Het dooierzakmembraan van het kuiken (CAM) is immuundeficiënt en sterk gevasculariseerd, waardoor het een natuurlijke in vivo model van tumorgroei en angiogenesis is. In dit protocol beschrijven we een betrouwbare methode om driedimensionale, gevasculariseerde hepatocellulair carcinoom (HCC) tumoren te laten groeien met behulp van de CAM-assay.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De chick chorion-membraan (CAM) begint te ontwikkelen op dag 7 na de bevruchting en rijpt op dag 12. De cam is natuurlijk immunodeficiënte en sterk doorbloed, waardoor het een ideaal systeem voor tumor implantatie. Voorts bevat de CAM extracellulaire matrixeiwitten zoals fibronectine, laminine, collageen, integrine alfa (v) beta3 en MMP-2, waardoor het een aantrekkelijk model voor tumor invasie en metastase te onderzoeken. Wetenschappers hebben lang gebruik gemaakt van de fysiologie van de CAM door het te gebruiken als een model van angiogenese. Meer recent heeft de CAM-assay aangepast om te werken als een in vivo xenograft model voor verschillende kankers die de kloof tussen basic in vitro werk en complexere dierlijke modellen van kanker overbrugt. De CAM-assay maakt de studie van tumorgroei, antitumor therapieën en pro-tumor moleculaire pathways in een biologisch systeem waarin zowel kosten- en tijd-effectief. We beschrijven hier de ontwikkeling van de CAM xenograft model van hepatocellulair carcinoom (HCC) embryonale overleving tot 93% en betrouwbare tumor nemen leidt tot groei van driedimensionale, gevasculariseerde tumoren.
Inleiding
Hepatocellulair carcinoom (HCC) is de 3 belangrijkste oorzaak van kankersterfte ter wereld 1. Nog slechts 30% van de HCC patiënten komen in aanmerking voor curatieve chirurgische behandelingen 2 en systemische chemotherapie niet effectief 3. Daarom is er dringend onvervulde medische behoefte aan nieuwe therapieën HCC en de ontwikkeling van modelsystemen geschikt voor het efficiënt testen van nieuwe middelen. De chick chorion-membraan (CAM) assay levert een reproduceerbare, rendabele en snelle middellange-throughput werkwijze voor het testen van potentiële anti-tumor drugs in vivo.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. broeden
- Verkrijgen 8 dagen oude specifieke pathogenen vrije bevruchte eieren.
- Plaats de eieren in roterende ei-lade, gestempeld uiteinden naar boven en plaats de draaiende bak binnen een ei incubator. Incubeer eieren voor 48 uur bij 36 ° C en 50% vochtigheid.
2. Het laten vallen van de CAM en openen van de eieren
- Verzamelen eieren van incubator. Plaats eieren in ei-rek, gestempelde kant naar boven, en breng aan de laminaire stroming kap.
- Schakel de kamer en kap lichten.
- Houd de gestempelde eind licht ei om het ei candler de vasculatuur van de CAM en de luchtzak bloot.
LET....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Representatieve foto belangrijkste stappen in het protocol worden hier getoond. Figuur 1A toont het gebruik van de candler het ontwikkelende embryo, de luchtzak en het vaatstelsel van de CAM visualiseren. Figuur 1B-1C tonen het proces van het vervallen van de CAM door de twee gaten en het vervolgens toepassen onderdruk via de veiligheids- lamp en figuur 1D toont een succesvol liet CAM met een grote luchtbel onder potlood gemerkt hole. Figuur 1E en figuu.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Een aantal belangrijke stappen in dit protocol waarschijnlijk goed voor de verbeterde embryo overleving evenals verhoogde betrouwbaarheid van tumorgroei. Laten vallen van de CAM uit de buurt van de schaal door te zuigen aan de luchtzak is minder invasief dan andere bestaande methoden (met behulp van een naald aan albumine uit het ei, stompe dissectie, enz. Te verwijderen). Met behulp van een steriele punaise op de twee kleine gaten vereist voor deze methode te maken is de meest uitdagende deel van het protocol. Het gebr.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
A.S. ontvangt financiering van het farmaceutische bedrijf Advaxis om een door onderzoekers geïnitieerde klinische proef te ondersteunen.
Dankbetuigingen
A.S. werd gedeeltelijk ondersteund door subsidies van de National Institutes of Health (NIH) National Institute of Dental and Craniofacial Research (5R03DE021741-02) en het National Cancer Institute (1K08CA154963-01A1).
Het Howard Hughes Medical Institute heeft financiering verstrekt voor M.L. via het HHMI Medical Research Fellows Program.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Premium incubated eggs | Charles River | N/A | http://www.criver.com/files/pdfs/avian/av_c_spf_egg_price_list.aspx |
| Egg incubators | GQF | Hova-Bator 2362N | |
| Rotating egg trays | GQF | 1611 Automatic Egg Turner | |
| Egg candler | Lyon | Hi-Power 950-070 | |
| Dremel 100 rotary tool with 15/16 cut-off wheel | Dremel | 100-N/7 | |
| Sterile forceps, push pin, dissection scissors, Scotch tape | |||
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 | |
| Cryogenic vials, external thread with silicone washer | Corning | 430659 | |
| Collagenase from Clostridium histolyticum | Sigma | C9891 |
Referenties
- Sangiovanni, A., et al. Increased survival of cirrhotic patients with a hepatocellular carcinoma detected during surveillance. Gastroenterology. 126 (4), 1005-1014 (2004).
- Lopez, P. M., Villanueva, A., Llovet, J. M.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
