Terugkerende Herpetische Stroma Keratitis in Muizen, een model voor het bestuderen van de Mens HSK

Samenvatting

De meeste studies van de herpes ziekte van het hoornvlies gebruik maken van een primaire infectie model. Echter, primaire infectie met HSV-1 gewoonlijk niet tot menselijke ziekte. Hier beschrijven we een terugkerende herpes model van ziekte van het hoornvlies, die beter nabootst menselijke ziekte.

Samenvatting

Herpetische oogziekte, genoemd herpetische keratitis stromale (HSK), is een potentieel verblindende infectie van de cornea die resulteert in meer dan 300.000 klinische bezoeken per jaar voor behandeling. Tussen 1 en 2 procent van de patiënten met klinische ziekte ervaart verlies van het gezichtsvermogen van de geïnfecteerde hoornvlies. De overgrote meerderheid van deze gevallen zijn het resultaat van reactivering van een latente infectie door herpes simplex virus type I en niet door acute ziekte. Interessant is dat de acute infectie is de meest gebruikte model om deze ziekte te bestuderen. Er werd echter van mening dat een steeds terugkerend model van HSK zou meer een afspiegeling is van wat er gebeurt tijdens de klinische ziekte. De recurrente diermodellen voor HSK hebben gebruikt zowel konijnen en muizen. Het voordeel van konijnen is dat ze ervaren reactivering van latentie bij gebrek aan een bekende stimulus. Dat gezegd hebbende, is het moeilijk om te verkennen de rol die vele immunologische factoren spelen in terugkerende HSK, omdat het konijn model heeft niet de Immunsche en genetische hulpbronnen die de muis heeft. We kozen voor het muismodel voor terugkerende HSK gebruiken omdat het heeft het voordeel dat er veel middelen beschikbaar en ook wij weten wanneer reactivering zal optreden omdat reactivering wordt veroorzaakt door blootstelling aan UV-B licht. Tot nu toe heeft dit model mag deze laboratoria te gebruiken om een ​​aantal immunologische factoren die belangrijk zijn voor deze ziekte te definiëren. Het is ook toegestaan ​​om zowel therapeutische als werkzaamheid van het vaccin te testen.

Protocol

Animal Care Note: analgetica niet gebruikt in dit model zijn anti-inflammatoire en zou dus het model ongeldig.

1. Bereiding van Virus

1. HSV-1 groeien op Vero-cellen (80% confluent) met een verdunning start van 0,01 multipliciteit van infectie (in T-150 kolf ongeveer 5 x 10 ⁵ plaque vormende eenheden) gedurende 3-4 dagen totdat alle cellen afgerond-up en zijn gemakkelijk verdreven door het raken van de kolf.
2. Verwijder media steriele centrifugebuizen en centrifugeer in Sorvall Legend RT bij 4 ° C en 3500 rpm gedurende 15 minuten. Na verwijdering supernatant (zie 1.3), resuspendeer grote pellet van elk 50 ml buis m....

Discussie

De recurrente model van herpetische stromale keratitis (HSK) hier beschreven staat stelt de onderzoeker voor de menselijke HSK studeren in een model dat meer in overeenstemming is met hetgeen wordt waargenomen tijdens ziekte bij de mens. Dus het model sterktes die ziekte zich in het kader van een immuunsysteem dat reeds door gestimuleerd tijdens primaire ziekte. Omdat deze muizen al een immuunrespons tegen HSV-1, de factoren die de immuunrespons opnieuw waarschijnlijk verschillend van die oorspronkelijk gegenereerd. Daa.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
DMEM	Sigma	D5796
Foetaal runderserum	Atlanta Biologicals	S11150
Humeen serum	Sigma	S7023
L-Glutamine	Cellgro	25-005-C1
Pen/Strep	Sigma	P4333
Fungizone	Invitrogen	15290018
Centrifuge	Sorvall	Legend RT
Centrifuge	Beckman	52-21
Transilluminator	UVP	95-0452-02
Sonicator	Branson	Sonifier 450
Oak Ridge-buizen	Nalgene	Z 720410
Kolfen- 7150	Corning	430823
Platen- 12 wells	Corning	CLS 3513
Platen- 48 wells	Corning	CLS 3548
Steriele conische buizen- 30 ml	Corning	CLS 430828
Steriele wattenstaafjes	Fisher	23-400-125
30G naalden	Becton-Dickinson	305106
25G naalden	BD	305122
10 ml spuit	BD	309602
10 ml spuit	BD	309604