Kwantitatieve analyse van kanker metastase met behulp van een Avian Embryo Model

Samenvatting

Met behulp van kwantitatieve PCR, we zien hoe de gevestigde chick CAM-model kan worden gebruikt om kwantitatief analyseren van de uitzaaiing van menselijke tumorcellen naar verre organen.

Samenvatting

Tijdens de metastase verspreiden kankercellen uit de primaire tumor, binnen te dringen in de omliggende weefsels, en de verspreiding naar verre organen. Metastase is een complex proces dat kan gaan om vele soorten weefsel, overspanning variabele periodes en zich vaak diep in organen, waardoor het moeilijk te onderzoeken en te kwantificeren. Bovendien is de effectiviteit van de metastatische proces beïnvloed door de verschillende stappen in de metastatische cascade waardoor het moeilijk is om de bijdrage van een enkel aspect van de tumor cel gedrag te evalueren. Als gevolg hiervan zijn metastase testen vaak uitgevoerd in proefdieren om een ​​realistische context noodzakelijk om in te studeren metastase te bieden. Helaas zijn deze modellen nog verder gecompliceerd door hun complexe fysiologie. Het kuiken embryo is een uniek in vivo model dat veel beperkingen overwint aan het bestuderen van metastase, te wijten aan de bereikbaarheid van de chorion-membraan (CAM), een goed gevasculariseerd extra-embryonaal weefsel bevindt zich onder de eierschaal die ontvankelijk is voor de xenografting van tumorcellen (figuur 1). Aangezien het kuiken embryo is natuurlijk immunodeficiënte, de CAM ondersteunt gemakkelijk de innesteling van zowel de normale en tumor weefsel. Het belangrijkste is dat het aviaire CAM ondersteunt met succes de meeste kankercellen kenmerken, zoals groei, invasie, angiogenese, en herinrichting van de micro-omgeving. Dit maakt het model bijzonder nuttig voor het onderzoek van de routes die leiden tot kanker metastase en de reactie van uitgezaaide kanker aan nieuwe potentiële geneesmiddelen te voorspellen. De detectie van verspreide cellen door soortspecifieke Alu PCR maakt het mogelijk om kwantitatief te beoordelen uitzaaiingen in organen die zijn gekoloniseerd door zo weinig als 25 cellen. Met behulp van de Human epidermoïde carcinoom cellijn (HEp3) gebruiken we dit model tot spontane uitzaaiing van kankercellen te analyseren naar verre organen, waaronder het kuiken lever en longen. Bovendien, met behulp van de Alu-PCR-protocol tonen we aan de gevoeligheid en reproduceerbaarheid van de test als een instrument voor het analyseren en intravasation, arrestatie, extravasatie, en kolonisatie te kwantificeren als individuele elementen van metastase.

Protocol

1. De voorbereiding van de eieren voor xenografting (spontane metastase)

1. Vers gelegde bevruchte kippen eieren worden uitgebroed in een roterende incubator voor 10 dagen bij 100 ° C en 60% luchtvochtigheid. De eieren worden gedraaid vier keer per uur.
2. Op de ontwikkeling dag 10 worden de eieren gelegd op hun kant in een ei rack. Een zwanenhals lamp of een andere geschikte lichtbron wordt gebruikt om kaarsen van de eieren door schijnt het licht in de eierschaal aan het stompe eind van het ei waar de airsac zich bevindt.
3. Het chorion ader zich bevindt en gemarkeerd. Deze ader bevindt zich aan de bovenkant van de eierschaal waar het de kruisi....

Discussie

De chick CAM is gebruikt voor decennia als een modelsysteem om de verschillende aspecten van kanker biologie en metastatische progressie te bestuderen. Principe evaluatie van gemetastaseerd vaardigheden zijn uitgevoerd in dit model door een verscheidenheid van groepen, waaronder de analyse van de rusttoestand (Aguirre Ghiso et al., 1999;. Ossowski en Reich, 1983), remodellering van het weefsel (Deryugina et al., 2005;. Hahn-Dantona . et al., 1999), en metastase (Zijlstra et al., 2008;.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Naam van het serum	Vennootschap	Catalogus nummer	Commentaar (optioneel)
1X Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)	Invitrogen	11995073
Dulbecco's fosfaat gebufferde zoutoplossing (D-PBS) (1x), vloeibaar	Invitrogen	14190250	pH 7,4
Trypsine, 0,05% (1X) met EDTA 4NA, vloeibare	Invitrogen	25300054
Sportsman hatcher	Berry Hill	1550HA	Deze incubators zijn enkele van de meest direct beschikbaar. Toch zal de video tonen verschillende apparatuur.
Sportsman incubator	Berry Hill	1502EA
Dremel roterend gereedschap	Dremel
Dremel cutoff wielen niet. 36	Dremel	409
Draagbare Pipetteer Aid	Visser	1368115E
Katoen Tipped Applicators	Visser	23-400-001)
Bevruchte eieren	Verschillende		Veel verschillende leveranciers kunnen worden gebruikt. De eieren moet ongeveer 35 tot 55 gram. De hennen die legt ze moet tussen 36 en 55 weken oud.
Hemocytometer	Hausser Wetenschappelijke, VWR	15170-090
Fiber-optische microscoop illuminator	Amscope	HL250-AY	150W
25 gauge naald
SYBR Green Extract-N-Amp Tissue PCR Kit	Sigma-Aldrich	XNATRG