Methodenartikel

Micro-dissectie van hersenen van de rat voor RNA of eiwit-extractie uit specifieke hersengebieden regio

DOI:

10.3791/269

⸱

30 augustus 2007

 ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Neurodegenerative Diseases, Department of Anatomy, LKS Faculty of Medicine, The University of Hong Kong - HKU

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Micro-dissectie van hersenen van de rat in verschillende regio's is van groot belang voor de studie van verschillende neurodegeneratieve ziekten. Deze video toont micro-dissectie van de vier grote gebieden van de hersenen zijn reukorgaan, frontale cortex, striatum en de hippocampus in de hersenen van de rat verse weefsel. Nuttige tips voor snelle verwijdering van de desbetreffende regio's om RNA en eiwit afbraak van het weefsel te voorkomen worden gegeven.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Micro-dissectie van hersenen van de rat in verschillende regio's is van groot belang voor de studie van verschillende neurodegeneratieve ziekten. Deze video toont micro-dissectie van de vier grote gebieden van de hersenen zijn reukorgaan, frontale cortex, striatum en de hippocampus in de hersenen van de rat verse weefsel. Nuttige tips voor snelle verwijdering van de desbetreffende regio's om RNA en eiwit afbraak van het weefsel te voorkomen worden gegeven.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Stap 1

Offer van de rat volgens de vastgestelde protocollen. Haal de hersenen uit de schedel en het in ijs spoel koud DEPC behandeld Milli Q water op elk oppervlak bloed te verwijderen.

Stap 2

Plaats op koude metalen plaat. Snijd de hersenen bi-half in de rechter-en linker hersenhelft.

figure-protocol-1

Figuur 1. Het snijden posities van de mediale zicht van de rat halfrond

Stap 3

Verzamel de bulbus olfactorius direct na de eerste snede. Flash bevriezen het model in vloeibare stikstof en bewaar bij -80 ° C.

figure-protocol-2

Figuur 2. Bulbus olfactorius dissectie

Stap 4

Verzamelen van de frontale cortex direct na de tweede snede, met behulp van een mes en een tang Dumont nr. 5. Flash bevriezen het model in vloeibare stikstof en bewaar bij -80 ° C.

figure-protocol-3

Figuur 3. Frontale cortex dissectie

Stap 5

Verzamel de striatum (nucleus caudatus) rechts na de derde gesneden met behulp van twee Dumont No.5 tang. Flash bevriezen het model in vloeibare stikstof en bewaar bij -80 ° C.

figure-protocol-4

Figuur 4. Striatum (nucleus caudatus) dissectie

Stap 6

Voor het verzamelen van de hippocampus, opgemaakt de ventrale zijde van de hersenen en verwijder vervolgens middenhersenen naar de hippocampus bloot te leggen. Ontleden van de hippocampus van de cortex met behulp van twee Dumont No.5 tang. Flash bevriezen het model in vloeibare stikstof en bewaar bij -80 ° C.

figure-protocol-5

Figuur 5. Hippocampus dissectie

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Verschillende gebieden van de hersenen associëren met verschillende neurodegeneratieve ziekten. Bijvoorbeeld, frontale cortex en het striatum verband met de ziekte van Parkinson s, terwijl hippocampus betrekking heeft met de ziekte van Alzheimer. Precieze micro-dissectie van de hersenen laat ons toe om het mRNA en eiwit veranderingen in de aangetaste regio te detecteren nauwkeuriger.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
De dieren werden behandeld volgens het protocol voor het gebruik van dierlijke in het onderzoek goedgekeurd door het Comite over het gebruik van levende dieren in Onderwijs en Onderzoek (CULATR) in de Universiteit van Hong Kong en volgens de National Institutes of Health richtlijnen voor het gebruik van dieren.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
MicroscoopOlympus Corporation
DissectiegereedschapMetalen plaat, pincetten, mesje, etc. Individueel in aluminiumfolie gewikkeld en acht uur lang verhit bij 180oC om RNase te elimineren. Voor gebruik ijskoud gemaakt.

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).
  2. Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

RNA extractiereukbolfrontale cortexstriatumhippocampusvloeibare stikstof

Gerelateerde artikelen