Om de cellulaire en moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen neotissue vorming en stenose ontwikkeling in tissue engineered hartkleppen begrijpen, een muizenmodel van heterotopische hartklep transplantatie werd ontwikkeld. Een pulmonale hartklep werd getransplanteerd naar ontvanger via de heterotopische harttransplantatie techniek.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Transplantatie van Pulmonary Valve een muis model van Heterotope Heart Transplantation
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Tissue engineered hartkleppen, vooral ontceld kleppen, beginnen aan kracht winnen in klinisch gebruik van reconstructieve chirurgie met gemengde resultaten. Echter, de cellulaire en moleculaire mechanismen van de neotissue ontwikkeling, klep verdikking en stenose ontwikkeling niet uitgebreid onderzocht. Om de bovenstaande vragen te beantwoorden, ontwikkelden we een muizen heterotopic hartklep transplantatie model. Een hartklep werd geoogst van een afsluiter donor muis en getransplanteerd naar een hart donor muis. Het hart met een nieuwe klep werd heterotoop getransplanteerd naar een ontvanger muis. De getransplanteerde hart toonde zijn eigen hartslag, onafhankelijk van de hartslag van de ontvanger. De doorbloeding werd gekwantificeerd met behulp van een hoge frequentie ultrasoon systeem met een gepulste golf Doppler. De stroming door de geïmplanteerde pulmonaalklep toonde aanvoer met minimale oprispingen en de piekstroom was dicht bij 100 mm / sec. Dit muizenmodel van hartklep transplantatie is highly veelzijdig, zodat het kan worden gewijzigd en aangepast aan verschillende hemodynamische omgevingen en / of kan worden gebruikt met verschillende transgene muizen neotissue ontwikkeling bij een tissue engineered hartklep.
Inleiding
Aangeboren cardiovasculaire defecten zijn een van de belangrijkste oorzaken van kindersterfte in de westerse wereld 1,2. Onder hen, pulmonaalklep stenose en bicuspide aortaklep gebreken zijn een vaak voorkomende vorm 3. Hartklepvervanging operatie is een routine keuze van reconstructieve chirurgie; echter complicaties zoals stenose en verkalking van de hartklep en levenslange afhankelijkheid van anticoagulantia zijn een belangrijke bron van chronische ziekte en dood 4-7. Bovendien is het gebrek aan groeipotentieel vereist herziening operaties, die verder verhoogt de mortaliteit van deze jonge patiënten 4,8,9.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Opmerking: Alle dierlijke procedures werden goedgekeurd door de Nationwide Children's Hospital Institutional Animal Care en gebruik Comite.
1. Pulmonale hartklep Oogst van een hartklep Donor Mouse
- Autoclaaf alle chirurgische instrumenten voor de operatie: 1x fijne schaar, 3x micro tang, 2x micro vasculaire klemmen, 1x klem toepassen tang, 1x micro naaldhouder, 1x lente schaar, 1x oprolmechanisme.
- Een 6-8 weken oude vrouwelijke C57BL / 6 muis als pulmonaire hartklep donor. Verwijder de muis uit de kooi en wegen, dan euthanize met een ketamine / xylazine cocktail (ketamine, 200 mg / kg en xylazine, 20 mg / kg, IP) o....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Figuur 1 toont het schema van de hartklep transplantatie model met behulp heterotopische harttransplantatie. De hartklep werd geoogst van een donorhart en geïmplanteerd op een hart van een tweede donor muis. Dan het hart met de nieuwe hartklep werd geïmplanteerd om de buik van een ontvanger muis. Figuur 2 toont een illustratie van de geïmplanteerde hart op de buik ruimte (A), direct na harttransplantatie (B), en 5 minuten na transplantatie. Na verwijder.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Het sterftecijfer van deze procedure is bijna 20%, die voornamelijk veroorzaakt door bloeding op de PV transplantatie plaats en anastomose aan de aorta donor naar de ontvanger abdominale aorta. In de meeste gevallen, het sterftecijfer aanzienlijk afneemt 48 uur na de operatie. De overleving muizen vertoonden sterke hartslag en bloedstroom door het geïmplanteerde PV. Het hele proces duurt vier uur voor een ervaren micro chirurg. Het zal ongeveer 250 muizen te nemen om de techniek onder de knie. Het heterotope harttranspl.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
We hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Dit werk werd ondersteund, voor een deel, door een subsidie van de NIH (RO1 HL098228) te CKB.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| DPBS | Gibco | 14190-144 | |
| Microscope | Leica | M80 | |
| C57BL/6J (H-2b), Female | Jackson Laboratories | 664 | 8-12 weken |
| Ketamine Hydrochloride Injectie | Hospira Inc. | NDC 0409-2053 | |
| Xylazine steriele oplossing | Akorn Inc. | NADA# 139-236 | |
| Ketoprofen | Fort Dodge Animal Health | NDC 0856-4396-01 | |
| Ibuprofen | PrecisionDose | NDC 68094-494-59 | |
| Heparine Natrium | Sagent Pharmaceticals | NDC 25021-400 | |
| Zoutoplossing (steriele 0,9% natriumchloride) | Hospira Inc. | NDC 0409-0138-22 | |
| 0,9% natriumchloride-injectie | Hospira Inc. | NDC 0409-4888-10 | |
| Petrolatum oogzalf | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
| Jodium-prep pads | Triad Disposables, Inc. | NDC 50730-3201-1 | |
| Alcohol-prep pads | McKesson Corp. | NDC 68599-5805-1 | |
| Wattenstaafjes met katoen | Fisher Sientific | 23-400-118 | |
| Fijne schaar | FST | 14028-10 | |
| Micro-Adson pincet | FST | 11018-12 | |
| Klemapplicerend pincet | FST | 00072-14 | |
| S&T vasculaire klem | FST | 00396-01 | |
| Verenschaar | FST | 15008-08 | |
| Colibri retractoren | FST | 17000-04 | |
| Dumont #5 pincet | FST | 11251-20 | |
| Dumont #7 - fijn pincet | FST | 11274-20 | |
| Dumont #5/45 pincet | FST | 11251-35 | |
| Tish naaldhouder/pincet | Micrins | MI1540 | |
| Zwarte polyamide monofilament naad, 10-0 | AROSurgical Instruments Corporation | TI638402 | Voor het naaien van de transplantaat |
| Zwarte polyamide monofilament naad, 6-0 | AROSurgical Instruments | SN-1956 | Voor sluiting van spieren en huid |
| Niet-geweven sponzen | McKesson Corp. | 94442000 | |
| Absorbeerbare hemostaat | Ethicon | 1961 | |
| 1 ml spuit | BD | 309659 | |
| 3 ml spuit | BD | 309657 | |
| 10 ml spuit | BD | 309604 | |
| 18 G 1 1/2 inch, naald | BD | 305190 | |
| 25 G 1 inch, naald | BD | 305125 | |
| 30 G 1 inch, naald | BD | 305106 | |
| Warm water recirculator | Gaymar | TP-700 | |
| Verwarmingspad | Gaymar | TP-22G | |
| Trimmer | Wahl | 9854-500 | |
| VEVO2100 hoge frequentie ultrasone | VisualSonics | http://www.visualsonics.com/vevo2100 | Het catalogusnummer en de prijs kunnen worden verkregen van de verkoopvertegenwoordigers. |
| Ultrasone transmissiegel | Parker Laboratories, INC. | 01-02 | |
| Table Top Laboratory Animal Anesthesia System | VetEquip, INC. | 901806 | |
| Isofluraan | Baxter | 1001936060 |
Referenties
- Polito, A., et al. Increased morbidity and mortality in very preterm VLBW infants with congenital heart disease. Intens Care Med. 39, 1104-1112 (2013).
- Wren, C., Reinhardt, Z., Khawaja, K. Twenty year trends in diagn....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
