Methodenartikel

Multiplexed Fluorescent Microarray voor menselijk speeksel bij Eiwit analyse met behulp van Polymer microsferen en Glasvezel-Bundles

DOI:

10.3791/50726

⸱

10 oktober 2013

 ,  ,  ,  , 
1Department of Chemistry, Tufts University, 2Department of Analytical Chemistry, Complutense University (Spain), 3Department of Electrical and Computer Engineering, Tufts University

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

We beschrijven een werkwijze voor het profileren speekseleiwitten met multiplex-microsfeer gebaseerde antilichaam arrays. Monoklonale antilichamen werden covalent gebonden aan fluorescerende kleurstof gecodeerd 4,5 urn polymere microsferen middels carbodiimide chemie. De gewijzigde microsferen werden afgezet in glasvezel-microwells eiwit niveaus in het speeksel te meten met behulp van fluorescentie sandwich immunoassays.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hierin beschrijven we een protocol voor het gelijktijdig meten van zes eiwitten in het speeksel met een vezeloptische-microsfeer gebaseerde antilichaam array. De immuno-array-technologie die combineert de voordelen van op microsfeer gebaseerde suspensie matrix productie met gebruik van fluorescentiemicroscopie. Zoals beschreven in de video-protocol, werden commercieel verkrijgbaar 4,5 urn polymeermicrosferen gecodeerd in zeven verschillende soorten, onderscheiden door de concentratie van twee fluorescente kleurstoffen fysiek opgesloten in de microsferen. De gecodeerde microsferen die oppervlak carboxylgroepen werden gewijzigd met monoklonale antilichamen capture via EDC / NHS koppeling chemie. Om het eiwit microarray assembleren, de verschillende soorten van gecodeerde en gefunctionaliseerde microbolletjes werden gemengd en willekeurig gestort in 4,5 urn microputjes, die chemisch werden geëtst op het proximale einde van een vezeloptische bundel. De vezeloptische bundel werd gebruikt als zowel een drager en voor het afbeelden van de microspheres. Afgewerkt, werd de microarray gebruikt om eiwitten te vangen in het speeksel supernatant verzameld uit de kliniek. De detectie is gebaseerd op een sandwich immunoassay met een mengsel van gebiotinyleerde detectie antilichamen voor verschillende analyten met een streptavidine-geconjugeerde fluorescente probe, R-fycoerythrine. De microarray werd afgebeeld door fluorescentiemicroscopie in drie verschillende kanalen, twee voor microsfeer registratie en een voor de test signalen. De fluorescentie microfoto's werden vervolgens gedecodeerd en met een zelfgemaakte algoritme in MATLAB geanalyseerd.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sinds de eerste microarray gemeld door Mark Schena en collega's in het midden van de jaren 1990, heeft deze krachtige tool is gebruikt op vele terreinen van biologisch onderzoek 1. Antilichaam microarrays kan tegelijkertijd detecteren van meerdere eiwitten in diagnostische fluïda, zoals bloed, hebben belangrijke toepassingen in de klinische diagnostiek en biomarker screening 2-10. Speeksel, die veel van dezelfde analyten zoals bloed, wordt beschouwd als een beter alternatief voor bloed doordat speekselinzameling veilig, niet-invasieve, en kan door minimaal geschoold medisch personeel 11-13 worden uitgevoerd. Momenteel wordt gemultiplexte eiwitanalyse met speeksel door verscheidene belangrijke factoren, zoals de lage concentratie van doelanalyt 14 en breed concentratiegebied van verschillende biomarkers 15.

.

Hierin tonen we de analyse van zes eiwit: humane vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF), interferon-gamma geïnduceerde proteïne 10 (IP-10), interleukine-8 (IL-8), epidermale groeifactor (EGF), matrix metallopeptidase 9 (MMP-9) en interleukine-1 bèta (IL-1β) . De prestaties van de werkwijze werd aanvankelijk gecontroleerd met standaardoplossingen vormen analyt recombinante eiwitten en blokkeerbuffer. Real speeksel monsters verzameld van patiënten met verschillende chronische aandoeningen van de luchtwegen en gezonde controles werden ook getest met bevredigende prestaties. Het protocol moet van toepassing zijn op andere eiwit analyten en andere-microbolletjes gebaseerde testen zijn. Dit platform biedt aanzienlijke voordelen op het gebied van analytische chemie zoals maakt een snelle, nauwkeurige en reproduceerbare gelijktijdige analyse van lage concentraties van verscheidene eiwitten met een breed dynamisch bereik, minimale niet-specifieke interacties, verminderd monster en lage kosten in vergelijking met een analoog Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-protocol-1
Figuur 1. . Workflow voor toepassing vezeloptische microsfeer antilichaam array speeksel profilering (1) Microsferen worden intern gecodeerd met twee fluorescerende kleurstoffen, (2) de gecodeerde microbolletjes uitwendig gemodificeerd met eiwit-specifieke monoklonale antilichamen, (3) de gemultiplexte microsferen worden gemengd, en (4) willekeurig gestort in microputjes geëtst op het proximale uiteinde van een vezel-optische bundel, (5) speekseleiwitten weergegeven door microbolletjes door sandwich immunoassay en (6) gekwantificeerd middels fluorescentiemicroscopie.

1. Microsferen Encoding

  1. Weeg natrium europium (III) thenoyltrifluoroacetonate trihydraat (Eu-TTA, MW = 869,54 g / mol) in een amberkleurig glazen flesje en stelt een 200 mM voorraadoplossing in tetrahydrofuran (THF). Meng voorzichtig door pipetteren; visueel controlerende kleurstof volledig is opgelost.
  2. Weeg coumarine 30 (C30, MW = 347,41 g / mol) in een amberkleurige glazen flacon en bereiden een 12 mM voorraad oplossing in THF. Meng voorzichtig door pipetteren; visueel controleren of de kleurstof volledig is opgelost.
  3. Bereid 700 ui werkoplossing voor elke microsfeer met de voorraadoplossingen en THF eindconcentratie in tabel 1 bereikt.
  4. Zorg microsferen (10% w / v) goed gesuspendeerd door vortexen, en breng 60 pl suspensie tot een 1,5 ml microcentrifugebuis.
  5. Voeg 600 ul PBS om microsferensuspensie en meng door pipetteren 20x. Centrifugeer de buis bij 10.000 rpm gedurende 3 minuten en verwijder voorzichtig de supernatant. Herhaal dit proces nog 2x om de microsferen te wassen.
  6. Was de pellet van microsferen 3x THF met behulp van een soortgelijke werkwijze als stap 1.5.
  7. Centrifugeer de microbolletjes / THF suspensie bij 10.000 rpm gedurende 3 minuten, verwijder het supernatant en resuspendeer de pellet in 600 uiwerkoplossing vermeld in tabel 1. het mengsel in een nieuwe 1,5 ml microcentrifugebuis.
  8. Dicht de microcentrifugebuis met Parafilm en plaats deze op een shaker. Schudden bij 3.000 tpm en incubeer gedurende 24 uur, bescherming tegen licht door het bedekken van de setup met een doos bedekt met aluminiumfolie.
  9. Centrifugeer de microsferensuspensie bij 10.000 rpm gedurende 3 minuten om een ​​pellet te vormen.
  10. Verwijder de kleurstof bovenstaande oplossing, was de microsferen 6x met 600 ul methanol en daarna met 600 ul PBS die 0,01% Tween-20 andere 6x, zoals beschreven in stap 1.5.
  11. Bewaar de gecodeerde microbolletjes in 600 ul PBS die 0,01% Tween-20 bij 4 ° C tot gebruik, te beschermen tegen licht.
Type Microsphere naam: 1 2 3 4 5 6 7
Eu-TTA (mM) 100 100 10 100 10
C30 (MM) 1 1 6 6 1 6

Tabel 1. Concentraties van Eu-TTA en C30 werkende oplossingen.

2. Voorbereiding van de eiwit-capture microsferen

  1. Bereid MES buffer [2 - (N-morfolino) ethaansulfonzuur (MES) 0,1 M, NaCl 0,9%, 0,01% SDS, pH 5,7] en PBS / SDS-buffer (0,01 M natriumfosfaat, NaCl 0,154 M, 0,01% SDS, pH 7.4) vooraf bij kamertemperatuur.
  2. Voeg 200 ul gecodeerd microsferensuspensie (met ~ 2 mg microsferen) in een Safe-Lock 1,5 ml microcentrifugebuis. Het is belangrijk om dit soort microcentrifugebuis om morsen tijdens de incubatie in stap 2.6 voorkomen.
  3. Was de microsferen met 600 ul MES buffer 3x zoals beschreven in stap 1.5. Voeg 700 ul MES aan de microsferen pellet en meng goed door pipetteren.
  4. Bereid 0.105 g / ml 1-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl] carbodiimide hydrochloride (EDC, MW = 191,7 g / mol) en 0,163 g / ml sulfo-N-hydroxysulfosuccinimide (sulfo-NHS, MW = 217,13 g / mol) oplossingen MES buffer in afzonderlijke buisjes.
  5. Voeg 150 ul vers EDC oplossing bereid druppel voor druppel in de microsferensuspensie. De EDC hydrolyseert snel, dus is het essentieel om verse oplossing om de immobilisatie efficiëntie. Onmiddellijk na de toevoeging van EDC, voeg 150 ul sulfo-NHS oplossing voor de microbolletjes, goed mengen door pipetteren en controleer de suspensie homogeen is.
  6. De dop op de tube, verzegelen met Parafilm, en plaats deze op een shaker. Schudden bij 1500 rpm gedurende 4 uur, bescherming tegen licht met behulp van een doos bedekt met aluminiumfolie.
  7. Centrifugeer de microbolletjes Suspension bij 10.000 rpm gedurende 3 minuten om een ​​pellet te vormen en verwijder het supernatant. Was de microsferen met 500 ul PBS / SDS buffer 3x zoals beschreven in stap 1.5.
  8. Voeg 200 ul PBS / SDS buffer om de pellet, meng de microsferen goed en breng de oplossing tot 300 ul PBS / SDS buffer die 60 ug invangantilichamen. Het is belangrijk om eerst de pellet van microsferen te schorten en voeg de microsferensuspensie in de antilichaamoplossing.
  9. Incubeer de antilichaam-microsferen mengsel door schudden bij 1500 rpm gedurende 4 uur op een shaker, beschermen tegen licht met behulp van een doos bedekt met aluminiumfolie.
  10. Centrifugeer de microsferensuspensie bij 10.000 rpm gedurende 3 minuten om een ​​pellet te vormen en verwijder het supernatant. Was de microsferen met 500 pi StartingBlock (TBS) blokkeringsbuffer 3x, zoals beschreven in stap 1.5.
  11. Meng microsferen met 1 ml TBS blokkerende buffer en incubeer microsferen bij 1.500 rpm gedurende 1 uur op een shaker, beschermen tegen licht met behulp van een doos inhamrood met aluminiumfolie.
  12. Centrifugeer de suspensie bij microsfeer 7000 rpm gedurende 3 minuten om een ​​pellet te vormen en verwijder het supernatant. Was de pellet 3x met 500 ul TBS blokkerende buffer, zoals beschreven in stap 1.5.
  13. Centrifugeer de microsfeer oplossing bij 7000 rpm gedurende 3 minuten om een ​​pellet te vormen en verwijder het supernatant. Voeg 500 ul TBS blokkerende buffer en meng door pipetteren.
  14. Sla de gewijzigde microbolletje suspensie bij 4 ° C tot gebruik, te beschermen tegen licht.
  15. Herhaal deze procedure om andere vormen van microsferen met overeenkomstige antilichamen.

3. Glasvezel-microarray Vergadering

  1. Meng 50 pi van elke soort eiwit-vangst microsferen in een autoclaaf nieuwe microcentrifugebuis. Centrifugeer de voorraad microsferen bundelen bij 7.000 rpm gedurende 3 minuten, en verwijder het supernatant zodat het resterende volume is ongeveer 100 pl.
  2. Hand-cut vezeloptische bundels tot ongeveer 5 cm in lengte ensequentieel poetsen beide uiteinden op een polijstmachine met behulp 30, 15, 9, 6, 3, 1, 0,5 en 0,05 micrometer-grote diamant lappen films. Ultrasone trillingen de gepolijste bundel in gedeïoniseerd water gedurende 2 minuten om alle deeltjes te verwijderen.
  3. Zet een klein magnetisch roerstaafje in een 0,5 ml microcentrifugebuis, voeg 400 ul van eiwitvrij PBS-buffer en roer op een magnetisch roeren plaat gedurende 30 minuten om luchtbellen te verwijderen.
  4. Etch ene uiteinde van de gepolijste vezelbundel in een 0,025 N HCl oplossing voor 150 sec 10,16. Onmiddellijk onderdompelen en ultrasone trillingen het geëtst einde in gedeïoniseerd water gedurende 1 minuut. Droog de vezelbundels met perslucht.
  5. Monteer de vezel bundel op een vezelhouder en blokkeren de geëtst einde in de bubble-free, Proteïnevrije PBS-buffer gedurende 1 uur.
  6. Borg 1 ui aliquot van de opgeslagen microsferensuspensie op de geëtste einde van de vezeloptische bundel. Bescherm de setup van licht met een doos met aluminiumfolie, en wacht 15 minuten. Het volume van de suspensie zalverlagen door verdamping en de microbolletjes ver in de geëtste microputjes. Herhaal deze belasting stap nog een keer.
  7. Gebruik een wattenstaafje verzadigd met monster oplossing voor microsferen die niet gevangen zitten in de microwells verwijderen. Het eiwit microarray is nu klaar voor gebruik. Ga onmiddellijk naar stap 4.1 voor speeksel analyse.

4. Speekselsteekproef analyse met behulp van microsferen microarray

  1. Voeg 200 ul monster-oplossing (100 ul speeksel supernatant verdund met een gelijk volume van StartingBlock T20 (PBS) blokkeringsbuffer. De collectie protocol voor speeksel supernatant reeds eerder is gepubliceerd 10). in een 0,5 ml microcentrifugebuis geautoclaveerd. Dompel het eiwit microarray geladen op de vezel in de oplossing en incubeer op de schudinrichting bij 600 rpm gedurende 2 uur, bescherming tegen licht met een doos bedekt met aluminiumfolie.
  2. Bereid 20 ml wasbuffer door toevoeging van 200 pl 10% BSA-oplossing en 200 pl 10% Tween-20 in 19,6 ml PBS, mix goed door zachtjes te schudden.
  3. Dompel de proteïne microarray in een nieuwe autoclaaf microcentrifugebuis met 200 ul wasbuffer en schudden bij 600 rpm gedurende 2 minuten. Herhaal dit 3x wassen.
  4. Incubeer de microarray in 100 pl oplossing van een detectie-antilichaam cocktail bevattende 5 pg / ml anti-VEGF, IP-10, IL-8, EGF, MMP-9, IL-1β gebiotinyleerde detectie antilichamen StartingBlock T20 (PBS) blokkeringsbuffer gedurende 30 min bij kamertemperatuur op de schudinrichting bij 600 rpm, bescherming tegen licht met een doos bedekt met aluminiumfolie.
  5. Was de microarray 3x met wasbuffer zoals beschreven in stap 4.3.
  6. Incubeer de microarray in 200 gl 20 ug / ml streptavidine R-fycoerythrine-conjugaat (SAPE) oplossing in PBS bij 600 rpm op de schudinrichting gedurende 10 minuten bescherming tegen licht met een doos bedekt met aluminiumfolie.
  7. Was de microarray 5x met wasbuffer zoals beschreven in stap 4.3.
  8. Reinig het distale uiteinde van de vezel (dwz het einde weguit de microsferen) bundelen met een wattenstaafje verzadigd met absolute ethanol.
  9. Droog beide uiteinden van de vezel met perslucht. Monteer de vezel op epifluorescerende microscoop en beeld door het distale uiteinde van de vezel.
  10. Acquire microbolletjes beelden die overeenkomen met Eu-TTA, C30, en SAPE fluorescentie-emissie-intensiteiten. Optische filters instellen en belichtingstijden voor fluorescentie beeldvorming van Eu-TTA, C30, en SAPE zijn weergegeven in tabel 2.
Kanaal Eu-TTA C30 SAPE
Opwekker 365/10x 350/50x 546/10x
Beamsplitter 525DCLP 400DCLP 560LP
Emitter 620/60m 460/50m 580/30m
Belichtingstijd 1 sec 0.3 sec 1 sec

Tabel 2. Parameters voor de drie fluorescerende beelden van de microarray.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fluorescentie beelden van drie kanalen toont een klein gedeelte van de vezel-optische bundel zijn weergegeven in figuren 2A-C. Deze beelden werden geanalyseerd met een algoritme geschreven in MATLAB (zoals in meer detail beschreven in het hoofdstuk discussie). De analyse maakt gebruik van beide informatie van de Eu-TTA afbeelding codering (figuur 2A) en het C30-codering afbeelding (Figuur 2B) aan de microsferen decoderen, en de fluorescentie-intensiteiten van verschille...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Onderzoekers moeten extra aandacht besteden aan de volgende stappen: voor betere nauwkeurigheid decoderen, is het noodzakelijk te controleren of de microsferen werden homogeen gesuspendeerd in alle incubatie en wassen stappen tijdens de microsferen coderingsprocedure. Bovendien moeten de gecodeerde microbolletjes worden beschermd tegen licht gedurende het gehele experiment. Na juiste codering en opslagprocedures, vonden we dat algehele nauwkeurigheid decoderen was boven 99%. De gecodeerde microsferen moet worden bewaard...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit werk werd ondersteund door de National Institutes of Health (subsidie ​​08UDE017788-05). EBP erkent ook steun van de Spaanse Stichting voor Wetenschap en Technologie (FECYT). De auteurs danken Shonda T. Gaylord en Pratyusha Mogalisetti voor kritische lezing van het manuscript.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Eu-TTA kleurstofFisher ScientificAC42319-0010
THFSigma-Aldrich34865-100ML
Bernstein glazen vialFisher Scientific03-339-23B
Coumarine 30 kleurstofSigma-Aldrich546127-100MG
MicrosferenBangslabsPC05N/6698
1.5 ml microcentrifugebuizenFisher Scientific05-408-129
PBS 10x concentraatSigma-AldrichP5493-1L
WaterSigma-AldrichW4502-1L
MethanolSigma-Aldrich34860-100ML
Tw-20Sigma-AldrichP7949-100 ml
BupH MES gebufferde zoutoplossingThermo Scientific28390
SDSSigma-Aldrich05030-500ML-F
NaOH-oplossingFisher ScientificSS256-500
Safe-lock microcentrifugebuisVWR labshop53511-997
EDCThermo Scientific22980
Sulfo-NHSThermo Scientific24510
Human VEGF capture antilichaamR&D SystemsMAB293
Human IP-10 capture antilichaamR&D SystemsMAB266
Human IL-8 capture antilichaamR&D SystemsMAB208
Human EGF capture antilichaamR&D SystemsMAB636
Human MMP-9 capture antilichaamR&D SystemsMAB936
Human IL-1β capture antilichaamR&D SystemsMAB601
Mouse IgG1 isotype control antilichaamR&D SystemsMAB002
StartingBlock (TBS) bufferThermo Scientific37542
HCl standaardoplossing 1.0 NSigma-Aldrich318949-500 ml
0.5 ml microcentrifugebuizenFisher Scientific05-408-120
Proteïnevrij (PBS) bufferThermo Scientific37572
Recombinant human VEGF 165R&D Systems293-VE
Recombinant human IP-10R&D Systems266-IP
Recombinant human IL-8R&D Systems208-IL
Recombinant human EGFR&D Systems236-EG
Recombinant human MMP-9R&D Systems911-MP
Recombinant human IL-1βR&D Systems201-LB
StartingBlock T20 (PBS) bufferThermo Scientific37539
Blocker BSA in PBSThermo Scientific37525
Biotinyleren VEGF detectie antilichaamR&D SystemsBAF293
Biotinyleren IP-10 detectie antilichaamR&D SystemsBAF266
Biotinyleren IL-8 detectie antilichaamR&D SystemsBAF208
Biotinyleren EGF detectie antilichaamR&D SystemsBAF236
Biotinyleren MMP-9 detectie antilichaamR&D SystemsBAF911
Biotinyleren IL-1β detectie antilichaamR&D SystemsBAF201
Streptavidine, R-fycoerytrineInvitrogenS-21388
Ethanol (200 proof)Sigma-AldrichE7023-500ML

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Schena, M., Shalon, D., Davis, R. W., Brown, P. O. Quantitative monitoring of gene-expression patterns with a complementary-DNA microarray. Science. 270, 467-470 (1995).
  2. Schena, M. Protein Microarray. , Jones and Bartlett Publishers. (2004).
  3. Tam, S. W., Wiese, R., Lee, S., Gilmore, J., Kumble, K. D. Simultaneous analysis of eight human Th1/Th2 cytokines using microarrays. J. Immunol. Methods. 261 (01), 157-165 (2002).
  4. Wang, C. C., et al. Array-based multiplexed screening and quantitation of human cytokines and chemokines. J. Proteome Res. 1, 337-343 (2002).
  5. de Jager, W., Velthuis, te, Prakken, H., Kuis, B. J., W,, Rijkers, G. T. Simultaneous detection of 15 human cytokines in a single sample of stimulated peripheral blood mononuclear cells. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 10, 133-139 (2003).
  6. Lee, H. J., Nedelkov, D., Corn, R. M. Surface plasmon resonance imaging measurements of antibody arrays for the multiplexed detection of low molecular weight protein biomarkers. Anal. Chem. 78, 6504-6510 (2006).
  7. Vignali, D. A. A. Multiplexed particle-based flow cytometric assays. J. Immunol. Methods. 243 (00), 243-255 (2000).
  8. Rissin, D. M., et al. Single-molecule enzyme-linked immunosorbent assay detects serum proteins at subfemtomolar concentrations. Nat. Biotechnol. 28, 595-599 (2010).
  9. Zhang, H., Nie, S., Etson, C. M., Wang, R. M., Walt, D. R. Oil-sealed femtoliter fiber-optic arrays for single molecule analysis. Lab Chip. 12, 2229-2239 (2012).
  10. Blicharz, T. M., et al. Fiber-Optic Microsphere-Based Antibody Array for the Analysis of Inflammatory Cytokines in Saliva. Anal. Chem. 81, 2106-2114 (2009).
  11. Mukhopadhyay, R. Devices to drool for. Anal. Chem. 78, 4255-4259 (2006).
  12. Wong, D. T. Salivary diagnostics powered by nanotechnologies, proteomics and genomics. J. Am. Dent. Assoc. 137, 313-321 (2006).
  13. Segal, A., Wong, D. T. Salivary diagnostics: enhancing disease detection and making medicine better. Eur. J. Dent. Educ. 12, 22-29 (2008).
  14. St John, M. A. R., et al. Interleukin 6 and interleukin 8 as potential biomarkers for oral cavity and oropharyngeal squamous cell carcinoma. Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 130, 929-935 (2004).
  15. Herr, A. E., et al. Microfluidic immunoassays as rapid saliva-based clinical diagnostics. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 5268-5273 (2007).
  16. Pantano, P., Walt, D. R. Ordered nanowell arrays. Chem. Mater. 8, 2832-2835 (1996).
  17. Schena, M. Protein Microarrays. , Jones and Bartlett Publishers. (2005).
  18. Mouse IgG1 Isotype Control [Internet]. , Available from: http://www.rndsystems.com/Products/MAB002 (2013).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Multiplexed Fluorescent MicroarraySalivary Protein AnalysisPolymer MicrospheresFiber optic BundlesMicrosphere EncodingAntibody CouplingFluorescence MicroscopySandwich ImmunoassayBiofluid AnalysisMATLAB Algorithm

Gerelateerde artikelen