Name: 식물 표피의 생합성을 탐구 Arabidopsis eceriferum 돌연변이의 이용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-31T22:16:00.000+00:00
Duration: 11 min 2 s
Description: 탐색하세요 Arabidopsis eceriferum 돌연변이를 이용한 식물 표피 생합성 분석 방법을 통해 유전학적 접근으로 표피 형성 유전자를 규명하고 농업 및 임업에 활용할 수 있는 연구 가치를 확인하세요.

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I. 비주얼 화면 및 역방향 유전자 접근 표피 돌연변이를 확인합니다. 모델 식물 Arabidopsis thaliana의에서 표피의 돌연변이가 &quot;베어링하지 왁스&quot;를 의미하는 &quot;eceriferum&quot;돌연변이,라고합니다. 그들은 영상 화면에서 수, 즉, 그냥 돌연변이보고에 의해, 당신은 돌연변이가 녹색으로 어두운 반짝 스템을하면서 야생 타입 식물의 꽃이 핌 줄기가 약간 흰 것을 볼 수 있습니다. 영상 화면이 유형의 격리되었다 돌연변이 중 하나는이, eceriferum4 또는 cer4이라고합니다. 재미있는 표피의 돌연변이를 발견의 또 다른 방법은 역방향 유전학 접근이다 : 관심의 선택 후보 유전자 그리고 그 유전자를 공부하고 공장 라인 중단. 이러한 돌연변이 TDNA 우리가 지금 MAH1 전화 것이,이 경우, 시토크롬 P450 관심의 유전자를 방해했습니다. PCR 결과 (동영상에 표시된 것과 같은) TDNA 삽입 관심의 유전자에있는 것을 확인할 수 있습니다. 이 유전자 특정 primers는 야생 형 유전자를 증폭하기 위해 사용하는 경우, 우리는 제품을 볼 수 있지만, TDNA가 인터럽트를하는 경우,이 돌연변이에서와 같이, 거기에는 제품이 없습니다. 반대로, TDNA 및 유전자 특정 primers를 사용하여 제품은 돌연변이에서 볼 수 있습니다. 우리는 유전자의 모자 아버지 사본을 모두 방해 아르 homozygous 돌연변이 라인을 찾습니다. 유전자의 한 복사본은 TDNA에 의해 방해와 다른 사본이 아직 와일드 타입이다면, PCR 결과는 혼합 수 있습니다. II. Cutlicle 왁스의 화학 성분을 확인하는 가스 크로마 토그래피를 사용하여. 우리는 가스 크로마 토그래피를 사용하여 왁스의 화학 성분을 분석. 첫째, 수용성 왁스 화합물은 클로로포름에 디핑하여 식물 표면에서 제거됩니다. 그들이 가열 가스의 흐름을 통해 발송됩니다 어디 그런 다음 샘플은 가스 크로마 토그래피 칼럼에 주입하고 있습니다. 다른 화합물은 화합물을 분리, 컬럼의 벽에 더 많은 이하 스틱, 그리고 그들이 칼럼의 다른 끝에있는 다른 후 하나를 나와. 화합물은 불꽃 이온화 검출기를 통해 통과로 그 다음, 우리는 봉우리를 참조하십시오. 각 피크의 유지 시간이 서로 다른 화합물에 대한 특성이며, 질량 분광법에서, 우리는 Arabidopsis 왁스의 각각의 구성 요소를 확인합니다. 주요 봉우리 현재 C29 alkane, C29 케톤과 C29 차 알코올의 수 있습니다. 작은 봉우리는 이차 알콜, 지방산, aldehydes 및 에스테르입니다. 표준에 상대적인 봉우리 아래에있는 지역은, 얼마나 많은 화합물이 존재하는 우리에게 알려줍니다. 이러한 표피의 돌연변이에서 가스 chromatograms에서 볼 때, 하나는 mah1 보조 알콜과 ketones이 부족하면서 cer4은 기본 알콜과 에스테르를 결여하는 방법 통보하실 수 있습니다. 이러한 phenotypes 우리 공장에 대한 관심의 유전자의 기능에 대해 많은 걸 알 수 있습니다. 예를 들어, 우리가 cer4 라인 변이되었던 유전자 알고 전에 표현형은 biosynthetic 경로의 기본 알코올 지점에서 문제가 중이랍니다. 그 유전자의 분자 ID가 Kunst 연구실에서 공부 후, 그것은 그것이 화학 표현형 잘 맞는 지방산 아실 reductases의 유전자 가족의 일부임을 발견했다. III. 표피 결정의 구조를 확인하는 Cryo - SEM을 사용하여 그들은 어두운 녹색, 광택 표현형 또는 줄기에있는 야생 - 타입 약간 흰 모양이있다면 우리가 Arabidopsis 표피의 돌연변이를 연구하면, 우리는 볼 수 있습니다. 우리는 식물의 표면에 표피보고 시각 표현형의 근거를 확인하기 위해 스캔 전자 현미경을 사용합니다. 우리는 SEM이 작동 진공을 필요로하고 그들을 냉동 보관하지 않고, 샘플가 건조하고 붕괴 것이 때문에 표피가 그대로 유지하기 위해 식물을 냉동 및 액체 질소 온도에서 그들을보고, cryo - SEM을 사용합니다. 여기 cer4 및 mah1 샘플은 야생 형 컨트롤과 함께 해부하고 SEM의 스텁에 냉동. 샘플은 현미경의 추위 단계로 전학하는 경우, 당신은 야생 형 Arabidopsis의 줄기 표피의 표면이 결정으로 덮여있다는 것을 알 수 있습니다. 그것은 줄기에게 그 약간 흰 모양을 제공합니다 그 결정을 분산하는 빛이다. 여기 cer4 줄기는, 그것이 광택 보였 기억나요? 그것은 표면에 크리스탈이 부족. 그들은 식물의 표피에서 순수한 왁스 화합물을 분리하고 그들은 실험실에서 recrystallize 때 수정이 식물에서 찾은 것과 같은 모양을 형성 어디에 사람들이 실험을 완료했습니다. Arabidopsis에서, 우리는 결정이 화합물의 혼합물로 구성되어 있으며 상황이 더 복잡합니다 있다고 믿습니다. 예를 들어, 화학 분석 cer4에 기본 알콜 및 파생 에스테르만을 작은 구성 요소가 누락되는 우리를 보여주는 아직 CE에서 결정R4 줄기 가고 있습니다. mah1의 경우에는, 그 시토크롬 P450 효소에 돌연변이의 효과는 돌연변이 식물 왁스, 보조 알콜 및 ketones의 두 가지 주요 구성 요소를 부족, 아직 mah1 식물에있는 크리스탈가 정상적으로 형성한다는 것입니다. Arabidopsis 표피의 돌연변이에 대한 자세한 내용하려면로 이동하십시오 <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.103006.093219" target="_blank">식물 생물학의 연례 검토</a> .

식물 표피의 생합성을 탐구 arabidopsis eceriferum 돌연변이의 이용

Use of Arabidopsis eceriferum Mutants to Explore Plant Cuticle Biosynthesis

식물 표피 물 절약의 기본 역할을 식물에 밀랍 외부 실정입니다뿐만 아니라, 병원성 미생물의 항목에 대한 중요한 장벽입니다. 표피는 &quot;cutin&quot;라는 힘든 가교 폴리머 및 보호 왁스 층 바다표범 식물 표면 구성되어 있습니다. 표피의 밀랍 층 아이비 잎에 빛나는 영화 또는 포도 또는 왁스에있는 산란 결정을 밝힐 수 양배추 리프 감사의 표면에 먼지가 외부 덮개으로 나타나는 많은 식물에 분명합니다. 표피가 이해, 지상파 환경에 식물의 필수 적응하기 때문에 식물 표피 형성에 관련된 유전자는 농업과 임업 모두에서 응용 프로그램을하고 있습니다. 오늘, 우리는 순방향 및 역방향 유전학 방법으로 식별 식물 표피의 돌연변이의 분석을 보여 드리죠.

식물 표피 물 절약의 기본 역할을뿐만 아니라, 병원성 미생물의 항목에 대한 중요한 장애가 식물에 밀랍 외부 덮개입니다. 이 비디오에서는, 우리는 순방향 및 역방향 유전학 방법으로 식별 식물 표피의 돌연변이의 분석을 보여줍니다.

식물 표피의 생합성을 탐구 Arabidopsis eceriferum 돌연변이의 이용

식물 큐티클은 식물의 겉면을 덮고 있는 왁스질 층으로, 수분 보존에 주된 역할을 하지만 ...의 침입을 막는 중요한 장벽이기도 합니다.

식물 큐티클은 식물 표면을 덮고 있는 왁스질의 외피로, 수분 보존에 주요한 역할을 할 뿐만 아니라 병원성 미생물의 침입을 막는 중요한 장벽이 됩니다. 큐티클은 큐틴이라고 불리는 단단한 가교 중합체와 식물 표면을 밀폐하는 보호 왁스층으로 구성되어 있습니다. 큐티클의 왁스층은 많은 식물에서 뚜렷하게 나타나는데, 아이비 잎 위의 빛나는 막이나 포도 또는 양배추 잎 표면의 먼지 같은 외피 형태로 관찰됩니다.큐티클은 식물이 육상 환경에 적응하는 데 필수적인 요소이며, 왁스에 존재하는 빛 산란 결정 덕분에 그 기능을 수행합니다. 식물의 큐티클 형성에 관여하는 유전자를 이해하는 것은 농업과 임업 분야 모두에서 응용 가치가 있습니다. 오늘 우리는 순방향 및 역방향 유전학적 접근법으로 확인된 식물 큐티클 MUS의 분석 방법을 살펴보겠습니다.안녕하세요, 저는 UVC Bot 학과의 Lyrica Kunz 연구실 소속 Patricia Lam입니다. 오늘은 저와 동료들이 식물이 특정 왁스를 어떻게 만들어내는지 이해하기 위해 이 식물들을 어떻게 연구할 수 있는지 보여드리겠습니다. 저는 UVC Brain Heart Jet 연구실의 Meen이며, 가스 크로마토그래피를 사용하여 큐티클 왁스의 화학적 조성을 분석하는 방법을 보여드리겠습니다.저는 UBC의 Lacey Samuels 연구실 소속 Alan Dub Bono이며, 저온 주사 전자 현미경(cryo scanning electron microscopy)을 사용하여 잎 표면의 결정 구조를 분석하는 방법을 보여드리겠습니다. 저희의 전반적인 목표는 식물이 어떻게 16 또는 18개 탄소의 일반적인 지방산을 26에서 34개 탄소의 매우 긴 사슬로 확장하고, 이를 다시 식물 표면에서 발견되는 보호 지질로 변형시키는지 이해하는 것입니다.이제 시작하겠습니다. 정방향 및 역방향 유전학적 접근 방식을 사용하여 특정 왁스 유전자를 식별하는 방법을 보여드리겠습니다. 다시 뵙겠습니다. 여기 왁스가 없는 것을 의미하는 sro라고 부르는 Arabidopsis의 Cut 돌연변이체가 있습니다.이러한 돌연변이체들을 OCI 분리하기 위해 시각적 스크리닝이 사용되었으며, 이는 육안으로 확인되었음을 의미합니다. 돌연변이체를 관찰하면 야생형 식물의 유입부와 줄기는 흰색을 띠는 반면, 돌연변이체는 짙은 녹색의 광택이 나는 줄기를 가지고 있음을 알 수 있습니다. Martin K와 동료들이 수행한 이러한 시각적 스크리닝을 통해 분리된 돌

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

공중 식물 장기는 표피, supramolecular biopolyester - 왁스 어셈블리의 보호를받습니다. 우리는 고체 NMR 및 원자 힘 현미경에 의한 분자와 마이크로 저울에 토마토 과일 손톱에서의 선택적 제거 에피와 intracuticular 왁스, 각각을 모니터링하고, 공학 cuticular biopolyesters의 가교 능력을 평가하기 위해 프로토콜을 소개합니다.

분리 및 과일 손톱의 Biophysical 연구

우리는 stomatal 차별화를 문서화, 개발 며칠 동안 표피의 공 촛점 이미징을위한 식물 cotyledons를 고정하기 위해 챔버 슬라이드 및 미디어를 사용하여 프로토콜을 설명합니다. 형광 태그 단백질은 세포 분열과 세포 형 차별화 중에 가능한 역할의 이해를 증가 표현과 subcellular 지방화에 의해 동적으로 추적 할 수 있습니다.

의 장기, 고해상도 공 촛점 시간 경과 영상<em&gt; Arabidopsis 떡잎</em발아시&gt; 표피

우리는 애기 장대 씨앗에서 씨앗 코트 침구 분석 (SCBA)를 조립하는 절차를 제시한다. SCBA는 유전자와 체외에서 탐색 할 수있는 강력한 도구가 될 수 있도록 표시 방식 휴면 종자의 빛 신호에 대한 응답으로 배유 컨트롤 종자 발아. SCBA는 배유가 배아의 성장에 영향을 미칠 것으로 의심되는 모든 상황에서 적용 할 수있는 원리입니다.

유전자 탐구하는 종피 침구 분석<em&gt; 체외</em&gt; 어떻게 배젖 컨트롤 종자 발아에<em&gt; 애기 장대</em

식물 세포벽 구성은 조직 유형에 따라 다르며 리그닌, 셀룰로오스, 헤미셀룰로오스 및 펙틴을 포함할 수 있습니다. 세포 유형 수준에서 차이를 시각화하기 위해 다양한 염색 기술이 개발되었습니다. 이 논문은 일반적으로 사용되는 세포벽 염색 기술을 편집한 것입니다.

의 조직 화학 염색<em&gt; 애기 장대</em&gt; 차 전지 벽 요소

지질 폴리에스터는 두 개의 세포벽 변형, 즉 식물 큐티클과 수베린 함유 확산 장벽의 구조적 구성 요소를 구성합니다. 이 비디오에서는 탈지된 잎 전체에서 큐틴을 탈중합하는 방법에 대해 설명합니다. 이 방법은 큐틴 또는 수베린 생합성에서 손상된 돌연변이를 조사하는 데 적용할 수 있습니다.

식물 표피 지질 폴리 에스테르 단량체의 분리 및 성분 분석

염색질 면역 침전은 DNA가 생체 내에서 애기 단백질의 결합 부위의 식별을위한 강력한 기술이다. 이 절차는 염색질 가교과 분열, 관심의 단백질에 선택적 항체와 면역과 결합 된 DNA의 qPCR에 분석을 포함한다. 우리는 애기 장대 식물에 최적화 된 간단한 칩 분석에 대해 설명합니다.

애기 장대 단백질 DNA 상호 작용의 식별을위한 염색질 면역 침전 분석<em&gt; 생체</em

이 프로토콜 embryogenesis 애기 에 난 허가 뒤에 현미경으로 배아 패턴 형성의 검사를 통해 관찰 하는 방법을 설명 합니다.

애기 에서 Embryogenesis를 특성화 하는 방법

아라비도프스탈리아나(Arabidopsis) 종자의 표면 살균을 위한 고처리량 프로토콜이 제공되어 진공 펌프로 구성된 간단한 흡입 장치로 액체 처리 단계를 최적화합니다. 수백 개의 종자 시료는 하루에 표면 살균될 수 있습니다.

애기장염 씨앗의 표면 살균을 위한 높은 처리량, 견고하고 매우 시간 유연한 방법

원자력 현미경 압입 프로토콜은 정상 또는 제한된 성장 (즉, 물 부족 상태) 동안 조직 또는 기관의 특정 세포의 세포벽의 물리적 특성의 역할을 해부 할 수있는 가능성을 제공합니다.

살아있는 애기장대 뿌리의 표피 세포의 물리적 특성을 연구하기 위한 원자력 현미경

이 프로토콜은 사전 경험이나 교육이 필요하지 않으며 대부분의 분자 생물학 실험실에서 쉽게 접근할 수 있는 재료를 사용하여 매우 저렴한 비용으로 실행할 수 있는 강력한 묘목 접목 방법을 설명합니다.

확장 가능하고 유연하며 비용 효율적인 묘목 접목

이 논문은 기공 발달을 제어하는 유전자를 특성화하기 위해 표피 껍질을 사용하지 않는 두 가지 표현형 방법을 설명합니다. 첫 번째 방법은 톨루이딘 블루 O-염색 식물 표피를 사용하여 기공 표현형을 분석하는 방법을 보여줍니다. 두 번째 방법은 기공 리간드를 식별하고 생물학적 활성을 모니터링하는 방법을 설명합니다.

표피 표현형 점수를 통한 기공 발달에 관여하는 유전자 식별

탐색하세요 Arabidopsis eceriferum 돌연변이를 이용한 식물 표피 생합성 분석 방법을 통해 유전학적 접근으로 표피 형성 유전자를 규명하고 농업 및 임업에 활용할 수 있는 연구 가치를 확인하세요.

식물 표피의 생합성을 탐구 Arabidopsis eceriferum 돌연변이의 이용

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