Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Optogenetische stimulatie van de gehoorzenuw

14.6K weergaven

DOI:

10.3791/52069

8 oktober 2014

In dit artikel

Samenvatting

Cochleair implantaat (CI) in staat stellen het horen door directe elektrische stimulatie van de gehoorzenuw. Echter, slechte frequentie en intensiteit resolutie beperkt de kwaliteit van het gehoor met CI. Hier beschrijven we optogenetische stimulatie van de gehoorzenuw in muizen als een alternatieve strategie voor auditieve research en ontwikkeling van toekomstige CI's.

Samenvatting

Directe elektrische stimulatie van de spiraal ganglion neuronen (Sgns) door cochleair implantaat (CI) kan geopend spraakverstaan ​​in het merendeel van de geïmplanteerde dove proefpersonen 1-6. Niettemin geluidsverwerkingsalgoritme met huidige CI heeft slechte frequentie en intensiteit resolutie door brede stroomspreiding van elk contact elektrode activeren een groot aantal Sgns langs de tonotopische as van het slakkenhuis 7-9. Optische stimulatie wordt voorgesteld als een alternatief voor elektrische stimulatie die ruimtelijk meer belooft beperkt activatie van Sgns en derhalve hogere frequentieresolutie codering. De laatste jaren heeft directe infrarood verlichting van de cochlea gebruikt om reacties oproepen bij de gehoorzenuw 10. Toch vereist het hogere energieën dan elektrische stimulatie 10,11 en de onzekerheid blijft bestaan ​​over het onderliggende mechanisme 12. Hier wordt een methode op basis van optogenetics om Sgns stimuleren beschrijven wemet een lage intensiteit blauw licht, met behulp van transgene muizen met neuronale expressie van channelrhodopsin 2 (ChR2) 13 of-virus gemedieerde expressie van de ChR2-variant Catch 14. We gebruikten micro-light emitting diodes (μLEDs) en vezel gekoppeld lasers om ChR2 expressie Sgns stimuleren door middel van een kleine kunstmatige opening (cochleostomie) of het ronde venster. We getest de reacties van hoofdhuid opnames van licht-evoked potentials (optogenetische auditieve hersenstam respons: oABR) of door micro-elektrode opnames van de auditieve route en vergeleken hen met akoestische en elektrische stimulatie.

Inleiding

Volgens de World Health Organization, 360 miljoen mensen wereldwijd lijden aan gehoorverlies. In dove proefpersonen, directe elektrische stimulatie van Sgns door CIS staat geopend spraakverstaan ​​in de meerderheid van hen 1,2,4,5. Ook al CI geïmplanteerd bij meer dan 200.000 mensen, dus de meest succesvolle neuroprothese, geluid codering gedreven door de huidige cochleaire implantaten is beperkt. CI's door elektrische stimulatie een aantal elektrodes waar iedereen activeert een tonotopische gebied van de gehoorzenuw aldus de disfunctionele sensorische orgaan van Corti omzeilen in de cochlea. Normaal horende luisteraars kunnen discrimineren meer dan 20....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle experimenten die in dit werk werden uitgevoerd met de ethische normen gedefinieerd door de Duitse wet betreffende de bescherming van proefdieren. De universiteit van Göttingen raad voor dierenwelzijn en het welzijn van dieren kantoor van de deelstaat Nedersaksen ingestemd met de experimenten.

1 Voorbereiding van μLED-stimulator

  1. Voor μLEDs, eerst de μLED-stimulator te bereiden. Gebruik blauwe LED's met 200 van 200 micrometer actieve oppervlak (μLED, zie Materialen tabel).
  2. Soldeer de draden aan de μLED. Dan, in te kapselen de μLED en de verbindingen met epoxy lijm. Laat het 's nachts apparaat te laten de ep....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Een optimale cochleostomie kritisch en verhoogt de kans op een succesvolle experiment. Hierdoor Venster regelmatig is klein, en er is geen schade van de interne cochleaire structuren. Bijvoorbeeld, bloeden geeft beschadiging van de stria vascularis. Een goed voorbeeld is weergegeven in figuur 1B.

Met behulp ChR2-transgene muizen, wordt ChR2 uitgedrukt in de Sgns binnen het slakkenhuis (figuur 1C). Blauw licht verlichting, hetzij door μ.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

De beschreven experimenten tonen het optogenetic stimulatie van de Sgns en kan in principe ook worden gebruikt om binnenste en / of buitenste haarcellen te stimuleren, mits de expressie van opsins. Deze experimenten vereisen veel geduld en zorg. Zoals eerder vermeld, de meest kritische stappen is een goede cochleostomie / ronde venster insertie en een geschikte positie en oriëntatie van de lichtbron.

Er zijn beperkingen met optogenetische stimulatie bij gebruik ChR2. In ons geval oABR amplit.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door het Duitse Federale Ministerie van Onderwijs en Onderzoek (Bernstein Focus voor Neurotechnology verlenen 01GQ0810, aan T. Moser, en MED-EL Duitsland); de Duitse Stichting voor Onderzoek door het Center for Nanoscale Microscopie en Moleculaire Fysiologie van de hersenen (FZT 103, T. Moser) en via de SFB889, N. Strenzke en T. Moser).

....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
UrethaneSigma AldrichU2500-100GAnestheticum
Xylazine HClRXVSedativum en pijnstiller
BuprenorphineReckitt BenckiserPijnstiller
Dumont #5 ForcepsFine Science Tools11251-10Wordt gebruikt om hard weefsel vast te houden, bijv. bot of materialen. Gebruik ze nooit om zacht delicaat weefsel vast te houden 
Dumont #5 - Fine ForcepsFine Science Tools11254-20Alleen te gebruiken om zacht weefsel vast te houden
Fine Scissors - SharpFine Science Tools14060-09Om de huid te openen en te helpen bij de spierdissectie
Lempert Rongeurs Fine Science Tools16004-16Ze zijn erg handig om het bot uit de bulla gemakkelijk te verwijderen
473 nm laser Changchun New IndustriesMLL-III473100 mW solid state 473 nm laser
Laser driver Changchun New IndustriesDPSSL MLL 100 mWTTL-gestuurde laserdriver
250 µm optische vezelElke commerciële; bijv. ThorlabsM42L05
Akoesto-optische modulatorCrystal Technology, Inc.PCAOM VISBepaal de hoeveelheid licht die van de laser in de vezel wordt gekoppeld
Controller voor akoesto-optische modulatorCrystal Technology, Inc.160T1-8SAR-24-0.8Bestuur de akoesto-optische modulator
Solo2 laser vermogen & energiemeterGentec-EOWordt gebruikt om de lichtintensiteit van de LED en de vezelgekoppelde laser te meten
Blauwe µLEDCreeC470UT200Het is noodzakelijk om verschillende μLED-apparaten te bouwen omdat ze gemakkelijk beschadigd raken of de isolatie niet goed genoeg is
TDT System Tucker-Davis TechnologiesRZ6-A-P1Het kan elk systeem worden gebruikt voor stimulusgeneratie  presentatie en dataverzameling
Eén-schacht, 16-kanaals siliciumsondeNeuronexusa1x16-5mm-100-177-CM16LP Dit zijn kwetsbare apparaten, moeten voorzichtig worden behandeld en na gebruik worden schoongemaakt
OmnidrillWorld Precision Instruments503598Voer craniotomie uit voor IC-opnamen en implantatie van referentieschroeven
Microboor stalen boorslijpstenenElke commerciële; bijv. Fine Science Tools19007-07
Zelfborende botschroefElke commerciële; bijv. Fine Science Tools19010-10Referentieschroef
MicromanipulatorElke commerciële; bijv. Luigs+NeumannInVivo Unit Junior 4-assigPositionering van opname sonde

Referenties

  1. Rubinstein, J. T. Paediatric cochlear implantation: prosthetic hearing and language development. Lancet. 360 (9331), 483-485 (2002).
  2. Middlebrooks, J. C., Bierer, J. A., Snyder, R. L. Cochlear implants: the view from the brain. Current opinion in neurobiology. ....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

SpiralganglionneuronenChannelrhodopsine 2Micro LED stimulatorOptische vezellaserCochleostomieprocedureOptogenetische auditieve hersenstamresponsInferior colliculus registratiesAlternatief voor cochleair implantaat