Name: HeLa 세포를 이용한 항-MDA5 자가항체 검출 및 광학 현미경을 이용한 면역세포화학(Immunocytochemistry) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-31T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 55 s
Description: 배우세요 면역세포화학법을 이용한 항-MDA5 자가항체 검출 방법을 HeLa 세포에서. 이 기술은 피부근염 환자의 간질성 폐질환 진단 정확도를 높이고 안전하고 비용 효율적인 검사를 제공합니다.

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<ol><li>Mehta, P., Machado, P. M., Gupta, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+and+managing+anti-MDA5+dermatomyositis%2C+including+potential+COVID-19+mimicry%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatol+Int%22%5BJournal%5D)">Understanding and managing anti-MDA5 dermatomyositis, including potential COVID-19 mimicry.</a> Rheumatol Int. 41 (6), 1021-1036 (2021).</li>
<li>Tansley, S. L., McHugh, N. J., Wedderburn, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+and+juvenile+dermatomyositis%3A+are+the+distinct+clinical+features+explained+by+our+current+understanding+of+serological+subgroups+and+pathogenic+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Adult and juvenile dermatomyositis: are the distinct clinical features explained by our current understanding of serological subgroups and pathogenic mechanisms.</a> Arthritis Res Ther. 15 (2), 211(2013).</li>
<li>Fujisawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+myositis-associated+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Medicina%22%5BJournal%5D)">Management of myositis-associated interstitial lung disease.</a> Medicina. 57 (4), 347(2021).</li>
<li>Sasaki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+initiation+of+plasma+exchange+therapy+for+a+patient+with+anti-MDA5+autoantibody-positive+dermatomyositis+developing+rapidly+progressive+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Rheumatol+Case+Rep%22%5BJournal%5D)">Early initiation of plasma exchange therapy for a patient with anti-MDA5 autoantibody-positive dermatomyositis developing rapidly progressive interstitial lung disease.</a> Mod Rheumatol Case Rep. 5 (1), 87-92 (2021).</li>
<li>Go, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+benefit+associated+with+early+cyclosporine+treatment+for+dermatomyositis-associated+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatol+Int%22%5BJournal%5D)">Survival benefit associated with early cyclosporine treatment for dermatomyositis-associated interstitial lung disease.</a> Rheumatol Int. 36 (2), 125-132 (2015).</li>
<li>Tsuji, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicenter+prospective+study+of+the+efficacy+and+safety+of+combined+immunosuppressive+therapy+with+high-dose+glucocorticoid%2C+tacrolimus%2C+and+cyclophosphamide+in+interstitial+lung+diseases+accompanied+by+anti-melanoma+differentiation-associated+gene+5-positive+dermatomyositis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Multicenter prospective study of the efficacy and safety of combined immunosuppressive therapy with high-dose glucocorticoid, tacrolimus, and cyclophosphamide in interstitial lung diseases accompanied by anti-melanoma differentiation-associated gene 5-positive dermatomyositis.</a> Arthritis Rheumatol. 72 (3), 488-498 (2020).</li>
<li>Hozumi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+assessment+of+myositis-specific+autoantibodies+in+polymyositis%2Fdermatomyositis-associated+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Med%22%5BJournal%5D)">Comprehensive assessment of myositis-specific autoantibodies in polymyositis/dermatomyositis-associated interstitial lung disease.</a> Respir Med. 122, 1-8 (2016).</li>
<li>Nakashima, R., Hosono, Y., Mimori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+significance+and+new+detection+system+of+autoantibodies+in+myositis+with+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lupus%22%5BJournal%5D)">Clinical significance and new detection system of autoantibodies in myositis with interstitial lung disease.</a> Lupus. 25 (8), 925-933 (2016).</li>
<li>Koga, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+diagnostic+utility+of+anti-melanoma+differentiation-associated+gene+5+antibody+testing+for+predicting+the+prognosis+of+Japanese+patients+with+DM%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology%22%5BJournal%5D)">The diagnostic utility of anti-melanoma differentiation-associated gene 5 antibody testing for predicting the prognosis of Japanese patients with DM.</a> Rheumatology. 51 (7), 1278-1284 (2012).</li>
<li>Fuzzi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-MDA5+dermatomyositis%3A+an+update+from+bench+to+bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Anti-MDA5 dermatomyositis: an update from bench to bedside.</a> Curr Opin Rheumatol. 34 (6), 365-373 (2022).</li>
<li>Sato, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoantibodies+to+a+140-kd+polypeptide%2C+CADM-140%2C+in+Japanese+patients+with+clinically+amyopathic+dermatomyositis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Autoantibodies to a 140-kd polypeptide, CADM-140, in Japanese patients with clinically amyopathic dermatomyositis.</a> Arthritis Rheum. 52 (5), 1571-1576 (2005).</li>
<li>Tansley, S. L., Diederichsen, L. P., Zampeli, V. A., McHugh, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+reliability+of+immunoassays+to+detect+autoantibodies+in+patients+with+myositis+is+dependent+on+autoantibody+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology%22%5BJournal%5D)">The reliability of immunoassays to detect autoantibodies in patients with myositis is dependent on autoantibody specificity.</a> Rheumatology. 59 (5), 1029-1034 (2020).</li>
<li>Chen, Y. L., Li, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+predictive+value+of+myositis+antibody+line+blot+testing+in+patients+with+suspected+idiopathic+inflammatory+myopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Positive predictive value of myositis antibody line blot testing in patients with suspected idiopathic inflammatory myopathy.</a> Muscle Nerve. 69 (3), 345-350 (2024).</li>
<li>Nombel, A., Pin, J. J., Fabien, N., Miossec, P., Coutant, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+performance+of+an+indirect+immunofluorescence+assay+for+the+detection+of+anti-MDA5+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the performance of an indirect immunofluorescence assay for the detection of anti-MDA5 antibodies.</a> Biomedicines. 10 (12), 3125(2022).</li>
<li>Nakashima, R., Hosono, Y., Mimori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+significance+and+new+detection+system+of+autoantibodies+in+myositis+with+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lupus%22%5BJournal%5D)">Clinical significance and new detection system of autoantibodies in myositis with interstitial lung disease.</a> Lupus. 25 (8), 925-933 (2016).</li>
<li>Sato, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoantibodies+to+a+140-kd+polypeptide%2C+CADM-140%2C+in+Japanese+patients+with+clinically+amyopathic+dermatomyositis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Autoantibodies to a 140-kd polypeptide, CADM-140, in Japanese patients with clinically amyopathic dermatomyositis.</a> Arthritis Rheum. 52 (5), 1571-1576 (2005).</li>
<li>Chang, Y. C., Yang, L., Budhram, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+predictive+value+of+myositis+antibody+line+blot+testing+in+patients+with+suspected+idiopathic+inflammatory+myopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Positive predictive value of myositis antibody line blot testing in patients with suspected idiopathic inflammatory myopathy.</a> Muscle Nerve. 69 (5), 626-630 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>24웰 플레이트 (1.9cm&sup2;/well)</td><td>코 닝</td><td>354541</td><td></td></tr><tr><td>항생제-항균제.</td><td>깁코</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>비커</td><td>파이렉스</td><td>1000-600</td><td></td></tr><tr><td>원뿔관 (15 mL)</td><td>코 닝</td><td>430052</td><td></td></tr><tr><td>원뿔관 (50 mL)</td><td>코 닝</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>이온 제거 증류수</td><td></td><td></td><td>저희의 탈이온화 증류수는 Milli-Q 시스템을 사용하여 자체 생산됩니다(1열: Quantum TEX, SN: F4EB53476; 2열: 프리팍, SN: F1CB11442)</td></tr><tr><td>태아 소 혈청 특성화</td><td>시티바</td><td>SH30396.03</td><td></td></tr><tr><td>눈금식 실린더 (50 mL)</td><td>비틀랩</td><td>64804</td><td></td></tr><tr><td>헤마톡실린 질 II</td><td>라이카</td><td>3801522</td><td></td></tr><tr><td>하이클론 둘베코' 고포도당 변형 이글 미디엄</td><td>시티바</td><td>SH30243.02</td><td></td></tr><tr><td>리포펙타민 2000 형질전환 시험</td><td>인비트로젠</td><td>11668019</td><td>트랜스펙션 시약</td></tr><tr><td>MDA-5 (D74E4) 토끼 mAb</td><td>세포 신호 전달 기술</td><td>5321</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기 튜브 (1.5 mL 에펜도르프 튜브)</td><td>액시젠</td><td>142503</td><td></td></tr><tr><td>옵티-MEM I 환원 혈청 배지</td><td>깁코</td><td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>궤도 셰이커 (선택 사항)</td><td>퍼스트렉</td><td>S300R</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>시그마-올드리치</td><td></td><td>1배 PBS에서 4%</td></tr><tr><td>PBS</td><td>프로 테크</td><td>ME222605</td><td></td></tr><tr><td>pENTER-MDA5</td><td>비진 바이오사이언스 주식회사</td><td>CH863586</td><td></td></tr><tr><td>페르옥시다제 아피니퓨어 염소 항인간 IgG (H+L)</td><td>잭슨 면역연구소</td><td>109-035-003</td><td></td></tr><tr><td>피펫 컨트롤러</td><td>써모 사이언티픽</td><td>130165</td><td></td></tr><tr><td>피페테스&nbsp;</td><td>길슨</td><td></td><td></td></tr><tr><td>피펫과 피펫 팁(10 & micro; L)</td><td>QSP</td><td>104-Q</td><td></td></tr><tr><td>피펫과 피펫 팁(200 & 마이크로; L)</td><td>QSP</td><td>T090-Q</td><td></td></tr><tr><td>피펫과 피펫 팁(1000 & micro; L)</td><td>QSP</td><td>111-Q</td><td></td></tr><tr><td>혈청학적 피펫 (5 mL)</td><td>SPL</td><td>91005</td><td></td></tr><tr><td>혈청학적 피펫 (10 mL)</td><td>SPL</td><td>91010</td><td></td></tr><tr><td>혈청학적 피펫 (25 mL)</td><td>SPL</td><td>91025</td><td></td></tr><tr><td>SignalStain DAB 기판 키트</td><td>세포 신호 전달</td><td>8059</td><td>PBS 0.3%</td></tr></tbody></table>

hela 세포를 이용한 항-mda5 자가항체 검출 및 광학 현미경을 이용한 면역세포화학(immunocytochemistry)

Detection of Anti-MDA5 Autoantibodies Using HeLa Cells and Immunocytochemistry with Light Microscopy

테스트를 수행하는 직원은 평가 과정에서 잠재적인 편향을 최소화하기 위해 샘플을 채취한 특정 환자를 포함하여 샘플의 신원에 대해 눈이 멀었습니다. 그러나 건강한 대조군 샘플은 눈가림을 받지 않았지만 일관되게 명확하고 명확한 결과를 생성했습니다.
그림 1A 는 pENTER-MDA5 구조물로 형질감염된 HeLa 세포에서 MDA5의 성공적인 발현을 보여줍니다. 형질감염 효율을 검증하기 위해 상용 항-MDA5 항체를 사용하여 ICC를 수행했습니다. 형질감염된 세포의 약 50%에서 강한 갈색 세포질 염색이 관찰되었으며, 이는 강력한 MDA5 단백질 발현을 나타냅니다. 대조적으로, 동일한 조건에서 처리된 형질감염되지 않은 세포는 세포질 염색을 나타내지 않아 항체의 특이성과 내인성 MDA5 발현의 부재를 확인했습니다....

HeLa 세포를 이용한 항-MDA5 자가항체 검출 및 광학 현미경을 이용한 면역세포화학(Immunocytochemistry)

Anti-MDA5 autoantibodies are critical biomarkers for dermatomyositis (DM), amyopathic dermatomyositis (CADM), and polymyositis (PM), particularly in ...

detection-anti-mda5-autoantibodies-using-hela-cells

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

최근 몇 년 동안, 살아있는 세포 기반 분석은 표면과 형태 적 항원에 대한 항체를 검출하기 위해 성공적으로 사용되어왔다. 여기서, 우리는 많은 환자 코호트의 분석을 가능 계측법 높은 처리량의 흐름을 사용하는 방법을 설명한다. 새로운 항체의 검출은 면역 매개 질환의 진단과 치료를 향상시킬 것입니다.

인간 혈청에있는 N-메틸-D-아스파 라진 산염 수용체 또는 도파민 2 수용체에 대한 항체를 검출하는 높은 처리량 유동 세포 계측법 세포 기반 분석

여기에서 우리는 적혈구에 대한 항체에 의해 유도 된 보체 활성화를 측정하기위한 두 가지 분석을 설명합니다. 현재의 분석을 통해 가장 큰 장점은 양적 및 쉬운 해석하는 성격이다.

적혈구에 대한 항체에 의한 보체 활성의 정량 검출하는 방법

주요 조직 적합성 복합체 클래스 II dextramers 직접 염색으로 뇌와 심장 자기 반응성 CD4 T 세포를 감지하는 프로토콜은이 보고서에 설명되어 있습니다. 종합적인 분석을 위해, 시츄 항원 특이 CD4 + T 세포의 빈도를 열거하는 신뢰할 수있는 방법도 고안되어있다.

주요 조직 적합성 복잡한 클래스 II Dextramers을 사용하여 뇌와 심장에있는자가 반응 CD4 T 세포의 제자리 탐지에

항체 중화를 평가하고 효과적인 백신 면역원의 설계를 안내하려면 바이러스 표면 항원 구조를 이해하는 것이 필요합니다. 여기에서는 특정 anti-Env 항체에 의해 transfection된 세포의 표면에서 발현되는 trimeric HIV-1 Env의 인식에 대한 연구를 가능하게 하는 세포 기반 ELISA 분석에 대해 설명합니다.

셀 기반의 ELISA 분석을 사용하여 HIV-1 삼량 봉투 당 단백질의 구조적 평가

그대로 클래스 I HLA / 펩타이드 복합체는 암 관련 잠재적 바이오 마커를 나타내는 암세포 흘린된다. 모노클로 날 항체, 쉐드 MIF / HLA-A의 검출을 흉내 라벨없는 센서 기술 및 T 세포 수용체를 활용 * 02 : MDA-MB-231 세포 상청액 01 착물은, 인간 혈청 아군 및 환자 혈장의 개발을 가능하게 입증된다 새로운 암 진단 플랫폼입니다.

라벨이없는 바이오 센서 기술을 활용 유방암 인간 백혈구 항원 바이오 마커의 검출

여기에서는 인간과 생쥐의 혈청 IgG 및 IgM 자가항체를 동시에 검출하는 데 사용할 수 있는 맞춤형 항원 마이크로어레이를 생성하는 방법을 설명합니다. 이러한 어레이를 통해 관심 항원 또는 항원결정기에 대한 항체를 고처리량 및 정량적으로 검출할 수 있습니다.

의 IgG 및 IgM의자가 항체의 동시 검출을위한 2 색 항원 마이크로 어레이의 생성

우리는 ectopically NMDA 수용 체에 대 한 자가 면역 뇌염으로 의심 되는 환자의 혈액에서 검출 하는 항으로 인간 배아 세포 (HEK293)에서 녹색 형광 단백질 태그로 NMDA 수용 체의 NR1 소 단위를 표현. 이 간단한 방법 임상 설정에서 심사 적합 있을 수 있습니다.

Autoantibody N-메 틸-D-Aspartate (NMDA) 수용 체에 대 한 혈액에서 검출 하는 간단한 세포 기반 면역 형광 분석 결과

DFS70 자가 기존의 형 간염-2 기질을 사용 하는 경우 정확한 해석을 도전 만드는 일반적인 반핵 항 체 질병 관련 된 패턴을 모방. 프로토콜에서는 기존의 형 간염-2 검사 및 monospecific 및 혼합된 아나 긍정적인 경우에 높은 신뢰와 DFS70 패턴을 구별 아나 소설 조작된 형 간염 2 기판의 이점을 설명 합니다.

Monospecific 및 소설 형 간염-2 엘리트/DFS70 녹아웃 기판으로 아나 심사 중 혼합된 DFS70 패턴의 동시 구별

우리는이 질병에서 볼 수있는 성별 차이를 포함하여 약물 유발 자가면역 간염의 발병 기전을 연구하는 데 활용할 수있는 BALB / c 마우스의 생체 내 예방 접종, 번역 형 간염 모델을 설명합니다. 우리는이 모델이 생체 내 및 시험관 내 실험 기술을 사용하여 재현 가능한 분석을 시연하는 방법을 설명 할 것입니다.

병원성 메커니즘 연구를위한 BALB / c 마우스에서 약물 유도,자가 면역 간염의 유도

이 논문은 알칼리성 포스파타제 접합 ScFv D11 항체를 사용하여 면역형광법에 의해 조직에서 이소레부글란딘을 측정하기 위한 상세한 방법론을 제공합니다. 마우스와 인간 모두의 고혈압 모델은 조직 샘플에서 이돌부글란딘 측정과 관련된 단계별 절차 및 기본 원리를 설명하는 데 사용됩니다.

D11 scFv-알칼리성 포스파타제 융합 단백질 및 면역형광을 이용한 조직 내 이솔레부글란딘의 직접 검출

마이코플라스마 폐렴 감염에서 혈청 검사는 좋은 결과를 생성할 수 있지만 면역학적 교차 반응으로 인해 특이도가 낮습니다. 이 논문에 설명된 사내 항원 포획 ELISA는 높은 종 특이성을 보장하며 M. pneumoniae의 정확한 진단을 위한 신뢰할 수 있는 선별 검사로 나타났습니다.

마이코플라스마 폐렴의 특이적 검출을 위한 항원-포획 효소 결합 면역흡착 분석

배우세요 면역세포화학법을 이용한 항-MDA5 자가항체 검출 방법을 HeLa 세포에서. 이 기술은 피부근염 환자의 간질성 폐질환 진단 정확도를 높이고 안전하고 비용 효율적인 검사를 제공합니다.

HeLa 세포를 이용한 항-MDA5 자가항체 검출 및 광학 현미경을 이용한 면역세포화학(Immunocytochemistry)

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