Een eenvoudige methode van de Muis van Lung intubatie

Samenvatting

Dit artikel beschrijft een striaghforward en efficiënte methode van intubatie muizen voor longfunctie metingen of pulmonale instillatie, die het mogelijk maakt de muizen om te herstellen en studeerde worden op latere tijdstippen. Deze procedure houdt een goedkope optische vezel lichtbron die direct verlicht de luchtpijp.

Samenvatting

Een eenvoudige procedure aan muizen gedurende longfunctie metingen intuberen zouden verscheidene voordelen in longitudinale studies waar weinig of dure dier. Een van de redenen dat dit niet meer routinematig gedaan is dat het relatief moeilijk, hoewel er een aantal gepubliceerde onderzoeken die manieren om dit te bereiken beschrijven. In dit artikel tonen een procedure die een van de belangrijkste hindernissen bij dit intubatie dat het visualiseren van de trachea gedurende de gehele tijd van intubatie elimineert. De methode gebruikt een 0,5 mm vezeloptische lichtbron die dient als een introducer de intubatiecanule direct in de muis trachea. We tonen aan dat het mogelijk is met deze procedure long mechanica in individuele muizen meten over een tijdsverloop van ten minste verscheidene weken. De techniek kan worden ingesteld met relatief weinig kosten en expertise, en het kan routinematig worden bereikt met relatief weinig training. Dit moet MAKE het mogelijk voor elk laboratorium om routinematig uitvoeren van deze intubatie, waardoor longitudinale studies in individuele muizen, om zo het aantal benodigde muizen en het verhogen van de statistische power met behulp van elke muis als zijn eigen controle.

Inleiding

In 1999, Brown et al.. Artikel gepubliceerd beschrijft een werkwijze voor intubatie van de muizenlong ^1. Een dergelijke techniek heeft veel nut in het doen van herhaalde longfunctie of broncho-alveolaire lavage in individuele muizen in longitudinale studies ^2. Sinds die originele papieren, zijn er verschillende andere papieren die verschillende benaderingen beschreven om de muis intubatie ^3-9. Terwijl al deze methoden kunnen met succes worden gebruikt, ze vereisen doorgaans aanzienlijke training of kosten. Een van de belangrijkste problemen met dergelijke intubatie is dat als de intubatiecanule benaderingen van de luchtpijp in afwachting inbrengen nadert, de canule zelf blokkeert het licht en daarmee de visualisatie van waar het moet gaan. Zo is de invoeging wordt blind op de meest kritieke tijd. In dit artikel laten we zien hoe eenvoudig en goedkoop deze visualisatie probleem te elimineren, waardoor wordt gewaarborgd succesvolle intubatie met relatief weinig training ofbieden.

Protocol

1. Voorbereiding van de procedure

Men moet eerst het verkrijgen van en de voorbereiding van de volgende items:

1. De canule. Voor intubatie van 20-35 g muizen, gebruiken we een 1 of 1,5 cm lang, 20 gauge IV katheter (BD Insylte, Sparks, MD of Jelco Optiva, Carlsbad, CA). Een nieuwe steriele katheter kan worden gebruikt voor elke muis, maar catheters kan ook worden hergebruikt na sterilisatie door onderdompeling in 70% ethanol nacht. Hoewel noch de keelholte of de luchtpijp van de muis steriel goede hygiëne, inclusief het gebruik van steriele handschoenen en instrumenten worden gevolgd.
2. De glasvezelkabel. We gebruiken ≈ 70 cm van 0,5 mm optische kabel Edmund Optics, maar de lengte is niet kritisch. Het is belangrijk om ervoor te zorgen dat de vezel heeft de rand afgevlakte, want na het snijden van de kabel op lengte met een scheermes, de rand blijft relatief scherpe, en het doet veel moeite niet te doorboren de tracheale wand. Echter iis heel gemakkelijk om dit rand glad door de aan vezels ongeveer 2 cm van het einde en dan het maken van kleine cirkels voor een paar seconden met de randen van de punt aanraken van een stuk van 1.000 korrel schuurpapier (zie demonstratie in de video en figuur 1 van Macdonald, et al.. ^10). Het andere uiteinde wordt via een rubber stop. Dit wordt het gemakkelijkst bereikt door eerst een 18-gauge naald door de stop, het plaatsen van de optische vezel door de naald boring vervolgens de naald. De rubberen stop is verbonden met een 150 watt halogeen lichtbron (bijvoorbeeld NCL-150, USA Volpi of andere lichtbron of zelfs minder dan 150 watt). Het is belangrijk om ervoor te zorgen om een ​​afdichting van silicone rubber (of ander hittebestendig materiaal) te gebruiken, omdat de gewone rubber of kurk kan branden wanneer zich zo dicht bij de hete lichtbron.

2. Het uitvoeren van de intubatie

1. Zie figuren 1 en 2. Steek glasvezelkabel through een kort stuk van siliconen rubber slangen (≈ 0,8 mm ID x 4 mm OD, Cole-Palmer, EW-96410-13). Bind deze rubberen buis vrij strakke, terwijl u toch de glasvezelkabel aan te passen. Het plaatsen van de siliconenslang stevig in de Luer einde van de canule stelt de glasvezelkabel de positie in de canule. De positie van de glasvezelkabel zodat deze zich door de canule ≈ 4 mm voor de canule tip.
2. Plaats de verdoofde muis op een verticale steun, opgehangen aan de bovenste snijtanden (figuur 3). De meeste onderzoekers vinden van de beste visualisatie met de ventrale zijde van de muis naar zichzelf. Heel voorzichtig trek de tong en houd met duim en wijsvinger. De middelvinger wordt tussen de hals en plastic steun. Tractie op de tong met de wijsvinger en duim wordt gebruikt om de mond open te doen, en om de intubatie pad recht te maken, wordt de hoek van de kop aangepast met de middelvinger achter de nekfiguur 3.
3. Met de glasvezelkabel als lichtbron en introducer, schuiven door de gevisualiseerde stembanden. Indien de draden niet zichtbaar zijn, zachtjes harder te trekken op de tong met behulp van de middelvinger als ondersteuning. Wanneer geplaatst, verder te gaan de canule ≈ 5 mm. Dan, die zeer voorzichtig dat u de canule verplaatsen, trekt de glasvezelkabel. Liggen de muis en beveiligen de canule met een stuk tape en ondersteunen de canule hub op een stuk plasticine (klei), zoals weergegeven in figuur 4.
4. De procedure in stap 3 niet gemakkelijk geleerd of zelfs worden aangetoond, aangezien het een solo operatie. Echter, door subtiele aanpassingen van de tractie op de tong en de steun achter het hoofd bijna alle die proberen dit snel vinden van de juiste manier om de muis te positioneren om de stembanden te visualiseren.

Resultaten

Een evaluatie van de werkwijze, we vier 20 weken oude mannelijke BALB / c muizen gebruikt met een gemiddeld gewicht (± SEM) van 27,7 ± 0,40 g. Ze werden onderzocht op vijf opeenvolgende weken, waarbij de long werd gemeten met behulp van een systeem zoals eerder beschreven ^11. Elke muis werd verdoofd met ketamine (100 ug / g BW) en xylazine (15 ug / g BW) in saline via IP injectie. Ze werden daarna geïntubeerd zoals hierboven beschreven. Als er enige twijfel of de canule in de luchtpijp en de slokdarm niet kan...

Discussie

De hier beschreven procedure heeft verschillende voordelen. Eerst de inrichting is eenvoudig en relatief goedkoop .. De fabricage van de inrichting vereist geen speciaal gereedschap of dure apparatuur. Het gebruik van een katheter introduceert die ook de lichtbron betekent dat men nooit uit het oog van de tracheale opening als de inbrenger de tracheale opening nadert verliest. Het gebruik van een 0,5 mm introducer dient ook te minimaliseren trauma die zich kunnen voordoen met een initiële insertie van een grotere canule...

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Materiaal	Vennootschap	Catalogus #	Commentaar
Intubatiecanule	BD Insylte, Sparks, MD of Jelco Optiva, Carlsbad, CA		1-inch-lange, 20-gauge intraveneuze (IV) katheter
Glasvezelkabel	Edmund Optics, Barrington, NJ	# NT02-542	Ongeveer 2-ft lengte van 0,5-mm optische vezel (Communicatie grade plastic vezel). De rand van het vezeluiteinde die wordt ingebracht in de luchtpijp moet voorzichtig worden afgerond door de aan vezels ≈ 2 cm van het einde en vervolgens het maken van kleine cirkels tijdens het slepen van de tip voor een paar seconden op 1000-korrel Emory papier.
Lichtbron	Volpi	NCL-150	Hoewel we gebruik maken van een 150-W halogeen lichtbron, een gelijkwaardige lichtbron, zelfs met een veel lager wattageworden gebruikt.
Silicone rubber stop			A # 1 siliconen rubberen stop past bij de lichtbron die in deze demonstratie. Verschillende lichtbronnen kan een ander formaat.
Kleine siliconen rubber slang	Cole-Palmer	EW-96410-13	Een ≈ 1,5 cm stuk siliconenrubber buis (0,8 binnendiameter, 4 mm buitendiameter)
Angled statief			Ours is constucted van plexiglas, maar elk materiaal waarvan een draad of kabel kan worden aangebracht op de muis houden in een bijna verticale hoek kan worden gebruikt.