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<ol><li>Poss, K. D., Wilson, L. G., Keating, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%281979%29%22%5BJournal%5D)">Heart regeneration in zebrafish.</a> Science (1979). 298 (5601), 2188-2190 (2002).</li>
<li>Jopling, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+heart+regeneration+occurs+by+cardiomyocyte+dedifferentiation+and+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Zebrafish heart regeneration occurs by cardiomyocyte dedifferentiation and proliferation.</a> Nature. 464 (7288), 606-609 (2010).</li>
<li>Kikuchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+contribution+to+zebrafish+heart+regeneration+by+gata4%2B+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Primary contribution to zebrafish heart regeneration by gata4+ cardiomyocytes.</a> Nature. 464 (7288), 601-605 (2010).</li>
<li>Bertozzi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+zebrafish+heart+regeneration+%22complete%22%3F+Lineage-restricted+cardiomyocytes+proliferate+to+pre-injury+numbers+but+some+fail+to+differentiate+in+fibrotic+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Is zebrafish heart regeneration "complete"? Lineage-restricted cardiomyocytes proliferate to pre-injury numbers but some fail to differentiate in fibrotic hearts.</a> Dev Biol. 471, 106-118 (2021).</li>
<li>Nguyen, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+calcium+and+sarcomeres+directs+cardiomyocyte+maturation+during+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%281979%29%22%5BJournal%5D)">Interplay between calcium and sarcomeres directs cardiomyocyte maturation during regeneration.</a> Science (1979). 380 (6646), 758-764 (2023).</li>
<li>Fukuda, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimulation+of+glycolysis+promotes+cardiomyocyte+proliferation+after+injury+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">Stimulation of glycolysis promotes cardiomyocyte proliferation after injury in adult zebrafish.</a> EMBO Rep. 21 (8), e49752(2020).</li>
<li>Honkoop, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+uncovers+that+metabolic+reprogramming+by+ErbB2+signaling+is+essential+for+cardiomyocyte+proliferation+in+the+regenerating+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis uncovers that metabolic reprogramming by ErbB2 signaling is essential for cardiomyocyte proliferation in the regenerating heart.</a> Elife. 8, e50163(2019).</li>
<li>Lekkos, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+phosphorylation+is+required+for+cardiomyocyte+redifferentiation+and+long-term+fish+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Oxidative phosphorylation is required for cardiomyocyte redifferentiation and long-term fish heart regeneration.</a> Nat Cardiovasc Res. 4 (10), 1363-1380 (2025).</li>
<li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Langendorff-like+system+to+quantify+cardiac+pump+function+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">A Langendorff-like system to quantify cardiac pump function in adult zebrafish.</a> Dis Model Mech. 11 (9), dmm034819(2018).</li>
<li>Zhang, P. C., Llach, A., Sheng, X. Y., Hove-Madsen, L., Tibbits, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+handling+in+zebrafish+ventricular+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Calcium handling in zebrafish ventricular myocytes.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 300, 56-66 (2011).</li>
<li>Lin, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+and+use+of+a+zebrafish+heart+voltage+and+calcium+optical+mapping+system%2C+with+integrated+electrocardiogram+and+programmable+electrical+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Construction and use of a zebrafish heart voltage and calcium optical mapping system, with integrated electrocardiogram and programmable electrical stimulation.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 308, R755-R768 (2015).</li>
<li>Miklas, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+acid+primed+mTOR+activity+is+essential+for+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Amino acid primed mTOR activity is essential for heart regeneration.</a> iScience. 25 (1), 103574(2022).</li>
<li>García-Poyatos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cox7a1+controls+skeletal+muscle+physiology+and+heart+regeneration+through+complex+IV+dimerization%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Cox7a1 controls skeletal muscle physiology and heart regeneration through complex IV dimerization.</a> Dev Cell. 59 (14), 1824-1841.e10 (2024).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22How+Agilent+Seahorse+XF+Analyzers+Work%22">How Agilent Seahorse XF Analyzers Work</a>. , Agilent. https://www.agilent.com/en/products/cell-analysis/how-seahorse
-xf-analyzers-work?srsltid=AfmBOopkIZodH4uZO
5puXTOp1U5gdkky661L6TKluz5XgBWGqujHEzww (2026).</li>
<li>Yoo, I., Ahn, I., Lee, J., Lee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+flux+assay+%28Seahorse+assay%29%3A+Diverse+applications+in+metabolic+research+across+biological+disciplines%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cells%22%5BJournal%5D)">Extracellular flux assay (Seahorse assay): Diverse applications in metabolic research across biological disciplines.</a> Mol Cells. 47 (8), 100095(2024).</li>
<li>Chablais, F., Jaźwińska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+myocardial+infarction+in+adult+zebrafish+using+cryoinjury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Induction of myocardial infarction in adult zebrafish using cryoinjury.</a> J Vis Exp. (62), e3666(2012).</li>
<li>González-Rosa, J. M., Mercader, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryoinjury+as+a+myocardial+infarction+model+for+the+study+of+cardiac+regeneration+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Cryoinjury as a myocardial infarction model for the study of cardiac regeneration in the zebrafish.</a> Nat Protoc. 7 (4), 782-788 (2012).</li>
<li>Schnabel, K., Wu, C. C., Kurth, T., Weidinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+cryoinjury+induced+necrotic+heart+lesions+in+zebrafish+is+associated+with+epicardial+activation+and+cardiomyocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Regeneration of cryoinjury induced necrotic heart lesions in zebrafish is associated with epicardial activation and cardiomyocyte proliferation.</a> PLoS One. 6 (4), e18503(2011).</li>
<li>Aleström, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+Housing+and+husbandry+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: Housing and husbandry recommendations.</a> Lab Anim. 54 (3), 213-224 (2019).</li>
<li>Singleman, C., Holtzman, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+dissection+in+larval%2C+juvenile+and+adult+zebrafish%2C+Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, Danio rerio.</a> J Vis Exp. (55), e3165(2011).</li>
<li>Duan, X., Liu, X., Zhan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+regulation+of+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Metabolic regulation of cardiac regeneration.</a> Front Cardiovasc Med. 9, 933060(2022).</li>
<li>Yu, F., Cong, S., Yap, E. P., Hausenloy, D. J., Ramachandra, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unravelling+the+interplay+between+cardiac+metabolism+and+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Unravelling the interplay between cardiac metabolism and heart regeneration.</a> Int J Mol Sci. 24 (12), 10300(2023).</li>
<li>Cook, M., Lal, S., Hume, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional%2C+proteomic+and+metabolic+drivers+of+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Heart%22%5BJournal%5D)">Transcriptional, proteomic and metabolic drivers of cardiac regeneration.</a> Heart. 111 (18), 851-858 (2025).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+reprogramming%3A+A+byproduct+or+a+driver+of+cardiomyocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Metabolic reprogramming: A byproduct or a driver of cardiomyocyte proliferation.</a> Circulation. 149 (20), 1598-1610 (2024).</li>
<li>Bond, S. T., McEwen, K. A., Yoganantharajah, P., Gibert, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+metabolic+profile+analysis+of+zebrafish+embryos+using+a+seahorse+XF+24+extracellular+flux+analyzer%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Live metabolic profile analysis of zebrafish embryos using a seahorse XF 24 extracellular flux analyzer.</a> Methods Mol Biol. 1797, 393-401 (2018).</li>
<li>Gibert, Y., McGee, S. L., Ward, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+profile+analysis+of+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Metabolic profile analysis of zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. (71), e4300(2013).</li>
<li>Trampel, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seahorse+metabolic+analysis+for+human+and+mouse+cardiac+organotypic+slices%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Seahorse metabolic analysis for human and mouse cardiac organotypic slices.</a> bioRxiv. , (2025).</li>
<li>Ruggiero, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+balanced+circadian+glycolytic+rhythm+drives+cardiomyocyte+cell+cycle+progression+during+fish+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">A balanced circadian glycolytic rhythm drives cardiomyocyte cell cycle progression during fish heart regeneration.</a> bioRxiv. , (2025).</li>
<li>Lee, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+assessment+of+cardiac+responses+of+adult+zebrafish+%28Danio+rerio%29+to+acute+and+chronic+temperature+change+using+high-resolution+echocardiography%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Functional assessment of cardiac responses of adult zebrafish (Danio rerio) to acute and chronic temperature change using high-resolution echocardiography.</a> PLoS One. 11 (1), e0145163(2016).</li>
<li>Shaftoe, J. B., Geddes-McAlister, J., Gillis, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+cellular+response+of+the+zebrafish+%28Danio+rerio%29+heart+to+temperature+change%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Integrated cellular response of the zebrafish (Danio rerio) heart to temperature change.</a> J Exp Biol. 227 (20), jeb247522(2024).</li>
<li>Ryan, R., Moyse, B. R., Richardson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+cardiac+regeneration%E2%80%94looking+beyond+cardiomyocytes+to+a+complex+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish cardiac regeneration—looking beyond cardiomyocytes to a complex microenvironment.</a> Histochem Cell Biol. 154 (5), 533-548 (2020).</li>
<li>Angelini, A., Pi, X., Xie, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+long-chain+fatty+acid+respiration+in+neonatal+mouse+cardiomyocytes+using+SeaHorse+instrument%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Evaluation of long-chain fatty acid respiration in neonatal mouse cardiomyocytes using SeaHorse instrument.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101392(2022).</li>
<li>Ludikhuize, M. C., Meerlo, M., Burgering, B. M. T., Rodríguez Colman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+to+profile+the+bioenergetics+of+organoids+using+Seahorse%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol to profile the bioenergetics of organoids using Seahorse.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100386(2021).</li>
<li>Neary, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+signaling+controls+postnatal+changes+in+cardiac+mitochondrial+morphology+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Hypoxia signaling controls postnatal changes in cardiac mitochondrial morphology and function.</a> J Mol Cell Cardiol. 74 (100), 340-352 (2014).</li>
<li>Cheng, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+changes+associated+with+cardiomyocyte+dedifferentiation+enable+adult+mammalian+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Metabolic changes associated with cardiomyocyte dedifferentiation enable adult mammalian cardiac regeneration.</a> Circulation. 146 (25), 1950-1967 (2022).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+fatty+acid+oxidation+enables+heart+regeneration+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Inhibition of fatty acid oxidation enables heart regeneration in adult mice.</a> Nature. 622 (7983), 619-626 (2023).</li>
<li>Mookerjee, S. A., Goncalves, R. L. S., Gerencser, A. A., Nicholls, D. G., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contributions+of+respiration+and+glycolysis+to+extracellular+acid+production%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">The contributions of respiration and glycolysis to extracellular acid production.</a> Biochim Biophys Acta. 1847 (2), 171-181 (2015).</li>
<li>Mookerjee, S. A., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+and+analysis+of+extracellular+acid+production+to+determine+glycolytic+rate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Measurement and analysis of extracellular acid production to determine glycolytic rate.</a> J Vis Exp. (106), e53464(2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1.5ml 에펜도르프 튜브와 nbsp;</td><td>스타랩</td><td>S1615-5550</td><td></td></tr><tr><td>96웰 플레이트 &nbsp;</td><td>서모피셔</td><td>AB-0800</td><td></td></tr><tr><td>안티마이신 A</td><td>ChemCruz&nbsp;</td><td>SC-202467A</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 매체</td><td>애질런트</td><td>1035755-100</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>시그마-올드리치 &nbsp;</td><td>D2650-100mL</td><td></td></tr><tr><td>드라이아이스&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>수펠코</td><td>1.00983.2500</td><td></td></tr><tr><td>세포외 플럭스 분석 키트 &nbsp;</td><td>애질런트</td><td>103518-100</td><td>팩에는 유틸리티 플레이트, 하이드로 부스터, 센서 카트리지, 뚜껑(아슬렛 플레이트와 함께 제공됨)이 들어 있습니다.</td></tr><tr><td>FCCP</td><td>시그마-올드리치 &nbsp;</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>포도당</td><td>애질런트</td><td>103577-100</td><td></td></tr><tr><td>글루타민</td><td>애질런트</td><td>103579-100</td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>섬 캡처 마이크로플레이트</td><td>애질런트</td><td>101122-100</td><td>팩에는 25개의 그리드가 포함되어 있습니다</td></tr><tr><td>Islet 캡처 스크린 인스터 도구</td><td>애질런트</td><td>101135-100</td><td></td></tr><tr><td>미세박리 겸자</td><td>아이디아텍</td><td>3131760</td><td>5-S 크기 (심실과 동맥 및 심방을 분리하기 위해 2배 필요)</td></tr><tr><td>미세해리 가위</td><td>FST</td><td>15009-08</td><td></td></tr><tr><td>MS-222</td><td>시그마-올드리치 &nbsp;</td><td>E10521</td><td></td></tr><tr><td>올리고마이신</td><td>MP&nbsp;</td><td>151786</td><td></td></tr><tr><td>공자, 모토르 호모제니저&nbsp;</td><td>VWR</td><td>431-0100</td><td></td></tr><tr><td>공약</td><td>VWR</td><td>431-0094</td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시 35mm</td><td>그레이너 바이오-원</td><td>627102</td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시 92mm</td><td>스타스테트</td><td>82.1473</td><td></td></tr><tr><td>피어스 BCA 분석 키트</td><td>써모 사이언티픽</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>피어스 프로테아제 및 인산효소 억제제 미니 정제, EDTA 프리</td><td>써모 사이언티픽</td><td>A32961</td><td></td></tr><tr><td>피루베이트</td><td>애질런트</td><td>103578-100</td><td></td></tr><tr><td>RIPA 용해 완충제</td><td>산타크루</td><td>SC-364162</td><td></td></tr><tr><td>로테논</td><td>MP&nbsp;</td><td>02150154-CF</td><td></td></tr><tr><td>시호스 애널리틱스 인터페이즈</td><td>애질런트</td><td>https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-software/agilent-seahorse-analytics-787485</td><td></td></tr><tr><td>시호스 XFe24 분석기</td><td>애질런트</td><td>https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-analyzers/seahorse-xfe24-analyzer-740878</td><td></td></tr><tr><td>실러</td><td>써모 사이언티픽</td><td>AB-0558</td><td></td></tr><tr><td>스펙트로스타 나노</td><td>MG LABTECH GmbH</td><td>601-0298</td><td></td></tr><tr><td>스펀지</td><td></td><td></td><td>물어가 배 쪽이 위로 들어갈 수 있을 만큼 길고 깊게 절개를 하세요</td></tr><tr><td>웨이브 (버전 2.6.1.56)</td><td>애질런트</td><td>https://www.agilent.com/en/products/cell-analysis/software-download-for-wave-desktop</td><td></td></tr><tr><td>XF 구경 &nbsp;</td><td>애질런트</td><td>100840-000</td><td></td></tr></tbody></table>

세포외 플럭스 분석법을 이용한 전체 재생 제브라피시 뇌실의 체외 대사 활동 평가

Assessing the Metabolic Activity of Whole Regenerating Zebrafish Ventricles Ex Vivo Using an Extracellular Flux Assay

The ability of zebrafish to regenerate their hearts throughout adulthood is partially attributed to metabolic adaptations. Although it has been ...

seahorse 분석법을 통해 ex vivo 상태의 온전한 제브라피시 심실에서 대사 작용을 고처리량으로 평가할 수 있습니다. 이 방법은 대사 유전자의 유전적 섭동을 검증하고 재생 과정 중의 대사 변화를 특성화하는 데 사용될 수 있습니다. 실험을 시작하기 전에 시스템 전원을 켜고 모든 약물 용액과 배지를 준비하십시오.WAVE 소프트웨어의 Group Definitions 페이지에서 Injection Strategies 탭으로 이동하여, 화합물 카탈로그(compound catalog)로부터 oligomycin을 Port A에, carbonyl cyanide 4-trifluoromethoxy phenylhydrazone 또는 FCCP를 Port B에, 그리고 rotenone 및 antimycin 혼합물을 Port C에 할당하십시오. 실험 전략이 정의되면 기존에 설정된 모든 주입 전략을 삭제하십시오. 그런 다음 Groups 패널에서 실험군을 정의하고 그에 해당하는 주입 전략을 할당하십시오.Plate Map 페이지에서 각 그룹과 그에 해당하는 웰을 클릭하여 24웰 플레이트 상의 샘플 위치를 선택하고, 4개의 웰은 공백으로 둡니다. Protocol 페이지에서 불필요한 대조군 또는 실험 탭을 제거하고, 소프트웨어 포트 할당을 카트리지의 약물 위치와 일치시킵니다. 베이스라인에 10사이클, 올리고마이신(oligomycin)에 3사이클, FCCP에 7사이클, 그리고 로테논(rotenone)과 안티마이신-A(antimycin-A) 혼합액에 9사이클을 설정합니다.각 사이클이 3분간의 혼합, 2분간의 대기, 그리고 3분간의 측정으로 구성되도록 하십시오. 전날 준비한 가습 배양기에서 카트리지와 유틸리티 플레이트를 꺼냅니다. 다음으로, 카트리지에서 하이드로부스터와 뚜껑을 제거하고, 보정액이 담긴 유틸리티 플레이트 위에 센서 카트리지를 배치하십시오.억제제를 측벽을 따라 각각의 포트에 부드럽게 피펫팅하고, 탭핑을 피하십시오. 소프트웨어에서 Run Assay를 선택합니다. 런(run)의 이름을 지정하고 Start Run을 클릭합니다.파일명과 함께 실행 내용을 저장하고 분석법을 불러옵니다. 분석기의 트레이가 열리면, 플레이트 맵에 따라 약물이 적재된 카트리지와 교정 물질이 포함된 유틸리티 플레이트를 트레이에 배치합니다. Run Assay를 눌러 분석을 시작합니다.분리된 심장이 담긴 eyelet capture 마이크로플레이트를 그리드로 덮은 후, 소프트웨어의 녹색 체크 표시를 통해 모든 웰이 성공적으로 보정되었는지 확인하십시오. 그런 다음 Open Tray를 클릭하여 유틸리티 플레이트를 배출하십시오. 덮개 없이 eyelet 마이크로플레이트의 A1 위치가 왼쪽 상단 모서리에 오도록 분석기에 배치하고, Load Cell Plate를 클릭하여 실험을 시작하십시오.실험이 완료되면 Eject를 클릭하여 아일렛 마이크로플레이트와 카트리지를 배출합니다. 분석기에서 배출된 아일렛 플레이트와 카트리지를 꺼내고 뚜껑을 닫아 카트리지를 밀봉합니다. 아일렛 플레이트는 드라이아이스에 보관하십시오.그런 다음 Done을 클릭하여 트레이를 닫습니다. 마지막으로 View Results를 클릭하여 데이터를 시각화합니다. 분석기 컴퓨터에서 측정값을 저장하고 내보냅니다.분석 인터페이스에 데이터를 업로드하고 Standard Views에서 산소 소비율 또는 OCR 그래프를 선택하십시오. OCR 및 세포 외 산성화율 또는 ECAR 수치를 확인하고, 빈 웰을 사용하여 배경 값을 보정하십시오. 플레이트 맵에서 Wells를 선택하여 데이터를 표시하거나 숨길 수 있습니다.단백질 수준을 정량화한 후, 샘플 간의 신뢰성 있는 비교를 위해 OCR 및 ECAR 측정값을 정규화하십시오. 약물 처리를 하지 않은 야생형 비손상 심실은 안정적인 산소 소비율과 세포외 산성화율을 나타냈으며, 이는 ex vivo 환경에서 심실의 정상적인 호흡 기능과 생존력을 보여줍니다. 10 µM oligomycin, 8 µM FCCP, 그리고 25 µM rotenone 및 antimycin 처리 시 산소 소비율의 가벼운 증가가 관찰되었습니다.50 µM oligomycin, 30 µM FCCP, 그리고 45 µM rotenone 및 antimycin 처리 시 약간 더 큰 증가가 관찰되었습니다. 투과화 후에는 산소 소비율이 지속적으로 감소하였으며 FCCP 주입 후에도 증가하지 않았는데, 이는 투과화된 심실의 대사 부전을 나타냅니다. oligomycin 처리는 산소 소비율을 유의미하게 변화시키지 않았습니다.FCCP은 산소 소비율과 세포외 산성화율을 증가시켰으며, cytosolic malate dehydrogenase 1 AB를 과발현시킨 심실이 대조군 심실에 비해 가장 높은 최대 호흡 능력을 나타냈습니다. 본 프로토콜을 사용하여 제브라피쉬 심장의 산소 소비 및 세포외 산성화율을 ex vivo로 측정할 수 있습니다. ECAR 데이터는 당분해 유래 젖산뿐만 아니라 호흡으로 인한 이산화탄소까지 반영하며, 이 두 가지 모두 세포외 산성화에 영향을 줍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

신진 대사 연구 용 활용을 받아왔다 강력한 척추 모델을 대표 Zebrafish. 여기를 측정 할 수있는 빠른 방법을...

Zebrafish 태아의 대사 프로필 분석

심혈관 연구를 위한 제브라피쉬의 사용은 성인 심장에 대한 연구로 확장되고 있습니다. 이러한 응용 분야의 경우, 심장 조직을 빠르고 간단하게 분리하는 것이 사후 변화를 피하고 적절한 수의 샘플을 얻는 데 중요합니다. 여기에서는 성체 제브라피시 심장을 빠르고 재현 가능한 방법으로 해부할 수 있습니다.

높은 처리량 응용 프로그램에 대한 성인 Zebrafish의 마음의 복구

제브라피쉬는 에너지 항상성 연구를 위한 중요한 모델 유기체입니다.  NADH2 민감성 산화 환원 지표인 alamar Blue를 활용하여 제브라피시 유충의 대사 속도를 96웰 플레이트 형식으로 측정하고 약물 또는 유전자 발견에 적용할 수 있는 분석을 개발했습니다.

높은 처리량<em&gt; 다니오 레 리오 (rerio)</em&gt; 에너지 지출 분석

여기, 선물이 시각화 4 차원 (4d)에서 zebrafish에 마음을 개발 하는 프로토콜. 빛-시트 형광 현미경 검사 법 (LSFM)를 통해 4 차원 영상, 3 차원 (3 차원) 이미지 개발 마음을 재구성 하는 시간 걸립니다. 우리 그 전단 응력 활성화 endocardial 노치 신호 챔버 개발, 심장 trabeculation를 승진 시키는 동안 질적 및 양적 보여줍니다.

개발 Zebrafish 마음에 전단 응력을 조절의 효과의 4 차원 이미지를 캡처 빛 시트 형광 현미경 검사 법

이 기술은 산소 소비와 세포 외 산성화 속도 explanted 마우스 망막 조직 세포 외 유출 분석기를 사용 하 여 실시간으로 녹음을 설명 합니다.

Explanted 망막 조직 세포 외 유출 분석을 사용 하 여 신진 대사 에너지의 측정

우리는 고주파 심초음파를 사용하여 성인 제브라피시의 심장 형태와 기능을 평가하는 프로토콜을 설명합니다. 이 방법은 심장의 시각화를 허용하고 심장 박동 (HR), 심장 출력 (CO), 분수 영역 변화 (FAC), 배출 분획 (EF), 및 혈액 유입 및 유출 속도와 같은 기능적 매개 변수의 후속 정량화를 허용합니다.

제브라피시 심장 기능을 평가하는 고주파 초음파 심초음파

이 프로토콜은 광시트 이미징을 활용하여 제브라피시 유충의 심장 수축 기능을 조사하고 세포 추적 및 대화형 분석을 통해 심장 역학에 대한 통찰력을 얻습니다.

제브라피시 심장 수축의 4D 광시트 이미징

이 프로토콜은 제브라피쉬 배아의 심장 형태 및 기능을 평가하기 위한 저비용 광학 현미경 방법을 설명하여 고급 이미징 시스템 없이도 발달 심장 독성을 재현 가능하게 평가할 수 있습니다.

표준 현미경 및 비디오 분석을 사용한 제브라피쉬 배아의 기능적 심장 영상: 환경 및 생물 의학 연구에서의 응용

제시된 방법은 최소한의 마우스 골격근에서 분리된 미토콘드리아를 사용하여 마이크로플레이트 기반 호흡 측정 분석 모음의 수행을 위한 단계별 지침을 제공합니다. 이러한 분석은 일반적으로 사용되는 동물 모델에서 미토콘드리아 산소 소비량의 기계론적 변화/적응을 측정할 수 있습니다.

높은 처리량 마이크로 호흡 측정을위한 마우스 골격근의 최소 수량에서 미토콘드리아 격리 사용

생체 외 직립 액적 배양은 현재의 시험관 내 및 생체 내 실험 기술의 대안입니다. 이 프로토콜은 수행하기 쉽고 더 적은 양의 시약이 필요하며 태아 혈관화, 형태 형성 및 기관 형성을 조작하고 연구할 수 있는 기능을 허용합니다.

사용<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 전체 태아 기관의 강직 한 방울 문화 마우스 기관 형성 기간 동안 발달 프로세스를 연구

University of Oxford.  이 글에서는 성체 제 브라피시 뇌실의 산소 소비율과 세포외 산성화 속도를 정량화하여 산화 및 당분해 대사 능력을 특성화하는 상세한 프로토콜을 설명합니다.

세포외 플럭스 분석법을 이용한 전체 재생 제브라피시 뇌실의 체외 대사 활동 평가

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