Method Article

Bone Geconditioneerd Medium: Voorbereiding en Bioassay

DOI:

10.3791/52707

⸱

July 8th, 2015

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Oral Surgery and Stomatology, School of Dental Medicine, University of Bern, 2Laboratory of Oral Cell Biology, School of Dental Medicine, University of Bern, 3Department of Oral and Maxillofacial Surgery, School of Dental Medicine, Universitat Internacional de Catalunya, 4Robert K. Schenk Laboratory of Oral Histology, School of Dental Medicine, University of Bern, 5Department of Cranio Maxillofacial Surgery, Inselspital, University of Bern, 6Department of Implant Dentistry, School of Dentistry, Universidade Federal de Santa Catarina

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

We beschrijven hier hoe-bone geconditioneerd medium (BCM) voor te bereiden en te testen zijn activiteit in vitro.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autologe bottransplantaten worden op grote schaal gebruikt in de kaakchirurgie, orthopedie en traumatologie. Autologe bottransplantaten vervangen niet alleen ontbreekt het bot, maar ook ondersteuning van het complexe proces van botregeneratie. Deze gunstige gedrag autografts wordt toegeschreven aan drie kenmerken: osteoconductiviteit, osteogenicity en osteo-inductiviteit. Er is echter een ander aspect: Bone ent laat een groot aantal moleculen, zoals groeifactoren, die mesenchymale cellen die betrokken zijn bij botherstel kunnen richten. De paracriene eigenschappen van bottransplantaten worden bestudeerd in vitro door het gebruik van bot-geconditioneerde medium (BCM). Hier presenteren we een protocol over hoe bot geconditioneerd medium te bereiden van inheemse varken corticale bot en bot dat de thermische verwerking of demineralisatie onderging. Cellen kunnen direct worden blootgesteld aan BCM en gezaaid op biomaterialen, zoals collageen membranen, vooraf gedrenkt BCM. We geven voorbeelden van in vitro bioassays met mesenchymale cellen op de expressie van TGF-β gereguleerde genen. De gepresenteerde protocollen moeten aanmoedigen om de paracriene effecten van bottransplantaten verdere onthullen tijdens de regeneratie van bot en een pad voor translationeel onderzoek te openen op het brede terrein van de reconstructieve chirurgie.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autoloog bot wordt veel gebruikt om defecten die ontstaan ​​als gevolg van misvorming, chirurgische resectie, reconstructieve chirurgie trauma, en voorafgaand aan implantatie 1,2 overbruggen. Het begrijpen van de biologische principes hoe bottransplantaten ondersteunen van het proces van transplantaat consolidatie niet alleen belangrijk om te begrijpen waarom autografts worden beschouwd als de gouden standaard in reconstructieve chirurgie, is het ook bionische de verbeterde constructie van botsubstituten 3. Toch graft consolidatie is sneller met autoloog bot ten opzichte van het bot vervangt 4,5. Derhalve is het noodzakelijk om de mol....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. BCM Voorbereiding

  1. Verkrijgen varken onderkaken van de plaatselijke slager zo vers mogelijk. Plaats de kaken op een stevige ondergrond en laat een volledige dikte flap bijzondere aandacht geen zacht weefsel niet te verlaten of periosteum gehecht aan het bot. Werk in een schone omgeving zonder dat hij onder stroomkap.
  2. Zodra een volledige dikte flap wordt losgelaten, gebruikt een bot schraper om de botsplinters oogsten uit de buccale zijde. Houdt u er rekening mee dat het bot schraper heeft scherpe zijn. Handvat stevig op het bot schraper met lange bewegingen te verzamelen op het bot. Gooi het bot chips kleiner dan 1mm.
    1. Om inheemse bot c....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bone geconditioneerd medium wordt bereid uit verse varkens botsplinters. Algemeen overzicht van het proces BCM voorbereiden en biomaterialen in combinatie met BCM gebruikt wordt getoond in figuur 1 respectievelijk figuur 2. Tijdens het BCM preparaat is het belangrijk om grote botsplinters met lange bewegingen korte delen of zeer kleine botsplinters verkrijgen kan de kwaliteit van de uiteindelijke BCM beïnvloeden. Kwaliteit van BCM kan worden gecontroleerd door analyse van de genexpressi.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bone-geconditioneerd medium weerspiegelt de activiteit bezit van bottransplantaten in de eerste fasen van botregeneratie. De hier beschreven protocol kan worden aangepast aan de respons van verschillende soorten cellen die betrokken zijn bij botherstel te bestuderen. Bovendien kan het protocol worden gebruikt om geconditioneerd medium verwerkte bot of vulstoffen te bereiden. De werkwijzen zijn eenvoudig uit te voeren en vertrouwen op een eenvoudig concept: de factoren vrijgemaakt uit diverse natieve en verwerkt bot. Beg.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te onthullen. Jordi Caballé-Serrano ontving een beurs van de Stichting van de Dental Onderzoek en Onderwijs, Basel, Zwitserland.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Authors would like to thank Catherine Solioz for her skillful assistance.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Pig MandiblesLocal bucher
Bone ScraperHu-FriedyPPBUSE2/36
Antibiotics & AntimicoticsAll life Technologies15240-062
Collagen Membranes (Bio-Gide)Geistlich
Fetal Calf SerumInvitrogen Corporation16030074
DMEMInvitrogen Corporation21885-025

High Pure RNA Isolation Kit		Roche11828665001
Transcriptor First Strand cDNA Synthesis KitRoche4379012001
PrimersMicrosynth
SYBR Green (for Q-RT-PCR)Roche4673484001
PBSRoche11666789001

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Buser, D. Long-term Stability of Early Implant Placement with Contour Augmentation. Journal of dental research. , (2013).
  2. Chiapasco, M., Casentini, P., Bone Zaniboni, M. augmentation procedures in implant dentistry. The International jour....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Bone Conditioned MediumBone GraftsMesenchymal CellsGene Expression AnalysisQuantitative Real time PCRCollagen MembranesTGF beta SignalingBone RegenerationIn Vitro BioassayParacrine Effects

Related Articles