Method Article

Morfometrische analyses van het netvlies secties

DOI:

10.3791/3377

February 19th, 2012

In This Article

Erratum Notice

Important: There has been an erratum issued for this article. Read More ...

Erratum

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Formal Correction: Erratum: Morphometric Analyses of Retinal Sections
Posted by JoVE Editors on 1/01/1970. Citeable Link.

null

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze video toont drie soorten morfometrische analyses van het netvlies, waaronder het meten van de binnenste nucleaire laag dikte, het kwantificeren van het aantal retinale ganglioncellen (RGC) en het meten van de afmetingen van RGC. De techniek kan bieden een eenvoudige, maar wetenschappelijk platform voor morfometrische analyses.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Morfometrische analyses van het netvlies onderdelen zijn gebruikt bij de behandeling van retinale aandoeningen. Voor voorbeelden werden neuronale cellen significant verlies in de retinale ganglion cellaag (RGCL) in ratmodellen met N-methyl-D-aspartaat-(NMDA)-geïnduceerde excitotoxiciteit 1 retinale ischemie-reperfusie 2 en glaucoom 3. Vermindering van INL en innerlijke plexiform laag (IPL) diktes werden teruggedraaid met Citicoline behandeling in ratten de ogen blootgesteld aan kainic zuur-gemedieerde glutamaat excitotoxiciteit 4. Wijziging van RGC dichtheid en soma maten werden waargenomen met verschillende behandelingen met medicijnen in de ogen met een verhoogde intra-oculaire druk 3,5,6. Daarom kan met objectieve methoden van het analyseren van de retinale morphometries van grote betekenis zijn bij de evaluatie van retinale aandoeningen en de effectiviteit van therapeutische strategieën.

Het netvlies structuur is multi-lagen en verschillende soorten neuronen Exist in het netvlies. De morfometrische parameters van het netvlies, zoals het aantal cellen, celgrootte en de dikte van de verschillende lagen zijn complexer dan de celcultuur. Vroeg op, kunnen deze parameters worden gedetecteerd met behulp van andere commerciële imaging software. De waarden zijn gewoonlijk van relatieve waarde, en de overgang naar de juiste waarde kan verder nauwkeurige berekening nodig. Ook kan het traceren van de celgrootte en morfologie niet nauwkeurig en gevoelig genoeg statistische analyse van met name de chronische glaucoom model. De metingen die in dit protocol voorzien in een meer nauwkeurige en eenvoudige manier. En de absolute lengte van de lijn en de grootte van de cel direct gemakkelijk worden gekopieerd naar andere bestanden worden gerapporteerd. Zo volgden we de rand van de binnenste en buitenste de meeste kernen in de INL en vormden een lijn dan met behulp van de software om een ​​hoek van 90 graden te vestigen op de dikte te meten. Terwijl zonder de hulp van de software, de lijn misschien schuin en het veranderen van retinale dikte kanniet herhaalbaar zijn bij individuele waarnemers. Bovendien kan het aantal en de dichtheid van RGC worden gekwantificeerd. Dit protocol vermindert met succes de variabiliteit in kwantificeren van kenmerken van het netvlies, verhoogt de gevoeligheid bij het opsporen van minimale veranderingen.

Deze video tonen drie soorten morfometrische analyse van het netvlies secties. Zij omvatten meten INL dikte, dat het aantal RGC en meting van de grootte van RGC in absolute waarde. Deze drie analyses worden uitgevoerd met Stereo Investigator (MBF bio - MicroBrightField, Inc.) De techniek kan bieden een eenvoudige, maar wetenschappelijk platform voor morfometrische analyses.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Gereedschap

Microscoop, Nikon

Stereo Investigator, MBF bio - MicroBrightField, Inc

2. Voorbereiding

  1. Bij werkzaamheden aan een morfometrische analyse, elk netvlies monster doorsnede van 4 micron dikte en ondergaat de H & E kleuring.
  2. Het netvlies sectie is verdeeld in 4 regio's - de bovenste perifere regio, de bovenste centrale regio, de lagere perifere regio, en de lagere centrale regio.
  3. Na het definiëren van de regio's, wordt een beeld van elke regio verworven 10x40 vergrotingen onder de heldere straal microscoop van Nikon.
  4. Nu zijn ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Hoe maak je een meer nauwkeurige dikte meting te verkrijgen?

U kunt het beeld vergroten door te klikken op "Zoom in" knop en de linker muisknop in het opsporen venster. De INL grens is duidelijk te zien. Als de tip van de lijn is niet aan de buitenste rand van het INL, kunnen we de lijn aan te passen onder de bewerkingsmodus. Na het plukken van de betrokken lijn met de rechtermuisknop op het opsporen en kies "Plaats Point in geselecteerde contour". Een punt kan worden toe.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te onthullen.

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het werk op het oog onderzoek in dit laboratorium wordt ondersteund door de Amerikaanse Health Assistant Foundation, Azalea (1972) Endowment Fund, en HKU fonds voor kleinschalige projecten (20097176185).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Naam van het serum Type Vennootschap Catalogusnummer
Stereo Investigator MBF bio-Analyse Software MicroBright Veld
Microscoop Olympus BX51 Olympus Corporation BX51

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)–Induced Apoptosis in Rat Retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).
  2. Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. Apopto....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Retinal MorphometryInner Nuclear Layer ThicknessRetinal Ganglion Cell CountRetinal Ganglion Cell SizeStereo Investigator SoftwareImage Analysis ProtocolBrightfield MicroscopyH E StainingRetinal Layer TracingCell Morphometry Measurement

Related Articles