td>Dilution 1/1,000</td></tr><tr><td>Anti-Recoverin 항체 (토끼)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>AB5585</td><td>Dilution 1/500</td></tr><tr><td>Anti-Rhodopsin 항체 (마우스)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MABN15</td><td>Dilution 1/1,000</td></tr><tr><td>Anti-S-Opsin 항체 (토끼)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>AB5407</td><td>Dilution 1/500</td></tr><tr><td>Apoptotis detection kit (Dead end fluorimetric TUNEL system)</td><td>Promega</td><td>G3250</td><td></td></tr><tr><td>벤조카인&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1501</td><td>원액 10%</td></tr><tr><td>bisBenzimide H 33258 (Hoechst)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2883</td><td>원액 10 mg/mL</td></tr><tr><td>Butanol-1 &ge; 99.5%</td><td>VWR 화학 물질</td><td>20810.298</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘 이수화물(CaCl2, 2H2O)</td><td>Sigma-Aldrich(Supelco)</td><td>1.02382</td><td>0.1m</td></tr><tr><td>Cas9에서 사용 (EnGen Spy Cas9 NLS)</td><td>New England Biolabs</td><td>M0646T</td><td></td></tr><tr><td>Clark Capillary Glass 모델 GC100TF-10</td><td>Warner Instruments(Harvard Apparatus)</td><td>30-0038</td><td></td></tr><tr><td>코발트(II) 염화물 육수화물 (CoCl2, 6H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8661</td><td>재고 용액 100 mM</td></tr><tr><td>Coverslip 24 x 60 mm</td><td>VWR</td><td>631-1575</td><td></td></tr><tr><td>Dako REAL ab 희석제&nbsp;</td><td>Agilent</td><td>S202230-2</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>전자 회전 마이크로톰</td><td>Thermo Scientific</td><td>Microm HM 340E&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Eosin 1% 수성</td><td>RAL 진단</td><td>312740</td><td></td></tr><tr><td>플루오레세인 라이신 덱스트란&nbsp; &nbsp;</td><td>Invitrogen Thermo Scientific</td><td>D1822</td><td></td></tr><tr><td>형광 실체 현미경</td><td>Olympus</td><td>SZX 200</td><td></td></tr><tr><td>Gentamycin</td><td>Euromedex</td><td>EU0410-B</td><td></td></tr><tr><td>글리세린 알부민 acc. Mallory</td><td>Diapath</td><td>E0012</td><td>물에서 3 % 사용</td></tr><tr><td>Hematoxylin (Mayer's Hemalun)</td> <td>RAL Diagnostics</td><td>320550</td><td></td></tr><tr><td>HEPES 칼륨 염</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0527</td><td></td></tr><tr><td>인간 융모성 성선 자극 호르몬</td><td>호르몬 MSD Animal Health</td><td>Chorulon 1500</td><td></td></tr><tr><td>염산 발연, 37% (HCl)</td><td>Sigma-Aldrich (SAFC)</td><td>1.00314</td><td></td></tr><tr><td>L-시스테인 염산염 일수화물</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7880</td><td>0.1x MBS(pH 7.8 - 8.0)</td></tr><tr><td>Magnesium Sulfate Heptahydrate (MgSO4, 7H에서 2%로 사용2O)</td><td>Sigma-Aldrich (Supelco)</td><td>1.05886</td><td></td></tr><tr><td>Metronidazole&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich (Supelco)</td><td>M3761</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>마이크로로더 팁</td>에서 사용 <td>Eppendorf</td><td>5242956003</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette puller (P-97 Flaming/Brown)</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>모델 P-97</td><td>프로그램 : Heat 700 / Pull 100 / Vel 75 / Time 90 / Unlocked p = 500</td></tr><tr><td>형광 보존을 위한 장착 매체, FluorSave 시약</td><td>Millipore</td><td>345789</td><td></td></tr><tr><td>장착 매체, Eukitt</td><td>Chem-Lab</td><td>CL04.0503.0500</td><td></td></tr><tr><td>MX35 초소형 블레이드</td><td>Epredia</td><td>3053835</td><td></td></tr><tr><td>Needle Agani 25 G x 5/8''</td><td>Terumo</td><td>AN*2516R1</td><td></td></tr><tr><td>니켈 도금 핀 홀더</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>26016-12</td><td></td></tr><tr><td>나일론 여과 티슈 (체질 직물) NITEX, 메시 개구부 1,000 &마이크로; m</td><td>Sefar</td><td>06-1000/44</td><td></td></tr><tr><td>DMSO 없이 파라핀 히스토왁스</td><td>Histolab</td><td>00403</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드 용액(32%)</td><td>전자 현미경 과학</td><td>EM-15714-S</td><td>1x PBS에서 4%에서 사용 pH 7.4</td></tr><tr><td>Peel-A-Way 일회용 임베딩 몰드</td><td>Epredia</td><td>2219</td><td></td></tr><tr><td>유봉</td><td>VWR</td><td>431-0094</td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시 100mm</td><td>Corning Gosselin</td><td>SB93-101</td><td></td></tr><tr><td>페트리 디쉬 55 mm</td><td>Corning Gosselin</td><td>BP53-06</td><td></td></tr><tr><td>인산염 버퍼 식염수 용액 (PBS) 10x</td><td>Euromedex</td><td>ET330-A</td><td></td></tr><tr><td>PicoSpritzer Microinjection system</td><td>Parker Instrumentation Products</td><td>PicoSpritzer III</td><td></td></tr><tr><td>Pins&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-20</td><td></td></tr><tr><td>Polysucrose (Ficoll PM 400</td>) <td>Sigma-Aldrich</td><td>F4375</td><td>0.1x MBS</td></tr><tr><td>염화칼륨 (KCl)</td>에서 3% 사용<td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>분말 튀김 식품 : sera Micron Nature</td><td>sera</td><td>45475 (00720)</td><td></td></tr><tr><td>가위 해부</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>Slide Superfrost&nbsp;</td><td>&nbsp; KNITTEL 유리</td><td>VS11171076FKA&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>슬라이드 워머</td><td>Kunz 기기</td><td>HP-3</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨 (NaCl)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>구연산나트륨 트리소듐 염 이수화물 (C6H5Na3O7, 2H2O)</td><td>VWR 화학물질</td><td>27833.294</td><td></td></tr><tr><td>탄산수소나트륨 (NaHCO3)</td><td>Sigma-Aldrich (Supelco)</td><td>1.06329</td><td></td></tr><tr><td>수산화나트륨 30% 수용액(NaOH)</td><td>VWR 화학 물질</td><td>28217-292</td><td></td></tr><tr><td>실체현미경</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000</td><td></td></tr><tr><td>주사기 Omnifix-F Solo 일회용 주사기 1 mL</td><td>B-BRAUN</td><td>9161406V</td><td></td></tr><tr><td>trans-activating crRNA (tracrRNA)</td><td>통합 DNA 기술</td><td></td><td></td>1072533</tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X-100</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9416</td><td></td></tr><tr><td>X-Cite 200DC 형광 조명기</td><td>X-Cite&nbsp;</td><td>200DC</td><td></td></tr><tr><td>크실렌 &ge; 98.5%&nbsp;</td><td>VWR 화학 물질</td><td>28975-325</td><td></td></tr></tbody></table>

xenopus 올챙이에서 망막 손상 모델 생성

Generating Retinal Injury Models in Xenopus Tadpoles

망막 신경 퇴행성 질환은 실명의 주요 원인입니다. 연구되고 있는 수많은 치료 전략 중에서, 자가 회복을 자극하는 것이 최근 특히 매력적인 것으로 떠올랐다. 망막 복구를 위한 세포의 관심 원천은 뮐러 신경교세포(Müller glial cell)로, 줄기세포의 잠재력과 아남니오트의 놀라운 재생 능력을 가지고 있습니다. 그러나 이 잠재력은 포유류에서 매우 제한적입니다. 재생 능력이 있는 동물 모델에서 망막 재생의 기저에 있는 분자 메커니즘을 연구하면 포유류 뮐러 세포의 망막 재생 잠재 능력을 잠금 해제하는 방법에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다. 이는 재생 의학의 치료 전략 개발을 위한 핵심 단계입니다. 이를 위해 우리는 Xenopus에서 기계적 망막 손상, 니트로환원효소 매개 광수용체 조건부 절제를 허용하는 형질전환 라인, CRISPR/Cas9 매개 로돕신 녹아웃을 기반으로 하는 색소성 망막염 모델, 안구 내 CoCl2 주입에 의한 세포독성 모델 등 여러 망막 손상 패러다임을 개발했습니다. 장점과 단점을 강조하면서 다양한 퇴행성 조건을 생성하고 Xenopus의 망막 재생을 연구할 수 있는 이 일련의 프로토콜에 대해 설명합니다.

기계적 망막 손상 프로토콜 섹션 1에 설명된 기계적 손상을 입은 올챙이의 망막 절편은 망막 병변이 천자 부위에 국한된 상태로 유지되는 동안 조직의 모든 층을 포함한다는 것을 보여줍니다(그림 2A, B).
NTR-MTZ 시스템을 이용한 조건부 간상세포 절제 프로토콜 섹션 2에 설명된 대로 MTZ 처리로 처리된 마취된 Tg(rho:GFP-NTR) 형질전환 올챙이의 눈을 실체현미경으로 분석했습니다(그림 3A,B). GFP 형광의 감소는 프로토콜 섹션 5(그림 3C)에 설명된 대로 GFP 면역염색에 의해 망막 절편에서 확인된 대조군(그림 3B</...

우리는 Xenopus laevis 올챙이의 망막 손상 또는 망막 변성을 유도하기 위한 몇 가지 프로토콜을 개발했습니다. 이 모델은 망막 재생 메커니즘을 연구할 수 있는 가능성을 제공합니다.

Xenopus 올챙이에서 망막 손상 모델 생성

Retinal neurodegenerative diseases are the leading causes of blindness. Among numerous therapeutic strategies being explored, stimulating self-repair ...

제 연구실은 망막 재생을 연구하고 있습니다. 우리는 Xenopus 개구리를 모델 시스템으로 사용하고 있습니다. 이 양서류는 우리와 같은 포유류와 달리 부상 시 망막을 매우 효율적으로 재생할 수 있기 때문에 실제로 매우 매력적입니다.그리고 우리는 미래에 망막 신경 퇴행성 질환을 앓고 있는 인간 환자의 망막 재생을 유발하는 데 유용할 수 있기 때문에 근본적인 메커니즘을 연구하고 있습니다. 최근에는 망막 주변부의 줄기세포와 망막 색소 상피 외에도 신경교세포가 손상 시 망막 재생을 위해 동원될 수 있다는 사실을 발견했습니다. 그래서 우리는 현재 신경염증과 이 세포의 재생 능력 사이의 연관성을 연구하고 있습니다.실제로, 신경 염증성 틈새는 망막 재생 조절의 핵심 역할을 하는 것으로 보입니다. 망막 재생과 관련된 세포 및 분자 메커니즘을 연구하기 위해 Xenopus에서 몇 가지 망막 손상 패러다임을 개발했습니다. 첫 번째는 기계적 망막 손상입니다.두 번째는 nitroreductase-mediated photoreceptor conditional ablation을 허용하는 형질전환 라인입니다. 세 번째는 CRISPR/Cas9 매개 로돕신 녹아웃을 기반으로 하는 색소성 망막염 모델이며, 마지막으로 염화코발트 또는 CoCl2의 안구 내 주입에 의한 세포독성 모델입니다. 내 호스트 실험실은 Xenopus가 망막을 재생할 수 있지만 효율성은 매우 다양하며 올챙이의 단계나 종(Xenopus laevis 또는 tropicalis)에 따라 달라진다는 것을 보여주었습니다.따라서 Xenopus는 망막 재생을 유발하거나 제한하는 분자 메커니즘을 설명하기 위한 환상적인 모델입니다.

generating-retinal-injury-models-in-xenopus-tadpoles

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

조건부 성인 zebrafish의 망막에서 대상 단백질의 표현을 분해하는 방법은 intravitreally 안티 센스 morpholinos를 주입하여 망막에 그들을 electroporating 포함하는, 설명되어 있습니다. 그 결과 단백질은 재생이나 그대로 망막에있는 단백질의 역할을 테스트 수 며칠에 대한 무너뜨렸다입니다.

Morpholinos의 생체내의 Electroporation에서 성인 Zebrafish의 망막에

Xenopus laevis는 세포의 운명 사양 및 기본 세포 배양의 개별 망막 세포의 생리 기능을 연구하기위한 이상적인 모델 시스템을 제공합니다. 여기 망막 조직을 해부하고 칼슘 활동 이미징 및 현장 하이브리드 화에 의해 분석 기본 셀 문화를 생성하는 기법을 제시한다.

의 해부, 문화, 및 분석<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; 배아 망막 조직

이 비디오는 제브라피시 배아에서 일차 망막 신경절 세포를 배양하는 방법을 보여줍니다. 초기 단계의 배아는 눈을 분리하기 위해 해부를 거치고, 그 후 기계적으로 해리되어 망막 신경절 세포의 현탁액으로 만들어집니다. 이 세포 현탁액은 축삭돌기 발달을 촉진하기 위해 접착 단백질로 코팅된 커버슬립에서 배양됩니다.

제브라피시 배아(zebrafish embryos)에서 일차 망막 신경절 세포 배양 생성

이 비디오는 레이저 손상을 사용하여 성인 제브라피시의 망막 변성을 유도하는 절차를 보여줍니다. 레이저는 망막의 광수용체 세포를 표적으로 삼아 세포 사멸과 퇴행성 과정을 유발합니다. 이 손상은 뮐러 신경교세포(MG) 세포를 활성화하여 망막 재생을 돕는 줄기세포 전구세포로 역분화시킵니다.

Targeting Retinal Degeneration and Regeneration in Zebrafish Using a Focal Laser Injury(초점 레이저 손상을 사용한 제브라피시의 망막 퇴행 및 재생 모델링)

복수의 가벼운 손상 프로토콜은 손상 광수를 설명하고 결과적으로 성인 zebrafish에있는 망막 재생 반응을 유도하고 있습니다. 이 프로토콜은 안료 동물에서 사용할 수있는 개선 된 방법을 설명하고 그로드하고 전체 망막에 걸쳐 콘 광수의 대부분을 손상.

성인 Zebrafish의 망막 재생 연구에있는 사용을위한 비발 한 가벼운 손상 패러다임

제노는 올챙이가 검은 색 / 흰색 탱크의 흰색 측면에서 수영을 선호 ​​laevis의. 이 동작은 자신의 비전에 의해 유도된다. 이 동작을 바탕으로, 우리는 올챙이의 시각 기능을 테스트 할 수있는 간단한 분석을 제시한다.

테스트 시각 기능에 대한 간단한 행동 분석<em&gt;는 Xenopus laevis의</em

이 프로토콜은, 해부 실험 조작과 닭의 배아에서 문화 전체 망막 외식하는 방법을 설명합니다. 높은 성공률, 효능 및 재현성은 전기 및 / 또는 시약의 물질, 즉, 효소 억제제 플라스미드의 효과를 테스트하기 위해 필요할 때 이식편 배양 물은 유용하다.

일렉트로 화학 시약 트리트먼트의 닭 배아에서 전체 망막의 Explants

제브라 망막 재생이 거의 고정 된 망막을 이용하여 연구되었다. 그러나, interkinetic 핵 마이그레이션 동적 프로세스는 재생 반응 중에 발생 및 기본 메커니즘을 조사하기 위해 라이브 세포 이미징을 필요로한다. 여기, 우리는 광자 현미경을 사용하여 Interkinetic 핵 마이그레이션 (INM) 실시간을 모니터링하는 문화 및 이미징 조건을 설명합니다.

다중 광자 현미경으로 라이브 셀 이미징을위한 성인 형질 전환 Zebrafish의 망막의 Explants의 문화

망막 색소 상피 세포 건조 연령 관련 황 반 변성의 고급 형태에 대 한 세포 보충 치료 될 수 있습니다. 이 프로토콜 지리적 위축의 눈이 큰 모델 및 질병의이 모델에 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 색소 상피 세포의 subretinal 이식의 생성을 설명합니다.

지리적 위축의 눈이 큰 모델에 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 색소 상피 세포의 subretinal 이식

이 프로토콜은 DNA/DOTAP 혼합물을 1일 된 제노푸스 라에비스 배아의 안구에 미세 주입하는 방법과 지각 중뇌에서 광학 축색 아버를 발현하는 개별 녹색 형광 단백질(GFP)을 이미지화하고 재구성하는 방법을 설명하는 것을 목표로 합니다. 그대로, 살아있는 제노푸스 올챙이.

제노푸스 laevis 배아에서 눈부안으로 DNA의 미세 주입 및 GFP의 이미징 그대로 광학 축색 아버를 표현, 살아있는 제노푸스 올챙이

이 프로토콜은 형질전환 제브라피쉬 모델을 사용하여 망막 색소 상피(RPE)를 유전적으로 제거하는 방법론을 기술한다. 약리학적 화합물을 이용한 신호전달 경로 조절을 통합하도록 프로토콜을 적응시키는 것은 광범위하게 상세하다. 색소침착을 기반으로 RPE 재생을 정량화하기 위한 MATLAB 플랫폼이 개발되어 발표되고 논의됩니다.

니트로환원효소/메트로니다졸 매개 절제 및 제브라피쉬 망막 색소 상피의 재생 연구를 위한 MATLAB 플랫폼(RpEGEN)

학습하세요 Xenopus laevis 올챙이를 이용한 망막 손상 모델 생성 방법으로, 뮬러 신경교세포와 신경염증이 재생에 미치는 영향을 탐구합니다. 이 연구는 인간 망막 퇴행성 질환 치료 개발에 중요한 통찰을 제공합니다.

Xenopus 올챙이에서 망막 손상 모델 생성

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