Name: 비특이적 조직 형광을 최소화하기 위해 스펙트럼 공초점 현미경을 사용한 하이플렉스 이미징 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 28 s
Description: 학습하세요 IBEX 워크플로우 최적화 방법을 헤파린 차단과 스펙트럼 검출을 활용하여 호산구가 풍부한 인체 조직에서 비특이적 형광을 억제하고 고차원 공간 단백질체 분석을 가능하게 하는 기술입니다.

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<ol><li>Hagios, C., Lochter, A., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+architecture%3A+The+ultimate+regulator+of+epithelial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Philosoph+Trans+Royal+Soc+B%3A+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Tissue architecture: The ultimate regulator of epithelial function.</a> Philosoph Trans Royal Soc B: Biol Sci. 353 (1370), (1998).</li>
<li>Mincarelli, L., Lister, A., Lipscombe, J., Macaulay, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+Cell+Identity+with+Single-Cell+Omics%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Defining Cell Identity with Single-Cell Omics.</a> Proteomics. 18 (18), (2018).</li>
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<li>Panchuk-Voloshina, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alexa+dyes%2C+a+series+of+new+fluorescent+dyes+that+yield+exceptionally+bright%2C+photostable+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Alexa dyes, a series of new fluorescent dyes that yield exceptionally bright, photostable conjugates.</a> J Histochem Cytochem. 47 (9), (1999).</li>
<li>Bystrom, J., Amin, K., Bishop-Bailey, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysing+the+eosinophil+cationic+protein+-+a+clue+to+the+function+of+the+eosinophil+granulocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Res%22%5BJournal%5D)">Analysing the eosinophil cationic protein - a clue to the function of the eosinophil granulocyte.</a> Respiratory Res. , 12(2011).</li>
<li>Rahman, A. H., Tordesillas, L., Berin, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heparin+reduces+nonspecific+eosinophil+staining+artifacts+in+mass+cytometry+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Cyt+Part+A%22%5BJournal%5D)">Heparin reduces nonspecific eosinophil staining artifacts in mass cytometry experiments.</a> Cyt Part A. 89 (6), (2016).</li>
<li>Saitou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+intrinsic+fluorescence+spectra-based+digital+pathology+of+liver+fibrosis+by+marker-controlled+segmentation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Med%22%5BJournal%5D)">Tissue intrinsic fluorescence spectra-based digital pathology of liver fibrosis by marker-controlled segmentation.</a> Front Med. 5 (DEC), (2018).</li>
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<li>Chang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Mass+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cyt+Part+A%22%5BJournal%5D)">Imaging Mass Cytometry.</a> Cyt Part A. 91 (2), (2017).</li>
<li>Angelo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+ion+beam+imaging+of+human+breast+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Multiplexed ion beam imaging of human breast tumors.</a> Nat Med. 20 (4), (2014).</li>
<li>Baharlou, H., Canete, N. P., Cunningham, A. L., Harman, A. N., Patrick, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+Cytometry+Imaging+for+the+Study+of+Human+Diseases%E2%80%94Applications+and+Data+Analysis+Strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mass Cytometry Imaging for the Study of Human Diseases—Applications and Data Analysis Strategies.</a> Front Immunol. 10, (2019).</li>
<li>Goltsev, Y., Nolan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CODEX+multiplexed+tissue+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">CODEX multiplexed tissue imaging.</a> Nat Rev Immunol. 23 (10), 613-613 (2023).</li>
<li>Black, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CODEX+multiplexed+tissue+imaging+with+DNA-conjugated+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">CODEX multiplexed tissue imaging with DNA-conjugated antibodies.</a> Nat Protoc. 16 (8), (2021).</li>
<li>Vorobjev, I. A., Kussanova, A., Barteneva, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+Spectral+Imaging+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of Spectral Imaging Cytometry.</a> Methods Mol Biol. 2635, (2023).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>2N 황산(H2SO4) 용액</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>실험실에서 사용 가능하거나 사용하는 모든 것을 다</td></tr><tr><td>500 mL 비커</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>실험실에서 사용 가능하거나 사용하는 모든 것을 다</td></tr><tr><td>6웰 플레이트</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>실험실에서 사용 가능하거나 사용하는 모든 것을 다</td></tr><tr><td>Bcl-6 - 알렉사 플루어 647</td><td>BD 생명과학</td><td>561525</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>BD 세포고정/세포 고정/투과화 키트</td><td>BD 생명과학</td><td>554722</td><td></td></tr><tr><td>벤치탑 해부 현미경</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>실험실에서 사용 가능하거나 사용하는 모든 것을 다</td></tr><tr><td>소 혈청 알부민 (BSA)</td><td>시그마-올드리치</td><td>A4503</td><td></td></tr><tr><td>CD11c - 알렉사 플루어 700</td><td>BD 생명과학</td><td>561352</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>CD138/Syndecan-1 - PE</td><td>바이오레전드</td><td>356503</td><td>희석 계수 1:200</td></tr><tr><td>CD20 - 알렉사 플루어 488</td><td>인비트로젠</td><td>53020282</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>CD21 - 알렉사 플루어 532</td><td>노버스바이오</td><td>NBP2-60733AF532</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>CD23 - PE</td><td>바이오레전드</td><td>338507</td><td>희석 계수 1:200</td></tr><tr><td>CD3 - 아이플루오 594</td><td>AAT 바이오퀘스트</td><td>100320C0</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>CD31 - 알렉사 플루어 700</td><td>바이오레전드</td><td>303134</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>CD34 - 아이플루오 594</td><td>AAT 바이오퀘스트</td><td>103400C0</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>CD38 - 알렉사 플루어 700</td><td>바이오레전드</td><td>303523</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>CD4 - 알렉사 플루어 647</td><td>바이오레전드</td><td>300520</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>CD45 - 알렉사 플루어 532</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>58045942</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>CD54/ICAM-1 - 알렉사 플루어 647</td><td>바이오레전드</td><td>353113</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>크롬 알룸-젤라틴 접착제</td><td>신입 공급</td><td>1033A</td><td></td></tr><tr><td>크라이오몰드</td><td>피셔 사이언티픽 &nbsp;</td><td>NC9511236</td><td>또한, 더 큰 샘플을 위한 카탈로그 번호 50-465-347도 참고하세요</td></tr><tr><td>DAPI 보정 슬라이드</td><td>아가르 사이언티브</td><td>AG2273</td><td></td></tr><tr><td>DAPI 용액, 1 mg/mL</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>62248</td><td>희석 계수 1:3000</td></tr><tr><td>E-카데린/CD324 - 알렉사 플루어 647</td><td>바이오레전드</td><td>147307</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>EpCAM/CD326 - 알렉사 플루어 594</td><td>바이오레전드</td><td>324228</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>에펜도르프/매 튜브</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>실험실에서 사용 가능하거나 사용하는 모든 것을 다</td></tr><tr><td>플루오로몬트-G</td><td>서던바이오텍</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>겸자</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>실험실에서 사용 가능하거나 사용하는 모든 것을 다</td></tr><tr><td>폭스P3 - e플루오 660</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>50577382</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>서리 끝 현미경 슬라이드</td><td>켐사이언스</td><td>GEW45-2575-W</td><td></td></tr><tr><td>GL7 - 알렉사 플루어 488</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>53590282</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>헤파린 나트륨 염</td><td>시그마-올드리치</td><td>H3393</td><td>10KU</td></tr><tr><td>HLA-DR - PE</td><td>노버스바이오</td><td>NB100-77855PE</td><td>희석 계수 1:200</td></tr><tr><td>휴먼 트루스테인 FcX (Fc 수용체 차단 솔루션)</td><td>바이오레전드</td><td>422302</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>습도 챔버</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>실험실에서 사용 가능하거나 사용하는 모든 것을 다</td></tr><tr><td>뚜껑 달린 얼음통</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>실험실에서 사용 가능하거나 사용하는 모든 것을 다</td></tr><tr><td>IgD - 알렉사 플루어 488</td><td>바이오레전드</td><td>348215</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>IL4Ra/CD124 - PE</td><td>바이오레전드</td><td>144803</td><td>희석 계수 1:200</td></tr><tr><td>이마리스 파일 변환기</td><td>옥스퍼드 악기</td><td>해당 없음</td><td>이미지 파일 형식을 .ims 포맷(https://imaris.oxinst.com/microscopy-imaging-software-free-trial#file-converter)으로 커버하기</td></tr><tr><td>이소펜탄 (2-메틸부탄)</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>실험실에서 사용 가능하거나 사용하는 모든 것을 다</td></tr><tr><td>Ki-67 - 알렉사 플루어 488</td><td>BD 생명과학</td><td>558616</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>킴벌리-클라크 프로페셔널 킴텍 사이언스 킴와이프 섬세한 작업 와이퍼, 1층</td><td>킴텍 사이언스</td><td>06-666</td><td></td></tr><tr><td>크고(즉, 길이 25cm) 겸자</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>실험실에서 사용 가능하거나 사용하는 모든 것을 다</td></tr><tr><td>액체 질소</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>실험실에서 사용 가능하거나 사용하는 모든 것을 다</td></tr><tr><td>붕화리튬(LiBH4)</td><td>시그마-올드리치</td><td>222356</td><td></td></tr><tr><td>MECA-79 - 알렉사 플루어 488</td><td>인비트로젠</td><td>53603680</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>현미경 슬라이드 커버 유리 No.1 22x50 mm</td><td>피셔 사이언티픽 &nbsp;</td><td>12-542A</td><td></td></tr><tr><td>밀리-Q 물</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>실험실에서 사용 가능하거나 사용하는 모든 것을 다</td></tr><tr><td>MUC2 - 알렉사 플루어 488</td><td>노버스바이오</td><td>NB120-11197AF488</td><td>희석 계수 1:100</td></tr><tr><td>Nunc Lab-Tek 챔버드 커버글라스</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>155380</td><td></td></tr><tr><td>PAP 펜</td><td>ABCAM</td><td>AB2601</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS) 용액</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>실험실에서 사용 가능하거나 사용하는 모든 것을 다</td></tr><tr><td>메스</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>실험실에서 사용 가능하거나 사용하는 모든 것을 다</td></tr><tr><td>SimpleITK Imaris 확장</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>서로 다른 라운드의 이미지를 정렬하는 데 사용된 소프트웨어 (https://github.com/niaid/imaris_extensions)</td></tr><tr><td>자당</td><td>시그마-올드리치</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>티슈텍 O.C.T. 복합물</td><td>사쿠라 파인텍 USA</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>시그마-올드리치</td><td>X100</td><td></td></tr><tr><td>자이스 LSM 980</td><td>자이스 현미경</td><td>해당 없음</td><td>이 연구에 사용된 영상 시스템</td></tr><tr><td>젠 블루</td><td>자이스 현미경</td><td>해당 없음</td><td>포스트 획득 이미지 처리에 사용되는 소프트웨어</td></tr></tbody></table>

비특이적 조직 형광을 최소화하기 위해 스펙트럼 공초점 현미경을 사용한 하이플렉스 이미징

High-plex Imaging using Spectral Confocal Microscopy to Minimize Non-specific Tissue Fluorescence

Highly multiplexed imaging enables the study of functionally diverse cells and their niches within their native tissue environments. Iterative Bleaching ...

high-plex-imaging-using-spectral-confocal-microscopy-to-minimize-non

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

우리는 더 나은 접근 장물과 스펙트럼을 사용하여 수용체의 형광 단백질 태그를 포함한 접근 방법의 조합을 사용하여 니코틴 중독의 메커니즘을 이해하기 위해 CNS의 뉴런의 특정 subtypes의 subcellular 지역 내에서 nicotinic 아세틸콜린 수용체 변화를 quantifying의 소설 기법을 개발했습니다 공촛점 이미징.

만성 니코틴 관리와 마우스 노크 인의 Fluorescently 태그를 Nicotinic 수용체의 분광 공촛점 이미징

우리는 형광 광 활성화 국소화 현미경(FPALM)을 사용하여 세포 내에서 여러 유형의 형광 표지 분자를 동시에 이미지화하는 방법을 보여줍니다. 설명된 기술은 단일 세포 내에서 수십 나노미터의 정밀도로 수천 개에서 수십만 개의 개별 형광 표지 단백질의 국소화를 산출합니다.

Simultaneous Multicolor Imaging of Biological Structures with Fluorescence Photoactivation Localization Microscopy(형광 광활성화 국소화 현미경을 사용한 생물학적 구조의 동시 다색 이미징)

생체 내에서 세포 기관 및 기타 세포 내 구조의 동적 거동을 이미징하면 생리학적 및 질병 조건에서 그 기능을 밝힐 수 있습니다. 여기에서는 중심체와 미토콘드리아의 두 소기관을 유전적으로 태그하고 광시야 및 컨포칼 현미경을 사용하여 살아있는 제브라피시 배아에서 이들의 역학을 이미징하는 방법을 제시합니다.

살아있는 Zebrafish의 배아에서 세포 이하 구조를 이미징

아 밀 로이드 증 착 다른 질병의 특징은 고 고생 많은 다른 기관. 이 문서에서는 발광 활용된 oligothiophene 형광 형광 현미경 검사 법 기술 함께에서 얼룩의 응용 프로그램을 설명 합니다. 이 얼룩 메서드 검색 및 임상과 과학적인 설정에 단백질의 탐사를 위한 강력한 도구를 나타냅니다.

Confocal 현미경 검사 법 그리고 형광 일생 화상 진 찰 Hyperspectral에 의해 발광 활용된 Oligothiophenes로 물 녹말 체 조직 이미징

바인딩할 대상 수용 체 세포 표면에 항 체 구조와 클러스터링 변경 부여 수 있습니다. 이러한 동적 변경 내용이 대상 셀에 약물 개발 특성화에 대 한 영향을 미칠. 이 프로토콜 confocal 현미경 검사 법 및 이미지 상호 관계 분광학 ImageJ/피지 수용 체 세포 표면에 클러스터링의 척도를 통해 활용 합니다.

Confocal 현미경 검사 법 밝혀 세포 표면 수용 체 이미지 상관 분광학을 통해 집계

스펙트럼 이미징은 단일 샘플에서 여러 형광 신호를 식별하고 분리하는 신뢰할 수 있는 솔루션이 되었으며 관심 있는 신호를 배경 또는 자동 형광과 쉽게 구분할 수 있습니다. 여기 스캐닝 하이퍼스펙트럼 이미징은 필요한 이미지 수집 시간을 줄이면서 동시에 신호 대 잡음 비를 증가시킴으로써 이 기술을 향상시킵니다.

형광 신호를 효율적으로 구별하기 위한 여기-스캐닝 하이퍼스펙트럼 이미징 현미경 검사법

우리는 냉동 된 조직에 다중 스펙트럼 이미징을 수행하는 빠른 염색 방법을 설명합니다.

냉동 조직 섹션의 다스펙트럼 형광 이미징을위한 신속한 방법

여기서, 3차원 공간에 분포된 모든 개별 라이브 셀로부터 광적으로 추출 및 분류하는 프로토콜(즉, 세포 자동 형광)을 제시한다. 이 방법은 박테리아, 곰팡이, 효모, 식물 및 동물의 세포를 포함하여 단일 세포 해상도에서 다양한 생물학적 시스템의 타고난 형광 서명을 연구하는 데 적합합니다.

공초점 현미경 검사법에 의한 단세포 인천성형광서명의 재구성

여기에는 면역형광 현미경으로 5개 이상의 형광 파라미터를 이미지화하는 데 사용할 수 있는 방법이 설명되어 있습니다. 이러한 이미지에서 단일 세포를 추출하고 유세포 분석과 같은 게이팅 전략을 통해 단일 세포 분석을 수행하기 위한 분석 파이프라인이 간략하게 설명되어 있으며, 이를 통해 조직 절편의 세포 subset을 식별할 수 있습니다.

Histoflow Cytometry를 이용한 High-parameter Histology 이미지 생성 및 분석

이 프로토콜은 고해상도 셀룰러 및 아셀룰러 이미징을 위한 다중화 배열 검출기와 통합된 레이저 스캐닝 공초점 현미경 시스템의 첨단 영상 응용과 공유 자원 관리를 상세히 설명합니다. 이 워크플로우는 단일 플랫폼 내에서 공초점에서 초해상도(~120 nm)까지 다중 모달 이미징을 가능하게 하여 나노스케일 시각화를 더욱 쉽게 접근할 수 있게 합니다.

초해상도 영상 및 공유 관리: 다중화 검출이 포함된 공초점 현미경 프로토콜

학습하세요 IBEX 워크플로우 최적화 방법을 헤파린 차단과 스펙트럼 검출을 활용하여 호산구가 풍부한 인체 조직에서 비특이적 형광을 억제하고 고차원 공간 단백질체 분석을 가능하게 하는 기술입니다.

비특이적 조직 형광을 최소화하기 위해 스펙트럼 공초점 현미경을 사용한 하이플렉스 이미징

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