Drosophila melanogaster is een genetisch en gedragsmatig soepel model systeem dat is gebruikt om de moleculaire en cellulaire basis van een groot aantal belangrijke biologische processen meer dan een eeuw een begrip. Drosophila goed is benut om inzicht te krijgen in de genetische basis van vlieg gedrag.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Drosophila melanogaster, de fruitvlieg, is gebruikt om moleculaire mechanismen van een breed scala van menselijke ziekten zoals kanker, hart-en vaatziekten en diverse neurologische ziekten 1 te bestuderen. We hebben geoptimaliseerd eenvoudig en robuust gedrag assays voor het bepalen van larvale motoriek, volwassen klimvermogen (RING-test), en verkering gedrag van Drosophila. Deze gedrags-tests zijn breed toepasbaar voor het bestuderen van de rol van genetische en omgevingsfactoren op vlieg gedrag. Larven kruipen mogelijkheid betrouwbare wijze kan worden gebruikt voor het bepalen vroeg stadium veranderingen in de kruipende capaciteiten van Drosophila larven en ook voor de behandeling effect van geneesmiddelen of ziekte bij de mens genen (in transgene vliegen) op hun motoriek. De larven kruipen test wordt meer van toepassing als uitdrukking of afschaffing van een gen veroorzaakt letaliteit in pop of volwassen stadia, als deze vliegen niet overleven tot de volwassenheid, waar ze anders zouden kunnen worden beoordeeld. Deze fundamentele eenssay kan ook worden gebruikt in combinatie met licht en stress extra gedragsreacties onderzoeken Drosophila larven. Baltsgedrag is op grote schaal gebruikt om de genetische basis van seksueel gedrag te onderzoeken, en kan ook worden gebruikt om de activiteit en de coördinatie te onderzoeken, maar ook leren en geheugen. Drosophila baltsgedrag heeft betrekking op de uitwisseling van verschillende zintuiglijke prikkels visuele, auditieve en chemosensory signalen tussen mannen en vrouwen die leiden tot een complexe reeks goed gekarakteriseerde motor gedrag met als hoogtepunt in succesvolle copulatie. Traditionele volwassen klimmen assays (negatieve geotaxis) zijn vervelend, arbeidsintensief en tijdrovend, met aanzienlijke verschillen tussen de verschillende studies 2-4. De snelle iteratieve negatieve geotaxis (RING) test 5 heeft veel voordelen ten opzichte van meer op grote schaal gebruikt protocollen, die een reproduceerbaar, gevoelig, en hoge doorvoer benadering van volwassenen bewegingsapparaat en negatieve geotaxis b kwantificerenehaviors. In de RING-test kunnen verschillende genotypen of behandelingen met medicijnen worden getest gelijktijdig gebruik van grote aantal dieren, met de high-throughput benadering waardoor het meer vatbaar voor screening experimenten.
Protocol
A. larven kruipen Assay
1. Larven Collectie
- Opzetten van een 8 ounce fles vliegen (10-15 mannen + 10-15 vrouwtjes).
- Laten we vliegen eitjes leggen gedurende 24 uur, dan is duidelijk fles vliegen. (Breng de volwassenen in een nieuwe fles en indien nodig herhalen).
- Incubeer fles voor 3-4 dagen of tot de derde instar larven zichtbaar zijn.
- Voeg 50 - 100 ml van 20% sucrose aan de fles met larven en laat zitten voor 20 minuten. Larven zal drijven naar de top.
- Verzamel larven met behulp van een 25 ml serologische pipet met de punt afgesneden, en plaats in een maas mand.
- Was larven in de ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Drosophila gedrag wordt strak gereguleerd door genetische en omgevingsfactoren. Wij, en anderen, in het verleden gebruikte de testen hier beschreven om gegevens te verzamelen om genen die verband houden met het gedrag en de menselijke neurodegeneratieve ziekten gemodelleerd in Drosophila 5-19 vliegen te onderzoeken. Voor de kruipende test, zorgvuldige selectie van de 3 e instar larven is een cruciale stap. Als de behandeling met een geneesmiddel, duurt 10-15 minuten (of meer afhan.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
Wij hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
We willen Astha Maltare bedanken voor het genereren van de larven kruipen gegevens. We willen graag Dr Nicholas Lanson Jr bedanken voor het geven van zijn commentaar op het manuscript. Dit werk werd ondersteund door het Robert Packard Center voor ALS aan de Johns Hopkins (tot UBP) en de Amyotrofische Lateraal Sclerose Vereniging (UBP) en R01MH083689 van de National Institutes of Mental Health (CDN).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Naam van het serum | Vennootschap | Catalogusnummer | |
| Sucrose | Fisher Scientific | S5-500 | |
| Agarose | Invitrogen | 16500-500 | |
| 6 oz Drosophila fles | Genesee Wetenschappelijk | 32-130 | |
| Paint Brush (# 1) | Ted Pella, Inc | 11859 | |
| Fly voedingsbestanddelen | |||
| Maïsmeel | Fisher Scientific | NC9109741 | |
| Agar-agar | Genesee Wetenschappelijk | 66-104 | |
| Melasse | Fisher Scientific | NC9349176 | |
| Propionzuur | Acros | 14930-0010 | |
| Tegosept | Top | 20-258 | |
| Ethanol | VisserWetenschappelijk | BP2818-4 | |
| Gist | Genesee Wetenschappelijk | 62-107 |
Referenties
- Pandey, U. B., Nichols, C. D. Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery. Pharmacol. Rev. 63 (2), 411-436 (2011).
- Feany, M. B., Bender, W. W. A Drosophila model of Parkinson's disease. Nature Mar.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
