Isolatie van de Mens navelstreng endotheel cellen (HUVEC)

Samenvatting

Deze video protocol illustreert de isolatie en de cultuur van humane navelstreng endotheel cellen (HUVEC) van menselijke navelstreng. Eenmaal geïsoleerd deze cellen kunnen worden gebruikt voor in-vitro angiogenese assays, zoals de Optimized fibrinegel Bead Assay ook aangetoond door de Hughes lab.

Samenvatting

Angiogenese is een complexe multi-step proces, waar in reactie op de angiogene stimuli, nieuwe schepen worden gemaakt van de bestaande bloedvaten. Deze stappen zijn: afbraak van de basale membraan, proliferatie en migratie (ontspruiten) van endotheelcellen (EC) in de extracellulaire matrix, de uitlijning van de EC in de koorden, lumen vorming, anastomose, en de vorming van een nieuwe kelder membraan. Velen in vitro testen zijn ontwikkeld om dit proces te bestuderen, maar de meeste alleen maar na te bootsen bepaalde stadia van de angiogenese, en morfologisch de schepen vaak niet lijken op schepen in vivo. Hier laten we zien een geoptimaliseerd in vitro angiogenese-test dat de menselijke navelstreng EG en fibroblasten gebruikt. Dit model recapituleert alle van de belangrijkste vroege stadia van angiogenese, en vooral de schepen weer te geven patent intercellulaire lumen, omringd door gepolariseerd EC. Schepen kunnen gemakkelijk worden waargenomen door de fase-contrast-en time-lapse microscopie, en teruggewonnen in zuivere vorm voor downstream-toepassingen.

Protocol

Procedure

1. Leg het snoer op schone pad en dep het overtollige bloed. Het maken van verse snijdt aan beide uiteinden van het snoer.
2. Plaats 21 1 / 2 G naald met de plastic beschermhuls rond de naald ON, in de ader. (De ader is de grootste opening, de twee kleinere zijn slagaders)
3. Klem de naald op zijn plaats met een hemostat en bevestig de 20CC spuit van Hanks om de naald.
4. Duw de Hanks door de ader met matige druk. Verzamel het afval in het bekerglas met bleekmiddel. (Holding de naald en het snoer met een hand terwijl u de naald zou knallen uit de ader te voorkomen.) Als er veel b....

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
0,1% Collagenase			10 mL per navelstreng, opgewarmd tot 37 °C
Weefkweekflessen			T75, één per navelstreng.
Hanks medium
scharen			steriel
bekerglas			steriel
50 mL buizen