De oprichting van een orthotope blaas tumor model om anti-tumor effecten van intravesicaal geleverd Sarna en monitoring groei van de tumor door middel van ultrageluid en bioluminescente beeldvorming te evalueren.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Een orthotope Blaas Tumor Model en de evaluatie van Intravesicale Sarna behandeling
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
We presenteren een nieuwe methode voor de behandeling van blaaskanker met intravesicaal afgeleverd kleine activerende RNA (Särna) in een orthotope xenograft muis blaas tumor model. De muis model wordt vastgesteld door urethrale catheterisatie onder inhalatie-narcose. Chemische brandwonden wordt vervolgens naar de blaas slijmvlies met behulp van intravesicale zilvernitraatoplossing om de blaas te glycosaminoglycaan laag verstoren en maakt het mogelijk cellen te hechten aan. Na enkele wasbeurten met steriel water, menselijke blaaskanker KU-7-luc2-GFP cellen worden bijgebracht door de katheter in de blaas te wonen gedurende 2 uur. Na de groei van blaastumoren wordt bevestigd en gecontroleerd door in vivo blaas echografie en bioluminescente beeldvorming. De tumoren worden dan intravesicaal behandeld met Särna geformuleerd in lipide nanodeeltjes (LNPs). Groei van de tumor wordt gecontroleerd met echografie en bioluminescentie. Alle stappen van deze procedure worden aangetoond in de bijgevoegde video.
Protocol
Procedures waarbij proefdieren zijn goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) aan de Universiteit van Californië, San Francisco.
1. Celpreparaat
- De menselijke blaaskanker cellijn KU-7-luc2-GFP (Remklauw Life Sciences, Hopkinton, MA) gekweekt in RPMI-1640 medium aangevuld met 10% foetaal runderserum en 50 pg / ml gentamicine.
- Cultures op 37 ° C, 5% CO2 met medium verandert elke twee tot drie dagen.
- De cellen werden geoogst door trypsine spijsvertering en geteld met behulp van een hemocytometer. Een celsuspensie van 2 x 10 6 cellen in 50 ul werd bereid in met....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
We presenteren een protocol voor de oprichting van een muis orthotope xenograft blaas tumor model, gevolgd door intravesicale behandeling van de tumoren met LNP geformuleerd Sarna dat de promotor van p21 cip1/waf1 (p21) richt zich voor transcriptionele activering. 2, 3 De resulterende tumoren kan bevestigd en bewaakt met bioluminescente beeldvorming en blaas echografie. Orthotope modellen kunnen beter intraperitoneaal, subcutaan of intraveneus modellen door een milieu van urine en urotheel die bete.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
LCL is een benoemde uitvinder op octrooi-aanvragen met betrekking tot Sarna die zijn ingediend door de Universiteit van Californië in San Francisco en in licentie gegeven aan Alnylam Pharmaceuticals.
Dankbetuigingen
Dit onderzoek wordt gefinancierd door de AACR Henry Shepard Bladder Cancer Research Grant (09-60-30-LI).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Naam van het serum | Vennootschap | Catalogusnummer | Opmerkingen (optioneel) |
| KU-7-luc-GFP-cellen | Caliper | 128091 | |
| thymus naakt muizen (nu / nu) | Simonsen Laboratories | 6-7 weken oud | Sim: (NCR) nu / nu fisol |
| Ultrasound-eenheid | Visualsonics | Vevo 770 | RMV-704 probe |
| Bioluminescentie-eenheid | Caliper | IVIS Spectrum | |
| Exel safelet katheter | Visser | 14-841-21 | 24G x ¾ " |
| Zilvernitraat | Sigma | S8157 | |
| Hamilton spuit | Hamilton company | 80301 | |
| LNP-Sarna | Alnylam Pharmaceuticals |
Tabel 1. Specifieke reagentia en materialen.
Referenties
- Semple, S. C. Rational design of cationic lipids for siRNA delivery. Nature. 28, 172-176 (2010).
- Li, L. C. Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United St....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
