Genetische studies van het menselijk DNA Repair eiwitten met behulp van gist als een model-systeem

Samenvatting

Genetische studies in gist kan worden gebruikt om de moleculaire en cellulaire functies van de menselijke genen te onderzoeken in de cellulaire DNA metabolisme. Methoden beschreven voor de genetische karakterisering van het menselijk WRN Genproduct defect in de vroegtijdige veroudering aandoening Werner syndroom in functioneel geconserveerd paden met behulp van gist als een soepel model systeem.

Samenvatting

Inzicht in de rol van menselijk DNA reparatie-eiwitten in genetische paden is een geweldige uitdaging voor veel onderzoekers. Genetische studies in zoogdieren systemen zijn te wijten aan het gebrek aan direct beschikbare tools, zoals gedefinieerd mutant genetische cellijnen, de regelgeving expressie-systemen, en geschikte selecteerbare merkers beperkt. Om deze moeilijkheden te omzeilen, hebben model genetische systemen in de lagere eukaryoten uitgegroeid tot een aantrekkelijke keuze voor de studie van functioneel geconserveerd DNA reparatie-eiwitten en routes. We hebben een model ontwikkeld gist systeem om de slecht gedefinieerde genetische functies van het Werner syndroom helicase-nuclease studie (

Protocol

1. Giststammen

Stammen met wild-type SGS1 top3 (WT, W303-1A, genotype, MAT een ade2-1 canl-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 TRPL-l ura3-1) [2], een sgs1 mutant (W1292-3C ; genotype MAT een SUP4-o:: ​​URA3 sgs1-25 ade2-1 CAN1-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 trp1-1 ura3-1 rad5-535) en een sgs1 top3 mutant (W1058-11C, genotype, MAT een SUP4-o:: ​​URA3 sgs1-25 top3-2:: HIS3 ade2-1 CAN1-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 trp1-1 ura3-1 rad5-535) werden gekenmerkt [3] en werden vriendelijk verschaft door Dr Rodney Rothstein ....

Discussie

Een van de sterke punten van het gebruik van gist als model systeem is de beschikbaarheid van de mutanten in bepaalde DNA-replicatie en reparatie trajecten die zijn geconserveerd tussen gist en mens. Verdere selectie van transformanten herbergen de specifieke genen is makkelijk en betrouwbaar als het laboratorium stammen auxotrofe mutanten en vectoren met auxotrofe markers zijn direct beschikbaar. Met behulp van deze vectoren de expressie van het gen-producten kan worden geregeld door ze onder de controle van een induce.......