Name: 반복적 표백은 핵심 시설에 염색 자동화를 사용하여 다양성을 확장합니다. (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 52 s
Description: 배우세요 IBEX 방법을 활용한 자동 조직 염색 및 티라미드 신호 증폭 기술로 신경과학 및 조직학 연구에서 이미지 품질과 검출 민감도를 향상시키는 최적화 전략입니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+an+iterative+immunolabeling+and+chemical+bleaching+method+for+high-content+imaging+of+diverse+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protoc%22%5BJournal%5D)">IBEX: an iterative immunolabeling and chemical bleaching method for high-content imaging of diverse tissues.</a> Nature Protoc. 17 (2), 378-401 (2022).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+A+versatile+multiplex+optical+imaging+approach+for+deep+phenotyping+and+spatial+analysis+of+cells+in+complex+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">IBEX: A versatile multiplex optical imaging approach for deep phenotyping and spatial analysis of cells in complex tissues.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (52), 33455-33465 (2020).</li>
<li>Prichard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+automated+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Pathol+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Overview of automated immunohistochemistry.</a> Arch Pathol Lab Med. 138, 1578-1582 (2014).</li>
<li>Stack, E. C., Wang, C., Roman, K. A., Hoyt, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+immunohistochemistry%2C+imaging%2C+and+quantitation%3A+a+review%2C+with+an+assessment+of+Tyramide+signal+amplification%2C+multispectral+imaging+and+multiplex+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis.</a> Methods. 70, 46-58 (2014).</li>
<li>Speranza, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+differences+in+immune+dynamics+during+SARS-CoV-2+infection+in+rhesus+macaques%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">Age-related differences in immune dynamics during SARS-CoV-2 infection in rhesus macaques.</a> Life Sci Alliance. 5, 4(2022).</li>
<li>Parra, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedural+requirements+and+recommendations+for+multiplex+immunofluorescence+tyramide+signal+amplification+assays+to+support+translational+oncology+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Procedural requirements and recommendations for multiplex immunofluorescence tyramide signal amplification assays to support translational oncology studies.</a> Cancers (Basel). 12 (2), 255(2020).</li>
<li>Hoyt, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+immunofluorescence+and+multispectral+imaging%3A+forming+the+Basis+of+a+clinical+test+platform+for+immuno-oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Multiplex immunofluorescence and multispectral imaging: forming the Basis of a clinical test platform for immuno-oncology.</a> Front Mol Biosci. 8, 674747(2021).</li>
<li>Bankhead, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((QuPath%3A+Open+source+software+for+digital+pathology+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">QuPath: Open source software for digital pathology image analysis.</a> Sci Rep. 7, 16878(2017).</li>
<li>Feng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+analysis+with+SPIAT+and+spaSim+to+characterize+and+simulate+tissue+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Spatial analysis with SPIAT and spaSim to characterize and simulate tissue microenvironments.</a> Nat Commun. 14, 2697(2023).</li>
<li>Meyer, L., Eling, N., Bodenmiller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cytoviewer%3A+an+R%2FBioconductor+package+for+interactive+visualization+and+exploration+of+highly+multiplexed+imaging+data%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">cytoviewer: an R/Bioconductor package for interactive visualization and exploration of highly multiplexed imaging data.</a> BMC Bioinformatics. 25, 9(2024).</li>
<li>Windhager, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+end-to-end+workflow+for+multiplexed+image+processing+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">An end-to-end workflow for multiplexed image processing and analysis.</a> Nat Protoc. 18 (11), 3565-3613 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>염색 시약 Alexa TSA 키트</td><td>서모피셔</td><td></td><td>오팔 현미경 필터가 없으면 대체 TSA 염료를 사용할 수 있습니다. 여기에는 Alexa Fluor 488(청록색 채널), Alexa Fluor 555 또는 568(빨간 채널), Alexa Fluor 647(원적색 채널), Alexa Fluor 750(적절한 필터가 장착된 경우 근적외선)이 포함됩니다. &nbsp;</td></tr><tr><td>항체 Arg1</td><td>세포 신호 전달</td><td>93668</td><td>그림 4 1:100에서 사용</td></tr><tr><td>재료< > 블레이드</td><td>라이카 바이오시스템</td><td></td><td>또는 유사하게 조직 유형에 따라 높거나 낮은 프로필이 달라집니다</td></tr><tr><td>항체 CD11b</td><td>앱캠</td><td>ab133357</td><td>그림 4 1:2000에서 사용</td></tr><tr><td>항체 CD163</td><td>앱캠</td><td>AB182422</td><td>그림 4 1:500에서 사용</td></tr><tr><td>항체 CD31</td><td>세포 신호 전달</td><td>77699S</td><td>그림 2 1:100에서 사용</td></tr><tr><td>항체 CD3e</td><td>다코</td><td>A045201-2</td><td>그림 1 1:100에서 사용</td></tr><tr><td>도구 코플린 병</td><td>피셔 사이언티브</td><td>01-816-21</td><td>혹은 비슷한 경우도 있습니다</td></tr><tr><td>재료 커버슬립</td><td>VWR</td><td>V48393-026</td><td>혹은 비슷한 경우도 있습니다</td></tr><tr><td>항체 CX3CR1</td><td>앱캠</td><td>AB308613</td><td>그림 4 1:450에서 사용</td></tr><tr><td>스테인 DAPI</td><td>아코야</td><td>FP1490</td><td></td></tr><tr><td>소프트웨어< bri/> FIJI</td><td></td><td></td><td>신호 강도 측정에 사용됨</td></tr><tr><td>슬라이드<브래/> 피셔 슈퍼프론트 슬라이드</td><td>피셔 사이언티브</td><td>22-037-246</td><td>혹은 비슷한 경우도 있습니다</td></tr><tr><td>소프트웨어 HALO</td><td>인디카 연구소</td><td></td><td>시판 중인 이미지 분석 소프트웨어 예시. 이미지를 정렬하고 분석하는 데 사용되었습니다.</td></tr><tr><td>항체 Iba1</td><td>세포 신호 전달</td><td>17191</td><td>그림 4 1:800에서 사용됨</td></tr><tr><td>Software inForm</td><td>아코야</td><td></td><td>신호 강도 측정에 사용됨</td></tr><tr><td>항체 iNOS</td><td>앱캠</td><td>AB283655</td><td>그림 4 1:400에서 사용</td></tr><tr><td>기기 라이카 본드 Rx (또는 RXm)</td><td>라이카 바이오시스템</td><td>21.2201</td><td>본문에서는 "오토스테이너 1"로 언급됩니다. 염색 상자와 대량 정액을 포함한 모든 관련 시약도 준비되어 있는지 확인하세요.</td></tr><tr><td>시약 LiBH4</td><td>시그마-올드리치</td><td>62460-5G-F</td><td>무수물 환경에서 보관하세요</td></tr><tr><td>악기 만트라 스냅</td><td>아코야</td><td></td><td>염료를 분리하기 위해서는 다중 분광 플로러센트 현미경이 필요합니다. 오팔 염료를 감지하는 데 사용할 수 있는 현미경 예시입니다.</td></tr><tr><td>도구 미크토임</td><td>라이카 바이오시스템</td><td></td><td>또는 브러시 같은 선호하는 액세서리로 비슷한 것도 가능합니다</td></tr><tr><td>염색 시약 Opal IHC 480 키트</td><td>아코야</td><td>FP1500001KT</td><td>그림 4에서 사용됨</td></tr><tr><td>스테인닝 시약 Opal IHC 6-plex Plex 키트</td><td>아코야</td><td>NEL821001KT</td><td>520과 620은 표백하지 않으며, 그림 1, 2, 4에서 사용된다</td></tr><tr><td>염색 시약 오팔 IHC 780 키트</td><td>아코야</td><td>FP1501001KT</td><td>그림 4에서 사용됨</td></tr><tr><td>툴<브러/> 오븐</td><td>밀리포어 시그마</td><td>Z683329</td><td>또는 비슷한 방식으로, 오토스테이너에서도 가능합니다</td></tr><tr><td>항체 판사이토케라틴</td><td>앱캠</td><td>AB9377</td><td>그림 4 1:50에서 사용</td></tr><tr><td>시약 PBS (선택 사항)</td><td>피셔 사이언티브</td><td>AAJ61196AP</td><td></td></tr><tr><td>인스<브르/> 페노이미저</td><td>아코야</td><td></td><td>소프트웨어에 포함된 온보드 스펙트럼 언믹싱을 포함한 다중 스펙트럼 전체 슬라이드 영상</td></tr><tr><td>시약 프로롱 골드 안티페이드</td><td>피셔 사이언티브</td><td>P36961</td><td>또는 유사한 수성 매체</td></tr><tr><td>항체 ProSP-C n-말단 (ProSPC)</td><td>세븐 힐스 바이오리시약</td><td>WRAB-9337</td><td>그림 4 1:250에서 사용</td></tr><tr><td>항체< > 분노</td><td>R& D</td><td>MAB1179</td><td>그림 1과 2에서 1:50에서 사용</td></tr><tr><td>시약 반응 버퍼</td><td>로슈</td><td>NC1895692</td><td>벤타나 오토스테이너와 함께 사용하기</td></tr><tr><td>항체 SARS-CoV-2-N</td><td>세포 신호 전달</td><td>68344</td><td>그림 2 1:1000에서 사용</td></tr><tr><td>슬라이드 TOMO 부착 CC 현미경 슬라이드-WH</td><td>아반틱</td><td>SKUSL6519-1</td><td>조직 부착이 걱정된다면</td></tr><tr><td>인스트루먼트 벤타나 디스커버리 울트라</td><td>로슈</td><td></td><td>본문에서는 "오토스테이너 2"라고 불립니다. 염색 상자와 대량 정액을 포함한 모든 관련 시약도 준비되어 있는지 확인하세요.</td></tr><tr><td>시약 세척 버퍼</td><td>라이카 바이오시스템</td><td>AR9590</td><td>라이카 본드 오토스테이너와 함께 사용하기</td></tr><tr><td>시약 물</td><td>피셔 사이언티브</td><td>15-230-147</td><td>DI가 가장 좋고, 밀리포어가 아닙니다</td></tr><tr><td>툴<브르/> 워터 배스</td><td>라이카 바이오시스템</td><td>140607020C1</td><td>혹은 비슷한 경우도 있습니다</td></tr></tbody></table>

반복적 표백은 핵심 시설에 염색 자동화를 사용하여 다양성을 확장합니다.

Iterative Bleaching Extends Multiplicity with Use of Staining Automation for Core Facilities

Iterative Bleaching Extends Multiplicity (IBEX) is a highly sensitive tyramide signal amplification (TSA)-based multi-round fluorescence imaging technique ...

iterative-bleaching-extends-multiplicity-with-use-staining-automation

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

대량 병렬 DNA 시퀀싱 기술을 기반으로 한 게놈 어셈블리는 대개 매우 단편화되어 있습니다. 물리적 염색체 지도의 개발은 게놈 어셈블리를 잠재적으로 개선할 수 있습니다. 본 연구에서는 물리적 지도 제작의 처리량을 크게 높일 수 있는 염색체 준비, 형광 in situ 하이브리드화 및 이미징에 대한 혁신적인 접근 방식을 제시합니다.

자동을 사용하여 염색체의 높은 처리량 물리적 매핑<em&gt; 현장에서</em&gt; 하이브리드화

이 원고에서는 광물화된 조직의 동결된 절편에 대한 여러 차례의 형광 이미징에서 여러 차례의 반응 측정의 정렬된 복합 이미지를 생성하기 위해 고처리량 반자동 극저온 조직학 플랫폼을 제시합니다.

높은 처리량, 광물 조직의 멀티 이미지 Cryohistology

자세한 프로토콜 6-마커 멀티플렉스 면역 형광 패널 최적화 수행 위한 더 일관 된 결과를 짧은 절차 시간 자동된 염색기를 사용. 이 방법은 종양 면역 연구에 대 한 모든 실험실에 의해 직접 적응 될 수 있다.

포 르 말린 고정 암 조직 표본에 면역-종양학 연구를 위한 자동화 된 다중 면역 형광 패널

우리는 photobleaching 실험 라이브 셀 후 형광 복구에 대 한 포괄적이 고 실용적인 프로토콜을 설명 합니다. 프로토콜은 aggresome 같은 유발된 구조에 노란색 형광 단백질 태그 p62의 이동성 측정 하는 데 사용 됩니다, 하지만 그것은 현미경 시스템 및 형광 단백질의 다양 한에 적용할 수 있습니다.

Aggresome 같은 유도 구조에서 Photobleaching의 황색 형광 단백질 태그 p62 후 형광 복구

우리는 냉동 된 조직에 다중 스펙트럼 이미징을 수행하는 빠른 염색 방법을 설명합니다.

냉동 조직 섹션의 다스펙트럼 형광 이미징을위한 신속한 방법

이 보고서는 자동 슬라이드 염색기에서 다중 면역형광(mIF) 분석을 위한 자동 프로토콜에 대해 설명합니다. 이는 표준 고처리량 조직 자동염색기 및 전체 슬라이드 형광 이미저에서 공간 단백질체학의 높은 재현성을 보여주며, 이는 중개 연구에서 많은 수의 조직 슬라이드에 걸친 맞춤형 mIF 분석에 이상적입니다.

중개 연구를 위한 High-Throughput Automated Multiplex Immunofluorescence Assay

IBEX(Iterative-bleaching-extends-multiplexity)와 상용 뉴클레오티드 표지 분석(Click-iT EdU)의 조합은 고정된 냉동 쥐 조직 절편에서 매우 역동적인 과정에서 분열하는 세포 유형을 검출하고 분류할 수 있습니다. 또한 새로운 오픈 소스 이미지 처리 파이프라인은 처리량이 많은 이미지 획득 및 분석을 제공합니다.

조직 샘플의 피부 세포 표현형 및 증식 상태를 평가하기 위한 고처리량 이미징 및 분석 워크플로우

이 논문에서는 복막 전이의 3차원 구조를 특성화하기 위해 최적화된 다중 면역형광 프로토콜에 대해 설명합니다.

Iterative Bleaching Extends Multiplexity 접근법을 사용한 종양 함유 조직의 3차원 이미징

수동 IBEX 방법을 사용하여 저비용의 다목적 광조사 기술을 구현하면 상당한 네이티브 자가형광으로 인체 조직을 최적으로 이미징할 수 있습니다. 이 프로토콜은 도립 현미경, 널리 사용 가능한 시약 및 이미지 정렬 및 처리를 위한 오픈 소스 소프트웨어를 사용하여 보관된 임상 샘플에서 다중화된 전체 슬라이드 이미지를 얻는 방법을 자세히 설명합니다.

반복적인 표백을 위해 최적화된 워크플로우는 고도의 자가형광 임상 샘플의 멀티플렉시티 이미징을 확장합니다.

IBEX(Spectral Iterative Bleaching Extends Multiplexity)는 헤파린 차단을 추가하여 비특이적 결합을 최소화하고 스펙트럼 검출과 전산 혼합 해제를 활용하여 자가형광을 억제함으로써 기본 IBEX 기술을 기반으로 합니다. 이 접근 방식은 배경 소스를 줄이면서 이미지 획득을 가속화하여 강력한 다라운드, 고파라미터 공간 단백질체 분석을 가능하게 합니다.

비특이적 조직 형광을 최소화하기 위해 스펙트럼 공초점 현미경을 사용한 하이플렉스 이미징

배우세요 IBEX 방법을 활용한 자동 조직 염색 및 티라미드 신호 증폭 기술로 신경과학 및 조직학 연구에서 이미지 품질과 검출 민감도를 향상시키는 최적화 전략입니다.

반복적 표백은 핵심 시설에 염색 자동화를 사용하여 다양성을 확장합니다.

더 많은 동영상 탐색