Biocompatibele pH responsieve sol-gel nanosensors kan in poly (melkzuur-co-glycolzuur) (PLGA) electrospun steigers worden opgenomen. De geproduceerde zelfrapportage steigers kunnen worden gebruikt voor in situ bewaking van micromilieu omstandigheden tijdens het kweken van cellen op de scaffold. Dit is gunstig als de 3D cellulaire construct kan in real-time zonder de proef.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Zelfrapportage Stellingen voor 3-dimensionale Cultuur van de Cel
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Kweken van cellen in 3D geschikte steigers wordt gedacht dat de in vivo micro beter nabootsen en meer cel-cel interacties. De resulterende 3D cellulaire construct kan vaak relevanter voor onderzoek naar de moleculaire gebeurtenissen en cel-cel interacties dan vergelijkbare experimenten onderzocht 2D. Om een effectieve 3D culturen levensvatbaarheid hoge cel gedurende het skelet creëren kweekomstandigheden zoals zuurstof en pH moeten zorgvuldig worden gecontroleerd als hellingen analyt concentratie bestaan binnen het 3D construct. Hier beschrijven we de methoden van de voorbereiding biocompatibel pH responsieve sol-gel nanosensoren en worden geïntegreerd in poly (melkzuur-co-glycolzuur) (PLGA) electrospun steigers samen met hun verdere voorbereiding op de cultuur van zoogdiercellen. De pH responsieve steigers kunnen worden gebruikt als instrumenten om microenvironmental pH bepalen binnen een 3D cellulaire construct. Verder hebben we uitvoerig de levering van pH responsieve nanosensors de intracellulaire omgeving van zoogdiercellen waarvan de groei werd ondersteund door electrospun PLGA steigers. De cytoplasmatische locatie van de pH responsieve nanosensors kan worden gebruikt om de intracellulaire pH (pHi) volgen tijdens lopende experimenten.
Inleiding
Een belangrijke strategie weefselengineering is het gebruik van biocompatibele materialen steigers morfologie die lijkt op het weefsel dat het zal vervangen en kan ook ondersteuning van de groei en functie 1,2 cel fabriceren. De steiger verschaft mechanische ondersteuning doordat celhechting en-proliferatie toch laat celmigratie gedurende de tussenruimten van een 3D cellulaire construct. De steiger moet ook zorgen voor het massatransport van cel voedingsstoffen en verwijdering van metabolische afvalproducten 3 niet remmen.
Electrospinning is ontstaan als een veelbelovende methode voor de vervaardiging van polymere ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Overzicht
Deel 1 beschrijft de bereiding van pH-responsieve nanosensoren en karakterisering van nanosensor respons op pH via fluorescentie spectrometrie en de grootte met SEM.
Deel 2 beschrijft de bereiding van electrospun polymere ondergronden en karakterisering van de morfologie en de grootte met SEM. Hoofdstuk 2 beschrijft ook de bereiding van zelfrapportage steigers die electrospun steigers met de opname van de pH-responsieve nanosensors zijn. De resulterende zelfrapportage steigers worden gekenmerkt door SEM te bepalen of een morfologische veranderingen in de electrospun vezels heeft plaatsgevonden. De fluor....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De grootteverdeling van de bereide pH responsieve nanosensors werd gekarakteriseerd met SEM, waarbij de populatie van nanosensors afgebeeld werden gemeten en nanometer afmetingen in het bereik van 240-470 nm (Figuur 1A). Het bereiken van een smalle en redelijk kleine diameter is met behulp van de Stöber methode om nanodeeltjes te bereiden. Gebleken is dat met een basische pH omgeving tijdens de synthese van nanodeeltjes dwz nanodeeltjes bereid met de Stöber methode maakt een goede beheersing va.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Tissue engineering streeft biologische substituten te maken die gebruikt kan worden zowel in vivo als in vitro modellen weefsel en weefsel vervangingstherapie tot reparatie, vervanging, handhaven of verbeteren van de functie van een bepaald weefsel of orgaan. Synthetische substituten zijn gebruikt voor vele jaren vervangen of steun herstel van weefsels, maar deze vaak niet vanwege slechte integratie met gastheerweefsel en / of infectie, wat uiteindelijk leidt tot afstoting of verder revisiechirurgie. H.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.
Dankbetuigingen
De financiering van de BBSRC wordt vriendelijk erkend (licentienummer BB H011293 / 1).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Ethanol | Fisher | 32221 | |
| Anhydrous dimethylformamide (DMF) | Sigma | 270547 | |
| Ammonium hydroxide 50% (v/v) aqueous solution | Alfa Aesar | 35574 | verdund tot 30% (v/v) met zuiver water |
| TEOS | Sigma | 13190-3 | |
| 3-Aminopropyltriethoxysilane (APTES) | Sigma | A3648 | |
| 5-(and-6)-carboxyfluorescein, succinimidyl ester (FAM-SE) | Invitrogen | C1311 | |
| 6-carboxytetramethylrhodamine, succinimidyl ester (TAMRA-SE) | Invitrogen | C1171 | |
| Natriumfosfaat monobasisch (0,2 M) | Sigma Aldrich | S-9638 | |
| Natriumfosfaat dibasisch (0,2 M) | Sigma Aldrich | S-0876 | |
| NaOH | Sigma Aldrich | S8045 | |
| Trypsin/EDTA | Sigma Aldrich | T4174 | |
| Penicillin/Streptomycin | Sigma Aldrich | P0781 | |
| PBS | Sigma Aldrich | D8537 | |
| DMEM | Sigma Aldrich | D6046 | |
| FBS | Source Bioscience | Batch-213-101992 | |
| L-Glutamine | Sigma Aldrich | G7513 | |
| Lipofectamine 2000 | Invitrogen | 11668-019 | |
| Optimem | Invitrogen | 11058-021 | |
| LysoTracker Red | Invitrogen | L-7528 | |
| Draq5 | Biostatus Ltd | DR50050 | |
| Stiekstofgas | BOC | ||
| DCM | Sigma Aldrich | 320269 | |
| TFA | Sigma Aldrich | T6508 | |
| Confocale microscoop | Leica TCS-SP | uitgerust met argon- en kryptonlasers en een 63X 0.9NA water-immersielens | |
| UV-licht | UVLS28 UVP, USA | ||
| Rolplaat | SB161-3 Jencons-PLS | ||
| pH-meter | Jenway model 3510 | ||
| Rotorevap | Buchi Rotary Evaporator R200 | ||
| Centrifuge (nanosensoren) | Hermle Z300 | ||
| Centrifuge (cellcultuur) | Thermo Scientific Heraeus Biofuge Primo | ||
| Vortex | Whirlimixer Fisherbrand | ||
| Ultrasoonapparaat | FB11021 Fisherbrand | ||
| Aluminiumplaat | Nottingham University | ||
| 35mm cellcultuurplaat | Iwaki | 3000035 | |
| 10 ml-spuit | Becton Dickenson | ||
| 3T3-fibroblastcellen | European Collection of Cell Cultures | ||
| PLGA | Lakeshore Biomaterials | 7525 DLG 7E | |
| Pyridiniumformiaat | Sigma Aldrich | P8535 | |
| Trypanblauw | Sigma Aldrich | T8154 | |
| Natriumfosfaat monobasisch | Sigma Aldrich | S9638 | |
| Natriumfosfaat dibasisch | Sigma Aldrich | S5136 | |
| HCl | Sigma Aldrich | 320331 |
Referenties
- Takimoto, Y., Dixit, V., Arthur, M., Gitnick, G. De novo liver tissue formation in rats using a novel collagen-polypropylene scaffold. Cell Transplantation. 12 (4), 413-421 (2003).
- Sales, V. L., Engelmayr, G. C., et al.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
