모세혈관경을 사용한 생쥐의 손톱 미세혈관 형태에 대한 비침습적 시각화

우리 연구실의 관심 분야 중 하나는 신경퇴행성 질환의 혈관 기능 장애입니다. 우리는 모세혈관경을 통해 말초 미세혈관 병리를 감지하고 모니터링하여 중추신경계 질환에서의 잠재적인 역할에 대한 통찰력을 얻는 것을 목표로 합니다. 동물의 미세혈관 기능 장애를 감지하는 것은 종종 침습적이거나 생체 외에서 수행되거나 비용이 많이 듭니다. 이 프로토콜을 통해 연구자들은 손톱 미세혈관 구조를 쉽고 저렴하게 평가하고 임상 손발톱 주름 모세혈관 검사 결과를 동물 모델로 변환할 수 있습니다. 우리는 미러링 말초 미세혈관 구조인 손톱을 시각화하기 위한 새로운 위치를 소개합니다. 손발톱 주름 모세혈관경 검사와 비교하여 손발톱 모세혈관경 검사는 미세혈관 형태 및 구조를 더 잘 관찰할 수 있는 더 넓은 영역을 제공합니다.

[강사] 시작하려면 마취된 마우스를 수술대에 놓아 시술을 진행합니다. 그런 다음 각막이 건조해지는 것을 방지하기 위해 윤활제 아이 젤 또는 멸균 비약용 안과용 연고를 양쪽 눈에 바릅니다. 그런 다음 노즈콘을 사용하여 동물을 마취 상태로 유지하고 어플리케이터를 사용하여 발 전체에 충분한 양의 제모 크림을 바릅니다. 발과 손톱 부분을 완전히 덮으십시오. 크림을 2분 동안 방치한 후 깨끗한 티슈로 제모 크림을 조심스럽게 닦아내고 미지근한 멸균수로 발을 씻으십시오. 모피 제거 후 24시간 후, 섭씨 21.5도에서 22.5도 사이로 유지되는 온도 조절실에 모세혈관경 장비를 설치합니다. USB 연결을 통해 모세관을 노트북 컴퓨터에 연결합니다. 노트북에서 Debut 비디오 소프트웨어 응용 프로그램을 엽니다. 마우스를 적절하게 마취한 후 윤활제 아이 젤 또는 멸균 비약용 안과 연고를 양쪽 눈에 바릅니다. 발 아래에 흰색 실험실 테이프 또는 유사한 배경 재료를 놓아 대비를 높이고 혈관 시각화를 개선합니다. 이제 뒷발 배상복을 대물렌즈 아래의 실험실 테이프 플랫폼에 위로 향하게 배치합니다. 어플리케이터를 사용하여 발가락을 부드럽게 벌려 현미경 대물렌즈 아래의 손톱을 분리합니다. 최적의 혈관 이미징을 위해 네일베드가 명확하게 분리되어 있는지 확인하십시오. 모세관으로 확대되는 것을 시각화하고 X-및 Y-단계 조절기와 배율 휠을 조정하여 손톱에 초점을 맞춰 선명한 이미지를 얻습니다. 눈부심을 줄이고 집중력을 향상시키려면 발에 침지 오일을 넉넉하게 발라 손톱을 완전히 덮습니다. 뒷발의 두 번째 손가락의 손톱은 가장 큰 손톱이며 생쥐에서 가장 쉽게 이미지를 얻을 수 있으므로 초점을 맞춥니다. X-및 Y-s를 조정합니다.tage 조절기와 확대 휠을 사용하여 선박 네트워크에 초점을 맞춥니다. 눈부심을 최소화하고 네일 용기 네트워크를 볼 수 있도록 대물렌즈를 조정합니다. 비디오를 녹화하려면 Debut에서 빨간색 녹화 버튼을 누르세요. 각 비디오를 적절한 프로젝트 폴더에 저장하고 그에 따라 각 비디오에 레이블을 지정합니다. 그런 다음 ImageJ 소프트웨어를 열고 파일을 소프트웨어 인터페이스로 드래그하여 이미지를 로드합니다. 밝기와 대비를 조정하려면 이미지를 선택한 다음 조정 및 밝기/대비를 선택합니다. 이 도구는 이미지의 대비를 변경하여 혈관 형태를 더 잘 시각화하는 데 도움이 됩니다. 이미지가 조정되면 밝기/대비 도구에서 설정을 클릭합니다. 마지막으로 파일, 다른 이름으로 저장으로 이동하여 Tiff를 선택하여 이미지를 저장합니다. 손톱 혈관 형태는 모세혈관경 방법을 사용하여 성공적으로 이미지화되었습니다. 전형적인 마우스 못 박힌 맥관 구조는 구심성 혈관, 원심성 혈관 및 둘을 연결하는 모세혈관 네트워크로 구성되었습니다. 손톱 모세관 네트워크는 SV129/S6 배경 및 C57/B6J 배경의 야생형 마우스에서 입증된 바와 같이 서로 다른 마우스 계통에서 일관되었습니다.