De auteurs hebben niets te melden.

dissectie van de imaginaire discs uit 3e instar drosophila larven

Dissection of Imaginal Discs from 3rd Instar Drosophila Larvae

Dit protocol laat de dissectie techniek die wordt gebruikt voor het isoleren van verbeelding schijven van Drosophila larven in de 3e instar stadium. Methoden voor de vaststelling van het weefsel na het zeggen en het verwijderen van de vleugel, poot, en ogen schijven worden gedemonstreerd direct op een objectglaasje voor verdere visualisatie.

Dissectie van de imaginaire Discs uit 3e Instar Drosophila Larven

Vandaag ga ik u laten zien hoe u imaginale schijven dissecteert uit Drosophila-larven in het derde stadium. Larvale schijven uit het derde stadium kunnen worden gebruikt voor een reeks ontwikkelingsprocessen. In ons lab bestuderen we ze om het proces van apoptose te observeren, maar u kunt er ook diverse eiwitten in tot expressie brengen om ze op die manier te bestuderen en allerlei ontwikkelingsprocessen te zien die zich in de schijven voltrekken.Om dit te doen, gebruik ik verschillende zeer belangrijke hulpmiddelen. Ten eerste is er de pincet voor het oppakken, waarmee we de larven uit hun schaaltjes halen. Vervolgens zijn de dissectie-pincetten van groot belang; deze moeten extreem scherp zijn om de dissectie succesvol uit te kunnen voeren.Vervolgens gebruiken we een chirurgisch mesje, een chirurgisch mesje nummer 11, om de schijven uit de kop te verwijderen. Daarna plaatsen we de schijven op een objectglas met Vector Shield als montagemedium. Het eerste wat we gaan doen is het verzamelen van enkele derdeste-instadiumlarven van *Drosophila melanogaster*.Ik gebruik hier gewoon mijn plukstokje om ze als het ware van de wand van het flesje los te wrikken. Soms helpt het als het stokje een beetje nat is, waarna je ze in een druppel PBS plaatst. Oké, hier hebben we onze derde sterlarve.Omdat ik rechtshandig ben, draai ik zijn kop naar rechts en gebruiken we een paar referentiepunten om ons te leiden naar de plek waar we hem moeten vastpakken. Eerst is er het hoofdgedeelte van de trachea hier en hier. En vervolgens is er een kleine dwarsdoorsnede hierboven richting de kop.Eerst pak ik de larve voorzichtig vast, ongeveer twee derde van het lichaam vanaf de kop. Vervolgens pak ik met mijn rechterhand een paar millimeter achter het dwarsstuk vast, waarbij ik probeer ongeveer tot het midden van de breedte van de larve te reiken. Dat is een goede grip.U ziet dat ik ongeveer halverwege ben. Vervolgens trek ik met mijn rechterhand voorzichtig naar voren; u ziet alle darmen naar buiten komen. Oké. Het hoofdgedeelte van het lichaam kan nu worden weggegooid.En hier hebben we de kop, inclusief de imaginale schijven die aan de monddelen vastzitten. Ik pak hem daarom bij de monddelen vast, zodat ik geen van de schijven beschadig, en verplaats hem naar een nieuwe druppel PBS. Nu hebben we onze gefixeerde larvale kop.We gaan al het overtollige weefsel verwijderen en de larve vervolgens ofwel bij de monddelen vastpakken zoals eerder gedaan, of met de pincet tegen de dissectieplaat drukken. De monddelen bevinden zich nu aan de linkerzijde. Oké, hier zien we het darmkanaal, dat we niet nodig hebben, en daar bevindt zich een speekselklier.Er is wat vetlichaam aanwezig. Blijf dit weghalen, vooral vet, omdat dit bepaalde assays en kleuringen kan storen en alles kan kleuren wat u niet wilt. We hebben nu de gereinigde larvale kop.We hebben nu de larvale koppen, die zijn gedisseceerd van het lichaam, gefixeerd en gewassen, waarbij het overbodige weefsel is verwijderd, en ze zijn behandeld met de benodigde reagentia, zoals een antilichaamskleuring in C2-tunnel of een andere functionele kleuring. We hebben ze nu op een objectglas geplaatst en we zijn klaar om de eigenlijke schijven van de kop te disseceren. De monddelen.Oké, deze keer bevinden de monddelen zich hier aan de linkerkant. Ik ga mijn pincet pakken en deze gewoon tegen het preparaatglas drukken. In mijn rechterhand heb ik een scalpelblad nummer 11, wat ook een fijner instrument is om mee te dissekeren.Eerst zal ik het centraal zenuwstelsel (CZS) en de optische lobben verwijderen. Hier ziet u het CZS, de twee optische lobben en de daaraan bevestigde oog-antenne-schijven. Ik verwijder het CZS door mijn mesje tussen de optische lobben en de oogschijven te steken en langzaam te trekken, waardoor de oogschijven een beetje uitrekken.Oké, daar hebben we dus het CZS en de optische lobben. We hebben nu de twee oogschijven die van het CZS zijn losgekoppeld. Nu ga ik ze weghalen bij de monddelen door voorzichtig aan de basis te knippen en te trekken.Oké, dus er is één oog-antenne-schijf, de andere oog-antenne-schijf. Oké. En nu kunnen we de vleugelschijf hier uitsteken zien. Ik ga, opnieuw, voorzichtig de basis inknippen en trekken.Dus hier hebben we een vleugelschijf en een daaraan gehechte pootschijf, samen met een klein stukje trachea. Oké, dus daar is je vleugelschijf met een aangehechte pootschijf, en er zijn duidelijk meerdere pootschijven. We kunnen dus in dit gebied zoeken en meer schijven vinden door voorzichtig met het scalpellmes te tasten.Dat zijn alle schijven die we in deze zullen vinden. Er zijn nog een paar poot-imaginale schijven.

dissection-of-imaginal-discs-from-3rd-instar-drosophila-larvae

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

University of California, Irvine (UCI).  Dit protocol laat de dissectie techniek die wordt gebruikt voor het isoleren van verbeelding schijven van Drosophila larven in de 3e instar stadium. Methoden voor de vaststelling van het weefsel na het zeggen en het verwijderen van de vleugel, poot, en ogen schijven worden gedemonstreerd direct op een objectglaasje voor verdere visualisatie.

Dissectie van de imaginaire Discs uit 3e Instar Drosophila Larven

In dit artikel

Samenvatting

Openbaarmakingen

Herprints en machtigingen

Tags