Flat Mount beeldvorming van de huid van muizen en de toepassing ervan op de Analyse van Haarzakje Patterning en Sensorische Axon morfologie

Hao Chang; Yanshu Wang; Hao Wu; Jeremy Nathans

doi:10.3791/51749

Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Flat Mount beeldvorming van de huid van muizen en de toepassing ervan op de Analyse van Haarzakje Patterning en Sensorische Axon morfologie

21.8K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/51749

⸱

25 juni 2014

Hao Chang¹ , Yanshu Wang¹ , Hao Wu¹ , Jeremy Nathans¹^,²^,³

¹Department of Molecular Biology and Genetics, Howard Hughes Medical Institute, Johns Hopkins University School of Medicine, ²Department of Neuroscience, Howard Hughes Medical Institute, Johns Hopkins University School of Medicine, ³Department of Ophthalmology, Howard Hughes Medical Institute, Johns Hopkins University School of Medicine

In dit artikel

Samenvatting

Zoogdierhuid bevat een divers scala aan structuren - zoals haarfollikels en zenuwuiteinden - die onderscheidend patronen van ruimtelijke organisatie vertonen. Het analyseren van de huid als een platte berg maakt gebruik van de 2-dimensionale geometrie van dit weefsel tot volledige dikte van hoge-resolutie afbeeldingen van de huid structuren te produceren.

Samenvatting

Huid is een zeer heterogeen weefsel. Intra-dermale structuren omvatten haarzakjes, haarspier spieren, epidermale specialisaties (zoals Merkel cel clusters), talgklieren, zenuwen en zenuwuiteinden, en haarvaten. De ruimtelijke ordening van deze structuren wordt streng gecontroleerd op microscopische schaal - zoals gezien, bijvoorbeeld in de geordende celtypen binnen een haarfollikel - en op microscopische schaal - zoals gezien door de bijna identieke oriëntaties van duizenden haren follikels binnen een lokaal gebied van de huid. Visualisering deze structuren zonder fysieke snijden de huid mogelijk door de 2-dimensionale geometrie van dit orgaan. In dit protocol, laten we zien dat de huid van muizen kan worden ontleed, vaste, gepermeabiliseerde, gekleurd, en verduidelijkt als een intacte twee dimensionaal object, een platte berg. Het protocol zorgt voor eenvoudige visualisatie van de huid structuren in hun geheel door de volledige dikte van grote delen van de huid door optical snijden en wederopbouw. Foto's van deze structuren kunnen ook worden geïntegreerd met informatie over de positie en oriëntatie ten opzichte van het lichaam assen.

Inleiding

De huid is een van de grootste organen in het lichaam, met belangrijke functies in somato-sensatie, isolatie / thermoregulatie, en immuunsysteem ^1. Het begrijpen van de moleculaire en cellulaire basis van de ontwikkeling en functie van de huid is geweest van langdurige interesse vanwege het fundamentele belang van de huid als een biologisch systeem en de relevantie ervan voor dermatologie. Zoogdierhuid bevat een verscheidenheid aan meercellige structuren, met inbegrip gelaagde lagen van keratinocyten, dermale bindweefsel, verschillende soorten van haarzakjes, talgklieren, haarspier spieren, bloedvaten, en minstens een dozijn verschillende klassen van affer....