Inleiding tot de Ultrasound Gerichte microbellen Destruction Techniek

Samenvatting

Echografie Gerichte microbelletjes Destruction (UTMD) kan worden gebruikt om site-specifieke levering van bioactieve moleculen, waaronder therapeutische genen direct, hun organen toegankelijk is voor echografie, zoals het hart en de lever doel ^1-6.

Samenvatting

In UTMD, bioactieve moleculen, zoals negatief geladen plasmide DNA vectoren die coderen voor een gen van interesse, worden toegevoegd aan de kationische schelpen van lipide microbellen contrastmiddelen ^7-9. Bij muizen deze vector-dragende microbellen kan intraveneus of direct worden toegediend aan de linker ventrikel van het hart. In grotere dieren die ze kunnen ook worden toegediend via een katheter intracoronaire. De nalevering uit de circulatie tot een doelorgaan vindt plaats door akoestische cavitatie op een resonantiefrequentie van de microbellen. Het lijkt waarschijnlijk dat de mechanische energie opgewekt door de microbellen vernieling leidt voorbijgaande porie formatie in of tussen de endotheelcellen van de microvasculatuur van de beoogde regio ^10. Als gevolg van deze sonoporatie effect, is de transfectie-efficiëntie in en over de endotheelcellen verbeterd en transgen-coderende vectoren worden gestort in het omliggende weefsel. Plasmide DNA dat in de circulatie wordt snel afgebroken door nucleasen in het bloed, die verder de kans van de levering reduceert tot niet-gesoniceerd weefsels en leidt tot zeer specifieke target-orgaan transfectie.

Protocol

1. Microbellen voorraad voorbereiding

1. In 10 ml van PBS mix 200 mg 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfatidylcholine en 50 mg 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfatidylethanolamine met 1 g glucose.
2. Verwarm het mengsel in bad met kokend water 20-30 minuten, pipet mengen om de 5 minuten.
3. De oplossing kan worden bewaard bij 4 ° C gedurende maximaal 6 maanden.

2. Microbellen Voorbereiding

1. Neem een ​​250 ul van de bereide microbellen voorraad-oplossing en incubeer bij 40 ° C gedurende 15 minuten.
2. De voorverwarmde microbelletjes oplossing wordt vervolgens overgebracht naar een 1,5 ml microbuisj....

Discussie

UTMD vertegenwoordigt een nieuwe benadering voor gen-levering. Als een platform technologie kan worden gecombineerd met een van de vele mogelijke gentherapie-strategieën, om een ​​groot aantal bioactieve moleculen bij een hoge mate van weefsel specificiteit gewenst is te leveren. De belangrijkste biologische beperking van de techniek is de lage efficiëntie van transfectie. Een andere belangrijke overweging is de toegankelijkheid van de doelorgaan aan echografie, die duidelijk kan worden verminderd door in te grijpen bot.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Naam van het reagens / apparatuur	Vennootschap	Catalogus nummer	Reacties
1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfatidylcholine	Sigma-Aldrich	P-5911	onderdeel van de microbellen lipide shell
1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosfatidylethanolamine	Sigma-Aldrich	P-3275	onderdeel van de microbellen lipide shell
glucose	Sigma-Aldrich	G5400	gedachte aan de microbellen te stabiliseren
fosfaat-gebufferde zoutoplossing	Sigma-Aldrich	P5368
glycerol	Sigma-Aldrich	G5516	verondersteld om microbellen te voorkomen dat coalescentie
Octafluoropropane gas	Airgas	N / A	inert gas worden gebruikt in klinische toepassingen
VialMix tandheelkundige amalgamator	Bristol-Myers Squibb	N / A
1 MHz, 13mm, ongerichte transducer	Olympus	A303S-SU
20 MHz Functie / Arbitrary Waveform Generator	Agilent	33220A
Eindversterker	Krohn-Hite Co	Model 7500
Hydrofoon	Bruel en Kjaer	Type 1803
Laad Versterker	Bruel en Kjaer	Type 2634
500 MHz oscilloscoop	LeCroy	9354L
VisualSonics 'Vevo 2100 Imaging System met 34 MHz transducer	VisualSonics	2100
27G een inch staartader katheters	VisualSonics	N / A
Genie Plus infuuspomp	Kent Wetenschappelijke	GENIE