Hier beschrijven we een protocol om de migratie van gliacellen te onderzoeken in de zich ontwikkelende Drosophila oog met behulp van levende microscopische analyse gecombineerd met GFP gelabelde gliacellen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Live-Imaging van gliale cel migratie in de Drosophila Eye verbeelding Disc
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Gliale cellen van zowel gewervelde en ongewervelde organismen moeten migreren naar uiteindelijke doelstelling regio's om te ensheath en te ondersteunen verbonden neuronen. Terwijl de recente vooruitgang is geboekt om de live-migratie van gliacellen te beschrijven in de ontwikkelingslanden popstadium vleugel (1), studies van
Protocol
Deel 1: Pre-experimentele set-up.
- Een week op voorhand, mate vliegt genereren larve die uitdrukken GFP onder de controle van een glia-specifieke promoter. Voor ons experiment hebben we gevisualiseerd GFP getagd met een nucleair lokalisatie volgorde uitgedrukt in gliale cellen met behulp van de omgekeerde polariteit (repo) promotor (3, 4).
- Bereid dekglaasjes ten minste een dag van tevoren door het weken 18 mm ronde dekglaasjes gedurende 10 minuten in 1% poly-L-lysine oplossing en de lucht drogen 's nachts.
- Op de dag voor het experiment, schoon een Chamlide magnetische cultuur kamer door het weken componenten 's nachts in....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
In dit protocol beschrijven we de observatie van gliale cel migratie in het oog denkbeeldige schijf met behulp van live-microscopie. In ons wild-type voorbeeld (figuur 1 AD), gebruikten we een nucleaire GFP marker om gliale cel beweging waarnemen in het oog disc in de loop van een uur. In een mutant voor een kandidaat-gen die nodig zijn voor gliale cel migratie momenteel onderzoek in ons laboratorium, zagen we een blokkering van gliale celkernen binnen de optische steel gedurende een periode van een uur (figuur.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te melden.
Dankbetuigingen
Patrick Cafferty wordt ondersteund door een postdoctoraal fellowship van de Multiple Sclerose Vereniging van Canada.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen | |
|---|---|---|---|---|
| Poly-L-lysine | Reagens | Sigma-Aldrich | P8920 | |
| Schneider’s insectenmedium | Reagens | Sigma-Aldrich | S0146 | |
| Penicilline-streptomycine | Reagens | Sigma-Aldrich | P4458 | |
| Insuline-oplossing uit runderpancreas | Reagens | Sigma-Aldrich | I0516 | |
| Chamlide magnetische kamer | Instrument | Live cell Instrument | CM-R-10 | Kamer van het type 35 mm schaal voor 18 mm dekglas |
| Ultrascherpe knip-schaar | Instrument | Fine Science Tools | 15200-00 | |
| Dumont #5 pincet | Instrument | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Fluorescentiemicroscoop | Microscoop | Carl Zeiss, Inc. | Elk fluorescentie-beeldvormingssysteem dat over de nodige filters en excitatie voor GFP beschikt, kan worden gebruikt. |
Referenties
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
