Hier beschrijven we een Schwann-cellen (SC) migratie assay waarin SC kunnen ontwikkelen langs axonen verlenging.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Het analyseren van Murine Schwann Cell Development Samen Groeien Axonen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De ontwikkeling van de perifere zenuwen is een intrigerend proces. Neuronen sturen axonen om specifieke doelen, die bij de mens zijn vaak meer dan 100 cm afstand van de soma van het neuron innerveren. Neuronale overleving tijdens de ontwikkeling afhankelijk doel afgeleide groeifactoren maar ook op de steun van Schwann-cellen (SC). Daartoe SC ensheath axonen uit het gebied van de neuronale soma (of de overgang van centrale naar perifere zenuwstelsel) de synapsen of neuromusculaire junctie. Schwann cellen zijn derivaten van de neurale lijst en migreren als voorlopers langs nieuwe axons totdat de axon is bedekt met SC. Dit toont het belang van SC migratie voor de ontwikkeling van het perifere zenuwstelsel en onderstreept de noodzaak om dit proces te onderzoeken. Met het oog op SC ontwikkeling te analyseren, is een setup nodig die naast de SC's ook hun fysiologische substraat voor migratie, het axon omvat. Door intra-uteriene ontwikkeling (Mus musculus). Om dit te omzeilen, hebben we aangepast de superieure cervicale ganglion (SCG) explantatie techniek. Bij behandeling met zenuwgroeifactor (NGF) SCG explantaten verlengen axonen, gevolgd door SC precursoren migreren langs de axonen van de ganglion naar de periferie. Het mooie van dit systeem is dat de SC zijn afgeleid van een pool van endogene SC en dat ze migreren langs hun fysiologische axonen die steeds tegelijkertijd. Dit systeem is vooral intrigerend, want de SC ontwikkeling langs axonen kunnen worden geanalyseerd door time-lapse imaging, het openen van nieuwe mogelijkheden om inzicht te krijgen in SC migratie.
Protocol
1. Bereiding van collageengels
- Bereid een voorraad medium, dat 455 ul 10x MEM, 112 ul 7,5% NaHCO3, 50 pl glutamine en NaOH. De concentratie en de hoeveelheid NaOH afhankelijk van de rat-tail collageen preparaat (zie 1.2), het uiteindelijke volume van de voorraad medium dat 1000 pi.
- Bereid rat-tail collageen volgens Ebendal (1). Sla de collageenoplossing bij 4 ° C. Een verslechtering van de collageenoplossing kon niet worden vastgesteld. Na voorbereiding van een nieuwe partij, een schatting van de NaOH-concentratie die nodig is voor de voorraad medium (zie 1.1). Gebruik de pH-indicator van het medium voor titratie van d....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Axonale groei wordt vergemakkelijkt van SCG explantaten na behandeling met NGF (4) (film schema S1 figuur 1 schema). Dit proces is gemakkelijk zichtbaar door een omgekeerde microscoop en kan gevolgd worden door time-lapse imaging (film S2). Als een wetenschapper is nieuw voor ontleden SCG van muis embryo's adviseren wij een validatie van de techniek via een eenvoudige anti-tyrosine hydroxylase (TH) immunohistochemie. TH is een gemeenschappelijke marker voor catecholaminergische neur.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De ontwikkeling van het perifere zenuwstelsel een spannend. Wanneer de ontwikkeling is voltooid, worden axons ensheathed door SCS over de gehele lengte, die, in mensen, vaak meer dan 100 cm. Daartoe het juiste aantal vereiste SC moet worden vastgesteld tijdens de ontwikkeling en de SCS ook bewegen langs axonen zich aan de omtrek om de complete axonale dekking te garanderen. Dit geldt voor gemyelineerde maar ook voor unmeylinated axonen. In beide gevallen zijn alle axons in contact met SCS en afhankelijk van hun steun. O.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
Geen belangenconflicten verklaard.
Dankbetuigingen
We willen Urmas Arumae bedanken voor het delen van een collageen-protocol en Jutta Fey en Ursula Hinz voor een uitstekende technische bijstand. Verder willen we Christian F. Ackermann, Ulrike Engel en de Nikon Imaging Center van de Universiteit van Heidelberg en ook Joachim Kirsch bedanken voor zo vriendelijk te helpen voor de video shoting. Het werk werd deels gefinancierd door de Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB 592).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Naam van de Reagens / Materiaal | Vennootschap | Catalogus nummer | Reacties |
| 10x MEM | Gibco | 21430 | |
| Natriumbicarbonaat (7,5%) | Gibco | 25080 | |
| Glutamine | Gibco | 25030 | |
| NaOH | Merck | 109137 | |
| NGF | Roche | 1058231 | R & D # 556-NG-100 |
| Neurobasal Medium | Gibco | 21103 | |
| B27 supplement | Gibco | 17504 | |
| antibiotica | Gibco | 15640 | |
| d-PBS | Gibco | 14040 | |
| insect naalden | FST | 26.002-20 | |
| injectienaald | Braun | BD # 300013 | |
| 8 goed kamer slide | Lab tek | 177402 |
Referenties
- Ebendal, T. Use of collagen gels to bioassay nerve growth factor activity. Rush, R. A. IBRO Handh, John Wiley & Sons Ltd. (1989).
- Heermann, S., SchmÃcker, J., Hinz, U., Rickmann, M., Unterbarnscheidt, T., Schwab, M. H., Krieglstein, K. Neuregulin 1 type III/ErbB signaling....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
