Intravasculaire Perfusie van Carbon Black Ink Hiermee Betrouwbare Visualisatie van hersenvaten

Samenvatting

Analyse van knaagdier cerebrovasculaire anatomie speelt een belangrijke rol in experimenteel onderzoek beroerte. In deze context heeft intravasculaire perfusie met gekleurde latex beschouwd als een standaard hulpmiddel voor meerdere jaren. Deze techniek houdt specifieke technische beperkingen, die de reproduceerbaarheid ondermijnen. Hier beschrijven we een eenvoudige methode om hersenvaten op reproduceerbare wijze te visualiseren. Injectie van een mengsel van twee commercieel verkrijgbare carbon black inkten via de linker ventrikel myocardiale resulteert in adequate vulling van hersenvaten met hoog contrast visualisatie. We hebben met succes gebruikt een techniek die anastomose punten tussen cerebrale vasculaire gebieden van muizen met verschillende genetische achtergronden identificeren. We uiteindelijk aangeven dat deze nieuwe en eenvoudige methode voor kleuring vaartuig kan worden gecombineerd met trifenyltetrazoliumchloride (TTC) kleuring - veel gevallen gebruik te observeren en analyseren infarct volumes in muizen.

Samenvatting

De anatomische structuur van hersenvaten is een belangrijke determinant voor de hersenen hemodynamiek, alsmede de ernst van verwondingen na ischemische beledigingen. De cerebrale vasculatuur reageert dynamisch verschillende pathofysiologische toestanden en vertoont aanzienlijke verschillen tussen stammen en onder genetische manipulaties. In wezen is een betrouwbare techniek voor intracraniale vaartuig kleuring essentieel om de pathogenese van ischemische beroerte bestuderen. Tot voor kort werd een reeks verschillende technieken toegepast om de cerebrale bloedvaten waaronder injectie van lage viscositeit hars, Araldite F, gelatine gemengd met verschillende kleurstoffen ¹ (dus karmijnrood, India inkt) of latex met ² of ³ zonder roet. Visualiseren Perfusie van witte latex verbinding via de aorta ascendens werd voor het eerst gemeld door Coyle en Jokelainen ^3. Maeda et al.. ² zijn aangepast het protocol door het toevoegen van carbon zwarte inkt aan de latex compound voor een beter contrast visualisatie van de vaten na zoutoplossing perfusie van de hersenen. Echter inefficiënt perfusie en onvoldoende vulling van de vaten dikwijls door de hoge viscositeit van de latex verbinding ⁴ ervaren. Daarom hebben we beschreven een eenvoudige en kosteneffectieve techniek waarbij een mengsel van twee commercieel verkrijgbare carbon black inkt (CB1 en CB2) de cerebrale vasculatuur op reproduceerbare wijze ⁵ visualiseren. We hebben aangetoond dat perfusie met CB1 + CB2 in muizen leidt tot vervuiling van de hersenvaten aanzienlijk kleinere met een hogere dichtheid in vergelijking met latex perfusie ^5. Hier beschrijven we ons protocol de anastomose punten tussen de voorste (ACA) en middelste cerebrale slagaders (MCA) naar vat variaties in muizen met verschillende genetische achtergrond te bestuderen identificeren. Tenslotte tonen we de uitvoerbaarheid van onze techniek in een tijdelijke focale cerebrale ischemie bij muizen door het combineren CB1 +CB2-gemedieerde schip kleuring met TTC kleuring in verschillende graden van ischemische letsels.

Protocol

1. Dieren

1. Experimenten werden uitgevoerd volgens de NIH richtlijnen voor de zorg en het gebruik van proefdieren en goedgekeurd door de lokale autoriteiten. Voor alle experimenten C57Bl6 / J wild type muizen ApolipoproteinE ^{- / -} (ApoE KO) muizen en SV129 (12-16 weken oud, 26-30 g lichaamsgewicht, 5-6 dieren per proefgroep) gebruikt.

2. Kleuring van hersenvaten met gekleurde latex

1. Een mengsel van 25 ul carbon zwarte inkt (Herlitz, Duitsland) met 0,5 ml latex verbinding (Pebeo, Frankrijk) bij een 1:20 verhouding in een EP buis en opwarmen van het mengsel bij 37 ° C in een waterbad. Verzamel het mengsel....

Resultaten

Het protocol hier beschreven overwint de technische beperkingen van conventionele latex gebaseerde visualisatie van knaagdieren cerebrale vaatstelsel. Figuur 1A toont aan dat volgende perfusie van de gekleurde latex, alleen de grote schepen op het ventrale oppervlak zijn gekleurd, waardoor de gehele dorsale oppervlak ongekleurd. Het resultaat is ook zeer variabel. Slechts een dier uit zes shows gedeeltelijke kleuring van de ACA en de MCA zichtbaar op het dorsale oppervlak van de hersenen (data niet geto.......

Discussie

Perfusie van CB1 + CB2 door handmatige injectie kan worden uitgevoerd met succes door zonder intensieve opleiding als het niet gaat om een specifieke apparaat beperken tot bepaalde druk ^2,3 impliceren. De heterogeniteit van de perfusie resultaten in ons protocol is ook te verwaarlozen. Slechts 1 dier van de 16 niet-ischemische dieren en 3 van de 20 ischemische dieren hebben aangetoond onvolledige perfusie. In deze gevallen, integratie van bellen tijdens zoutoplossing perfusie leidt tot occlusie van de schepen.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Naam van het reagens	Bedrijfsnaam	Catalogus nr.
Scribtol Schwarz (CB2)	Pelican, Duitsland	221 135
Stempelfarbe (CB1)	Herlitz PBS AG, Duitsland	10417202
Gedeo Latex	Pebeo, Frankrijk	13042B