Name: 쥐의 시신경에 주입하기 위한 경결막 접근법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 2 min 33 s
Description: 배우세요 쥐 시신경에 경결막 접근법을 이용한 최소침습 주입 기술로 신경섬유종증 1형 연구에서 치료제 전달을 개선하는 방법을 확인하세요.

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<ol><li>Korn, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+neuroprotective+effects+of+methylprednisolone+and+surgical+decompression+in+a+rodent+model+of+traumatic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the neuroprotective effects of methylprednisolone and surgical decompression in a rodent model of traumatic optic neuropathy.</a> Curr Eye Res. 47 (3), 461-467 (2022).</li>
<li>Lim, J. Y., Utzschneider, D. A., Sakatani, K., Kocsis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+attenuation+of+GABA+sensitivity+in+the+maturing+myelin-deficient+rat+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Dev+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The attenuation of GABA sensitivity in the maturing myelin-deficient rat optic nerve.</a> Brain Res Dev Brain Res. 72 (1), 15-20 (1993).</li>
<li>Singh, D., Dromel, P. C., Perepelkina, T., Baranov, P., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C6+cell+injection+into+the+optic+nerve+of+long-evans+rats%3A+A+short-term+model+of+optic+pathway+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">C6 cell injection into the optic nerve of long-evans rats: A short-term model of optic pathway gliomas.</a> Cell Transplant. 29, 963689720964383(2020).</li>
<li>Schwaner, S. A., Feola, A. J., Ethier, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+optic+nerve+head+biomechanics+in+a+rat+model+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+R+Soc+Interface%22%5BJournal%5D)">Factors affecting optic nerve head biomechanics in a rat model of glaucoma.</a> J R Soc Interface. 17 (165), 20190695(2020).</li>
<li>Ellouze, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+allotopic+expression+of+the+human+mitochondrial+ND4+prevents+blindness+in+a+rat+model+of+mitochondrial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Optimized allotopic expression of the human mitochondrial ND4 prevents blindness in a rat model of mitochondrial dysfunction.</a> Am J Hum Genet. 83 (3), 373-387 (2008).</li>
<li>Kwon, H., Park, M., Nepali, S., Lew, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-preconditioned+placenta-derived+mesenchymal+stem+cells+rescue+optic+nerve+axons+via+differential+roles+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+an+optic+nerve+compression+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-preconditioned placenta-derived mesenchymal stem cells rescue optic nerve axons via differential roles of vascular endothelial growth factor in an optic nerve compression animal model.</a> Mol Neurobiol. 57 (8), 3362-3375 (2020).</li>
<li>Pang, I. H., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+glaucoma+retinopathy+and+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">Rodent models for glaucoma retinopathy and optic neuropathy.</a> J Glaucoma. 16 (5), 483-505 (2007).</li>
<li>Raykova, K., Jones, M. V., Huang, H., Hoffman, P. F., Levy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally-invasive+Technique+for+Injection+into+Rat+Optic+Nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Minimally-invasive Technique for Injection into Rat Optic Nerve.</a> J Vis Exp. (99), e52249(2015).</li>
<li>Hallas, B. H., Wells, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+mulitple+injections+into+the+mamallian+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Kopf+Carrier%22%5BJournal%5D)">A novel technique for mulitple injections into the mamallian optic nerve.</a> Kopf Carrier. 54, 1-10 (2000).</li>
<li>Yan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+optic+nerve+transection+in+rats%3A+A+model+established+with+a+new+operative+approach+to+assess+secondary+degeneration+of+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Partial optic nerve transection in rats: A model established with a new operative approach to assess secondary degeneration of retinal ganglion cells.</a> J Vis Exp. (128), e56272(2017).</li>
<li>Han, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocompatibility+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+retinal+progenitor+cell+grafts+in+immunocompromised+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Biocompatibility of human induced pluripotent stem cell-derived retinal progenitor cell grafts in immunocompromised rats.</a> Cell Transplantation. 31, 1-25 (2022).</li>
<li>Tang, Y., Gutmann, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromatosis+Type+1-associated+optic+pathway+gliomas%3A+Current+challenges+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Manag+Res%22%5BJournal%5D)">Neurofibromatosis Type 1-associated optic pathway gliomas: Current challenges and future prospects.</a> Cancer Manag Res. 15, 667-681 (2023).</li>
<li>Pan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+of+biomimetic+polydopamine+nanocomposite+scaffold+promotes+optic+nerve+regeneration+through+modulating+inhibitory+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnol%22%5BJournal%5D)">Implantation of biomimetic polydopamine nanocomposite scaffold promotes optic nerve regeneration through modulating inhibitory microenvironment.</a> J Nanobiotechnol. 22 (1), 683(2024).</li>
<li>Gokoffski, K. K., Peng, M., Alas, B., Lam, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuro-protection+and+neuro-regeneration+of+the+optic+nerve%3A+recent+advances+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neuro-protection and neuro-regeneration of the optic nerve: recent advances and future directions.</a> Curr Opin Neurol. 33 (1), 93-105 (2020).</li>
<li>Negishi, H., Dezawa, M., Oshitari, T., Adachi-Usami, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+nerve+regeneration+within+artificial+Schwann+cell+graft+in+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Optic nerve regeneration within artificial Schwann cell graft in the adult rat.</a> Brain Res Bull. 55 (3), 409-419 (2001).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4',6-디아미디노-2-페닐인돌 디하이드로클로라이드(DAPI)</td><td>MilliporeSigma</td><td>D9542</td><td>1:10,000 희석, 냉동절편 염색에 사용</td></tr><tr><td>AAV 바이러스 입자</td><td>벡터빌더</td><td>N/A</td><td>시신경 주입에 사용되는 벡터</td></tr><tr><td>Aqua-Mount Mounting Medium</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-390-5</td><td>염색된 냉동절편 장착에 사용</td></tr> 소 <tr><td>혈청 알부민&nbsp;</td><td>Research Products International Corp</td><td>9048-46-8</td><td>염색 공정에 사용 냉동 절개</td></tr> 염소 <tr><td>항쥐 Alexa Fluor 488&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11006</td><td>1:1000 희석액, 냉동절개 염색에 사용 이</td></tr><tr><td>소플로란 가스</td><td>Primal Healthcare</td><td>66794-017-10</td><td>마취용 가스</td></tr><tr><td>라이카 TCS SPE 정립 공초점 현미경 시스템&nbsp;</td><td>라이카 마이크로시스템</td>즈 <td>N/A</td><td>공초점 현미경</td></tr><tr><td>루어 잠금 주사기</td><td>BD</td><td>309628</td><td>주사</td></tr>기 주사용 <tr><td>Microm HM505E 극저온 조절기&nbsp;</td><td>Microm</td><td>M-HM360 fom Marshall Scientific</td> 표<td>본 절편 쥐</td></tr><tr><td>항-GFP&nbsp에 사용;</td><td>BioLegend</td><td>338002</td><td>1:500 희석, 냉동절개 염색에 사용 척</td></tr><tr><td>수 후크</td><td>FST</td><td>10162-12</td><td>시신경 분리에 사용되는 후크</td></tr><tr><td>10마이크로리터 주사기</td><td>Hamilton</td><td>CAL 803901</td><td>주사용 주사기</td></tr><tr><td>33게이지 바늘</td><td>JBP</td><td>JBP3308B</td><td>주사용 바늘</td></tr><tr><td>Tissue-Tek OCT 화합물&nbsp;</td><td>VWR International</td><td>25608-930</td><td>극저온 몰드 가공에 사용</td></tr> 톱<tr><td>니 겸자</td><td>Bausch and Lomb</td><td>E1809</td><td>결막을 잡는 겸자</td></tr><tr><td>Westcott 곡선 건절개술 가위</td><td>Bausch and Lomb</td><td>E3323-R</td><td>주막 절개술을 만드는</td></tr></tbody></table> 가위

쥐의 시신경에 주입하기 위한 경결막 접근법

Transconjunctival Approach for Injection into the Rat Optic Nerve

쥐의 시신경 주입을 위해 이 기술을 사용한 대표적인 실험 결과는 그림 2에 나와 있습니다. 이 예에서는 10μL 주사기에 연결된 33G 바늘로 위에서 설명한 경결막 기술을 사용하여 아데노 관련 바이러스-eGFP(AAV-eGFP)를 쥐 시신경에 주입했습니다. 이러한 결과는 신경섬유종증 1(NF1)의 쥐 모델에서 AAV를 사용하여 시신경에 CRISPR 교정을 전달하려는 궁극적인 목표의 일환으로 시신경 주입을 연구하기 위해 이 기술을 사용하는 실험의 일부였습니다. 주입 기술을 개발하기 위해 염료와 AAV 벡터의 조합을 사용했습니다. 동물은 시신경에 주입된 지 7일 후에 희생되었습니다. 그런 다음 신경을 해부하고 항 GFP 항체로 라벨링하여 컨포칼 현미경으로 시신경을 이미징하여 물질이 시신경초를 성공적으로 관통하여 시신경에 들어갔는지 확인했습니다. 시신경으로의 물질의 성공적인 도입은 항체 염색에 의해 확인되었으며, 그림 2A에서 볼 수 있듯이 컨포칼 현미경 검사에서 녹색으로 나타났습니다. 시신경초를 통한 침투가 완전하지 않거나 바늘 궤도에서 물질이 유출된 경우, 그림 2C에서 볼 수 있듯이 신경 조직 내부가 아닌 시신경초의 가장자리를 따라 염색이 관찰되었습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68048/68048fig01.jpg"> 
그림 1: 수술 단계의 순서. (A) 결막은 톱니가 있는 집게로 잡고 Westcott 가위를 사용하여 윤부 절개술을 만듭니다. (B) 장부의 근막을 열고 뭉툭하게 절개한 후, 웨스트콧 가위의 도움으로 안와를 노출시킵니다. (C) 척수 고리를 삽입하여 시신경을 분리하는 데 사용합니다. (D) 위에 있는 안와 조직을 둔기로 절제한 후 척수 고리를 사용하여 시신경을 노출시킵니다. (E) 33G 바늘을 사용하여 시신경초를 뚫고 아데노바이러스나 염료를 시신경에 주입합니다. (F) 지구는 궤도로 다시 배치되고 결막은 주위 부위 위에 재배치됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68048/68048fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68048/68048fig02.jpg"> 
그림 2: AAV-eGFP(녹색)를 성공적으로 주입한 후 7일 후 쥐의 시신경을 보여주는 대표적인 형광 컨포칼 파노라마 이미지. (A) 시신경핵은 DAPI(파란색)로 표시되어 있습니다. 화살표가 있는 ONH는 시신경의 머리 또는 안와 끝을 나타내는 반면 시신경 끝은 "chiasm"으로 표시됩니다. (B) 안와에서 동결 냉동 절편 블록에 내장된 키즘까지 쥐의 시신경 사진. 신경은 시신경의 방향을 잡기 위해 안와(검은색 화살표로 표시된 주입 부위) 바로 뒤에 India Ink를 주입합니다. (C) AAV-eGFP(녹색) 주입 실패 후 7일 후 쥐의 시신경의 파노라마 형광 이미지로, 대부분의 벡터 현탁액이 신경관 밖으로 유출되어 시초를 전달했을 가능성이 있습니다. 시신경핵은 DAPI(파란색)로 표시되어 있습니다. ONH는 흰색 화살표로 표시된 신경 망막과 주입 부위 바로 뒤에 있는 시신경두를 나타냅니다. Chiasm과 흰색 화살표는 optic chiasm을 구분합니다. 스케일 바 = 400μm(A) 및 200μm(C). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68048/68048fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>변수</td>
			<td colspan="3">접근</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>경결막</td>
			<td>우수한</td>
			<td>옆의</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>피부 절개</td>
			<td>아니요</td>
			<td>예</td>
			<td>예</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>결막 절개</td>
			<td>예</td>
			<td>아니요</td>
			<td>아니요</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>현미경</td>
			<td>예</td>
			<td>예</td>
			<td>예</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>상안와근(superior orbital muscle)의 절개</td>
			<td>아니요</td>
			<td>예</td>
			<td>아니요</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>견인 봉합사</td>
			<td>아니요</td>
			<td>예</td>
			<td>예</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>척수 후크</td>
			<td>예</td>
			<td>아니요</td>
			<td>아니요</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>피부 봉합사</td>
			<td>아니요</td>
			<td>예</td>
			<td>예</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 1: 실험 연구를 위해 쥐의 시신경을 분리하기 위해 이전에 발표된 기술과의 비교. 피부 절개, 결막 절개, 수술 현미경, 상안와근 절제, 견인 봉합사, 척수 후크 및 피부 봉합사의 필요성을 포함한 변수를 경결막, 상결막 및 측면 접근법을 사용하여 비교합니다.

The rat serves as an important model for studying disorders of the optic nerve, including heritable, traumatic, neoplastic, and autoimmune conditions. ...

transconjunctival-approach-for-injection-into-the-rat-optic-nerve

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

Intravitreous 주사는 안구 질환 또는 현지 치료의 직접적인 응용 프로그램으로 시각 과학 연구에 널리 사용되는 기법입니다. 이 동영상은 유리 피펫과 1ml 주사기를 사용하여 intravitreous 사출을위한 프로토콜을 보여주었다. 과다 출혈 및 렌즈 손상을 피하에 대한 유용한 팁은 주어집니다.

안구 질환 모델 구축을위한 Intravitreous 사출

시신경의 절개면은 성인 CNS 손상의 널리 사용되는 모델입니다. 이 모델은 전 세계적으로 망막을 대상에 직접 망막 신경절 세포의 부상의 연결 인구를 대상으로 실험 조작의 번호를 수행하는 데 이상적입니다.

포유류의 CNS에서 시신경의 절개 후 실험에 대한 노는 방법

이 비디오는 마취된 쥐에서 상공막 정맥에 고긴장성 식염수를 주입하여 녹내장 유도를 보여줍니다. 식염수는 슐렘관을 통해 섬유주 그물망으로 들어가 조직 흉터를 유발하여 수액 유출을 차단하고 안압을 높입니다. 높은 압력은 망막 신경절 세포를 손상시켜 녹내장을 유발합니다.

쥐에서 녹내장을 유도하기 위한 고긴장성 식염수 주입 기술

쥐의 시신경에 직접 주입하는 것은 재생 연구에 유용합니다. 우리는 두개골을 열지 않는 쥐의 시신경에 직접 주입하는 최소 침습적 기술을 보여줍니다. 이 방법을 사용하면 수술 합병증을 최소화하고 회복 속도가 빨라집니다.

쥐 시신경에 주입을위한 최소 침습 기술

다음 보고서는 적절한 염료, 콘택트렌즈 및 레이저 매개변수를 사용하여 비동맥 전방 허혈성 시신경병증(rNAION)의 설치류 모델을 복제하는 방법을 설명합니다. 또한 in vivo에서 rNAION 병변을 평가하기 위한 적절한 단계를 밝힙니다.

Nonarteritic 전방 허혈성 시신경 병증의 설치류 모델 (rNAION)

망막하 주사는 단백질 및 바이러스 벡터와 같은 큰 치료제를 광수용체와 망막 색소 상피에 전달하는 가장 일반적인 기술입니다. 최소한의 부수적 손상과 빠른 회복 시간으로 망막하 공간을 성공적으로 표적으로 삼는 마우스의 대체 방법이 여기에 설명되어 있습니다.

망막 하 공간에 액세스하기위한 대안의 검증 사출 방법<i&gt;를 통해</i&gt;를 Transcleral 후방 접근

이 프로토콜은 신생아 기간 동안 쥐와 생쥐에서 사용할 수 있는 재현 가능한 정맥 투여 경로를 입증하는 것을 목표로 합니다. 이 절차는 주로 정맥 투여를 사용하는 신생아 치료실에서 약물 투여를 미러링하고자 하는 전임상 설치류 연구에 중요합니다.

후안와 정맥 주입의 신생아 설치류 모델

이 프로토콜은 중앙 각막 절개와 전방으로의 긴 터널을 사용하여 쥐에서 안내 주사 기술을 설명합니다. 이 주입 방법은 부주의한 조직 손상을 유발할 위험을 최소화하여 정밀도와 재현성을 향상시킵니다.

부작용 위험이 낮은 쥐에 대한 카메라내 주사

이 논문은 쥐의 망막하 주사 방법을 설명하며, 주사 부위와 망막 박리 부위를 모두 제어하기 위해 수술 중 시각화를 활용합니다.

쥐의 망막하 주사 및 망막 박리에 대한 수술 중 시각화

이 연구는 성체 쥐의 망막과 시신경에 치료제를 전달하는 방법론을 제시합니다. 또한, 성체 쥐의 시신경과 망막을 하향식으로 일괄적으로 수집하기 위해 독특한 조직 회수 방법이 도입되었습니다.

성체 쥐의 안구 치료 전달 및 고급 조직 회수(Ocular Therapeutic Delivery and Advanced Tissue Retrieval in adult rats)

배우세요 쥐 시신경에 경결막 접근법을 이용한 최소침습 주입 기술로 신경섬유종증 1형 연구에서 치료제 전달을 개선하는 방법을 확인하세요.

쥐의 시신경에 주입하기 위한 경결막 접근법

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