Name: 제브라피시 배아에서 백혈병 세포 이식을 사용한 신속한 생체 내 약물 반응 예측 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T12:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 46 s
Description: 배우세요 제브라피시 배아를 이용한 급성 림프모구성 백혈병 세포 이식 및 약물 반응 평가 프로토콜입니다. 면역 차단으로 이식 세포 생존율을 높이고 유세포 분석으로 정밀한 약물 효능을 측정합니다.

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<ol><li>Fontana, C. M., Van Doan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+xenograft+as+a+tool+for+the+study+of+colorectal+cancer%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Zebrafish xenograft as a tool for the study of colorectal cancer: a review.</a> Cell Death Dis. 15, 1-12 (2024).</li>
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<li>Gamble, J. T., Elson, D. J., Greenwood, J. A., Tanguay, R. L., Kolluri, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+xenograft+models+for+investigating+cancer+and+cancer+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Biology%22%5BJournal%5D)">The zebrafish xenograft models for investigating cancer and cancer therapeutics.</a> Biology. 10 (4), 252(2021).</li>
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<li>Pase, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil-delivered+myeloperoxidase+dampens+the+hydrogen+peroxide+burst+after+tissue+wounding+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil-delivered myeloperoxidase dampens the hydrogen peroxide burst after tissue wounding in zebrafish.</a> Current Biol. 22 (19), 1818-1824 (2012).</li>
<li>Wijk, R. C. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanistic+and+quantitative+understanding+of+pharmacokinetics+in+Zebrafish+larvae+through+nanoscale+blood+sampling+and+metabolite+modeling+of+paracetamol%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Mechanistic and quantitative understanding of pharmacokinetics in Zebrafish larvae through nanoscale blood sampling and metabolite modeling of paracetamol.</a> J Pharmacol Exp Ther. 371 (1), 15-24 (2019).</li>
<li>Lázaro-Navarro, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibiting+casein+kinase+2+sensitizes+acute+lymphoblastic+leukemia+cells+to+venetoclax+via+MCL1+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Advances%22%5BJournal%5D)">Inhibiting casein kinase 2 sensitizes acute lymphoblastic leukemia cells to venetoclax via MCL1 degradation.</a> Blood Advances. 5 (24), 5501(2021).</li>
<li>Rhodes, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+of+pu.1+and+gata1+determines+myelo-erythroid+progenitor+cell+fate+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Interplay of pu.1 and gata1 determines myelo-erythroid progenitor cell fate in zebrafish.</a> Developmental Cell. 8 (1), 97-108 (2005).</li>
<li>Zakaria, Z. Z., Eisa-Beygi, S., Benslimane, F. M., Ramchandran, R., Yalcin, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+microinjection+of+Morpholino+antisense+oligonucleotides+and+mRNA+into+zebrafish+embryos+to+elucidate+specific+gene+function+in+heart+dvelopment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Design and microinjection of Morpholino antisense oligonucleotides and mRNA into zebrafish embryos to elucidate specific gene function in heart dvelopment.</a> J Vis Exp. (186), e63324(2022).</li>
<li>ZFIN: Zebrafish Book: Contents. , 
 <a target="_blank" href="https://zfin.org/zf_info/zfbook/cont.html">https://zfin.org/zf_info/zfbook/cont.html</a> (2025).</li>
<li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev Dyn. 203 (3), 253-310 (1995).</li>
<li>Hasegawa, E. H., Gist H Farr, I. I. I., Maves, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+pronase+versus+manual+dechorionation+of+zebrafish+embryos+for+small+molecule+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Comparison of pronase versus manual dechorionation of zebrafish embryos for small molecule treatments.</a> J Dev Biol. 11 (2), 16(2023).</li>
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<li>Rosowski, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+macrophage+versus+neutrophil+contributions+to+innate+immunity+using+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Models+Mech%22%5BJournal%5D)">Determining macrophage versus neutrophil contributions to innate immunity using larval zebrafish.</a> Dis Models Mech. 13 (1), dmm041889(2020).</li>
<li>Rebelo de Almeida, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+xenografts+as+a+fast+screening+platform+for+bevacizumab+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Comm+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish xenografts as a fast screening platform for bevacizumab cancer therapy.</a> Comm Biol. 3 (1), 1-13 (2020).</li>
<li>Pringle, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+xenograft+platform-A+novel+tool+for+modeling+KSHV-associated+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">The zebrafish xenograft platform-A novel tool for modeling KSHV-associated diseases.</a> Viruses. 12 (1), 12(2020).</li>
<li>Pype, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incubation+at+32.5+%C2%B0C+and+above+causes+malformations+in+the+zebrafish+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Incubation at 32.5 °C and above causes malformations in the zebrafish embryo.</a> Reprod Toxicol. 56, 56-63 (2015).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+virus+%28AAV%29-based+gene+therapy+for+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell+Int%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated virus (AAV)-based gene therapy for glioblastoma.</a> Cancer Cell Int. 21 (1), 76(2021).</li>
<li>Siebert, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rhabdomyosarcoma+xenotransplants+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Pediat+Blood+Cancer%22%5BJournal%5D)">Rhabdomyosarcoma xenotransplants in zebrafish embryos.</a> Pediat Blood Cancer. 70 (1), e30053(2023).</li>
<li>van Bree, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+orthotopic+medulloblastoma+zebrafish+model+for+rapid+drug+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncol%22%5BJournal%5D)">Development of an orthotopic medulloblastoma zebrafish model for rapid drug testing.</a> Neuro-Oncol. noae210, (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>페트리 접시&nbsp; (10cm)</td><td>Greiner</td><td>P7237</td><td></td></tr><tr><td>7-AAD 생존도 염색 솔루션&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>00-6993-50</td><td></td></tr><tr><td>Agarose (LE, 분석 등급)</td><td>Biozym&nbsp;</td><td></td><td></td>840004</tr><tr><td>공기 압력 인젝터</td><td>Narishige</td><td>IM400</td><td>&nbsp; 외부 가스 공급</td></tr><tr><td>장치 Alexa Fluor&nbsp; 488 항인간 CD19 항체&nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>302219</td><td></td></tr><tr><td>Annexin 결합 완충액</td><td>Biolegend</td><td>422201</td><td>또는 APC</td></tr><tr><td>Annexin V&nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>640941</td><td></td></tr><tr><td>Capillaries (10 cm, OD 1.0 mm, 필라멘트 포함)</td><td>WPIINC</td><td>TW100F-4</td><td>1.0 OD; 0.75 ID</td></tr><tr><td>세포 배양 플라스크 (T-175)</td><td>Sarstedt</td><td>83,39,12,002</td><td></td></tr><tr><td>CellTrace Violet&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>C34557</td><td></td></tr><tr><td>디메틸 설폭사이드 (DMSO)</td><td>Roth</td><td>A994.1</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4693-1g</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>AppliChem GmbH</td><td>A3778</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf tubes (1.5 ml)</td><td>Eppendorf</td><td>30120086</td><td></td></tr><tr><td>FACS tube (폴리스티렌 라운드 botton 튜브 with Cell strainer Cap, 5 ml)</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>Falcon tube (50 ml)</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Fetal calf serum (FCS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C8056</td><td></td></tr><tr><td>미세 메쉬 필터&nbsp;( 10 & 마이크로; m)</td><td>PluriStrainer</td><td>435001050</td><td></td></tr><tr><td>파인 메쉬 필터&nbsp;( 20 & 마이크로; m)</td><td>PluriStrainer</td><td>431002040</td><td></td></tr><tr><td>유세포 분석기&nbsp;</td><td>Becton Dickinson</td><td>BD LSRFortessa X-20</td><td></td></tr><tr><td>형광 실체 현미경</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>형광 실체 현미경 카메라</td><td>Leica</td><td>M165 FC</td><td>카메라 : DFC7000 T</td></tr><tr><td>Hank' s 균형 잡힌 소금 용액 (HBSS, 칼슘 및 마그네슘 무료)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>88284</td><td></td></tr><tr><td>주입형 (제브라피쉬 MI/이식 키트)</td> <td>World Precision Instruments&nbsp;</td><td>Z-MOLDS</td><td></td></tr><tr><td>주사 바늘 (필라멘트 없음)</td><td>생물 의학 기구</td><td>VZIPbl-20-10-55</td><td>제브라피쉬 주사 피펫, 무딘, OD: 20&mu; 남 &plusmn; 1, TL : ~ 10mm, PL : 55mm, 유리 : BM100T-10P</td></tr><tr><td>매크로 원심 분리기</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마이크로 원심 분리기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Morpholino (csf3r)</td> <td>Gene Tools LLC</td><td>csf3r (GAAGCACAAGCGA GACGGATGCCA)</td><td></td></tr> <tr><td>Morpholino (spi1)</td> <td>Gene Tools LLC</td><td>spi1 (GATATACTGATAC TCCATTGGTGGT)</td><td></td></tr> <tr><td>Papain</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3125</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신(Penstrep; 10.000&nbsp; U/ml)</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>플레이트 (4-well)</td><td>Greiner Bio one&nbsp;</td><td>657160</td><td></td></tr><tr><td>플레이트(96웰)</td><td>Greiner Bio one&nbsp;</td><td>657180</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium</td><td>Gibco</td><td>21875-034</td><td></td></tr><tr><td>Tricaine&nbsp; (MS-222)</td><td>시그마 알드리치</td><td>E10521-50G</td><td>에티-3 아미노벤조에이트 메탄설페네이</td></tr></tbody></table>트

제브라피시 배아에서 백혈병 세포 이식을 사용한 신속한 생체 내 약물 반응 예측

Rapid in vivo Drug Response Prediction Using Leukemia Cell Grafts in Zebrafish Embryos

신선 냉동 1차 BCP-ALL 세포 샘플의 이종 이식 및 약물 처리를 포함하여 ZefiX 프로토콜에 대한 자세한 과학적 평가는 이전에 발표된 원고21을 참조하십시오. 지역 의료 연구 윤리 위원회에 의해 ALL-REZ BFM 2002 임상시험(NCT00114348) 및 ALL-REZ BFM 레지스트리 및 바이오뱅크(EA2/055/12)에 대한 추가 연구의 일환으로 전임상 약물 검사를 위한 연구에 환자 샘플을 사용할 수 있도록 승인되었으며, 국가 당국에 의한 IntReALL SR 2010 국제 임상시험(NCT01802814)도 승인되었습니다. 환자 및/또는 그 보호자가 등록된 해당 임상시험 또는 등록부를 통해 사전 동의서를 받았습니다.
그림 2는 주입 전 아가로스 접시에서 배아 정렬의 예를 보여주며, 이는 주입 과정을 간소화하는 데 도움이 됩니다. 주사는 발달 중인 심장을 둘러싼 구멍을 ...

Zebrafish xenotransplantation is a pivotal technique for investigating human cancer pathogenesis and predicting individual drug responses. This document ...

rapid-vivo-drug-response-prediction-using-leukemia-cell-grafts

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

제한 희석 세포 이식의 assays는 종양 - 세포의 증식 주파수를 결정하는 데 사용됩니다. 이 프로토콜은 찬란 - 표시 백혈병 및 성인 zebrafish의 복막 구멍에 희석을 제한에서이 백혈병 세포를 분리 및 이식하는 방법에 세부 사항을 개발 syngeneic zebrafish을 생성하는 방법을 설명합니다.

Syngeneic Zebrafish의 제한 희석 세포 이식을 사용하여 종양 - 증식 세포의 주파수 Quantifying

여기에서는 제브라피시 골격근 및 배아 횡문근 육종(ERMS)을 성체 면역 손상 rag2E450fs 동형접합 돌연변이 제브라피쉬에 이식하는 세포 이식 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 근육 세포의 재생 및 악성 변형을 효율적으로 분석할 수 있습니다.

면역이 저하 된 성인 Zebrafish의에 정상 및 악성 근육 세포 이식

이 방법은 효율적으로 암세포의 혈관 침입 능력을 시험하기 위해 제브라 피쉬 배아를 이용한다. 형광 암세포 개발 배아 precardiac 부비동 또는 난황 낭에 주입된다. 암 세포 혈관 침윤 및 혈관 외 유출은 24-96 시간 후 꼬리 영역의 형광 현미경을 통해 평가된다.

Zebrafish의에서 암 세포의 혈관 침습 능력을 (테스트<em&gt; 다니오 레 리오</em&gt;)

암 세포의 이식은 암 기전과 치료 반응의 확인에 중요한 도구입니다. 현재의 기술은 면역 기능이없는 동물에 달려 있습니다. 여기, 우리는 종양 세포 행동과 생체 내 약물 반응의 장기 분석을위한 면역 능력이있는 배아에 zebrafish 종양 세포를 이식하는 방법을 설명합니다.

종양 세포의 행동과 약물 반응에 대한 장기 연구를 위해 면역 능력이있는 숙주 내로 Zebrafish Pediatric Brain 종양을 이식

Zebrafish 배아는 화학 화합물의 독성을 평가하는 데 사용됩니다. 그들은 외부에서 개발하고 미묘한 자형기능 변화의 검출을 허용, 화학 물질에 민감하다. 실험은 배아를 함유하는 플레이트에 직접 첨가되는 소량의 화합물만을 필요로 하므로 테스트 시스템이 효율적이고 비용 효율적입니다.

Zebrafish 배아를 이용한 화학 화합물의 독성에 대한 신속한 평가

이 프로토콜은 애벌레 얼룩말어를 숙주로서 사용하여 바이러스 기반 이중 형광 표지 종양 이종이식 모델에서 최적화 절차를 설명합니다. 이 이기종 이종이식 모델은 생체 내 췌장암 미세환경의 조직 조성을 모방하고 맞춤형 zPDX(제브라피쉬 환자 유래 이종이식) 모델에서 약물 반응을 평가하기 위한 보다 정밀한 도구역할을 한다.

비교 약물 평가를 위한 호스트로 Zebrafish 애벌레를 사용하여 췌장암의 환자 유래 이종 이종이식 모형

이 방법의 목적은 형광표지된 혈관이 있는 제브라피시 배아로 포유류 종양 세포를 이종이식에 이식함으로써 종양 혈관신생의 생체 내 모델을 생성하는 것이다. 이종이식 및 관련 혈관을 이미징함으로써, 혈관신생 반응의 정량적 측정을 얻을 수 있다.

제브라피시 종양 이종이식에서 숙주 혈관조형성 반응의 생체 내 이미징 및 정량화

Zebrafish 이종이식 모델은 생체 내 미세 환경에서 인간 암 세포의 고처리량 약물 스크리닝 및 형광 이미징을 허용합니다. 당사는 자동 형광 현미경 장착 이미징 유닛을 사용하여 제브라피시의 환자 유래 백혈병 시료에 대한 대규모 자동 약물 스크리닝을 위한 워크플로우를 개발했습니다.

제브라피시의 1차 환자 유래 종양 이종이식의 약물 스크리닝

여기서는 종양 거동 분석, 전산 면역형화 및 공초점 이미징 정량화를 위한 xenografts 및 지침을 생성하는 팁과 함께 단계별 프로토콜을 제공합니다.

제브라피시 애벌레 제노이식 및 종양 행동 분석의 생성

우리는 간단하고 빠른 병기 결정 방법으로 최적화된 투명한 제브라피시 배아의 난황에 이종 이식을 위한 프로토콜을 설명합니다. 주입 후 분석에는 생존 및 유세포 분석을 통한 이종 이식 세포의 질병 부담 평가가 포함됩니다.

투명 제브라피시 배아에서 종양 이종 이식 분석을 위한 간단하고 빠르며 효과적인 방법

우리는 세포 증식 염색을 사용하여 제브라피시 T-급성 림프모구성 백혈병 모델에서 정지 세포를 식별했습니다. 염색은 분열하지 않는 세포에 유지되고 세포 증식 중에 감소하여 추가 조사를 위해 휴면 세포를 선택할 수 있습니다. 이 프로토콜은 세포 정지의 맥락에서 자가 재생을 연구하기 위한 기능적 도구를 제공합니다.

세포 증식 염색을 사용한 제브라피시 T 세포 급성 림프모구성 백혈병 모델에서 정지 세포 식별 

배우세요 제브라피시 배아를 이용한 급성 림프모구성 백혈병 세포 이식 및 약물 반응 평가 프로토콜입니다. 면역 차단으로 이식 세포 생존율을 높이고 유세포 분석으로 정밀한 약물 효능을 측정합니다.

제브라피시 배아에서 백혈병 세포 이식을 사용한 신속한 생체 내 약물 반응 예측

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