Voorbereiding van oligomere β-amyloïde 1-42 En Inductie van synaptische plasticiteit Waardevermindering op hippocampus Slices

Samenvatting

Een kenmerk van de ziekte van Alzheimer is de hoogte van Aß _1-42 Peptide. Hier hebben we een protocol voor het bereiden van synthetische Aß _1-42 Oligomeren, die hippocampus Long-Term Potentiëring ernstig schaadt, een cellulair correlaat van het geheugen. Deze procedure is handig voor het onderzoeken van de mechanismen van Aß-geïnduceerde pathologie en drug discovery.

Samenvatting

Bijzondere waardevermindering van synaptische verbindingen is waarschijnlijk de subtiele amnesic veranderingen die zich op de vroege stadia van de ziekte van Alzheimer s (AD) ten grondslag liggen. β-amyloïde (Aß), een peptide geproduceerd in grote hoeveelheden in AD, is bekend dat het Long-Term Potentiëring (LTP), een cellulaire correlaat van leren en geheugen te verminderen. Inderdaad, LTP bijzondere waardevermindering wordt veroorzaakt door Aß is een nuttig experimenteel paradigma voor het bestuderen van synaptische disfuncties in AD modellen en voor het screenen van geneesmiddelen die in staat van verzachtende of terugkeer dergelijke synaptische bijzondere waardeverminderingen. Studies hebben aangetoond dat Aß de LTP verstoring bij voorkeur produceert via zijn oligomere vorm. Hier hebben we een gedetailleerd protocol voor afbreuk te doen aan LTP door perfusie van oligomerized synthetische Aβ1-42 peptide op acute hippocampus plakjes. In deze video, schetsen we een stap-voor-stap procedure voor de voorbereiding van oligomere Aß

Protocol

Het mengen β-amyloïde peptide

Voordat u begint zijn klaar:

• Aß _1-42 (gevriesdroogd poeder)
• 1,1,1,3,3,3-hexafluor-2-propanol (HFIP)
• Low-bindende polypropyleen microcentrifugebuizen (1,5 ml)
• Gasdicht Hamilton spuit met Teflon duiken stop (250 pl)
• Dimethylsulfoxide (DMSO)

1. Laat gelyofiliseerd Aß _1-42 op kamertemperatuur equilibreren gedurende 30 minuten om condensatie te voorkomen bij het ​​openen van het peptide flacon.
2. Onder de zuurkast, opnieuw te schorten Aß _1-42 peptide in ijskoud HFIP om een een mM oplossing en vortex de oplos....

Discussie

Zoals hierboven beschreven, kunnen verschillende problemen bij de voorbereiding van oligomere Aß resulteren in onverkort van LTP. Een manier om te beoordelen of Aß degradatie of het ontbreken van Aß oligomerization kan hebben plaatsgevonden is het evalueren van de Aß voorbereiding met behulp van TRIS-Tricine PAGE / Western blotting analyse en analytische ultracentrifuge (niet beschreven in dit protocol). Wanneer Westerse Blotting monsters worden bereid onder non-denaturing/non-reducing voorwaarden kan het een succesvoll.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Aβ 1-42 (gevriesdroogd)	American Peptide	62-0-80
1,1,1,3,3,3-hexafluor-2-propanol (HFIP)	Fluka	52517
Dimethylsulfoxide (DMSO)	Biotium, Inc.	90082
50mL polypropyleen centrifugebuizen	Corning	05-538-67
1.5ml MaxyClear microtubes Maximum recovery	Axygen Scientific	MCT-150-L-C
Fosfaatgebufferde zoutoplossing pH 7.4	Invitrogen	10010-023
GASTIGHT spuiten 250 μL	Hamilton Co	1725
Badsonicator	Branson	3510
Savant SpeedVac concentratiesysteem	Verschillend	SC 110A