Het hierin beschreven model voor FeCl3 geïnduceerde trombose bij muizen wordt hier beschreven. Er wordt een methode gepresenteerd om trombusgroei te bewaken door middel van intravitale microscopieobservatie op een mesenterisch vat en door bloedstroommeting in de halsslagader.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Ferric-Chloride geïnduceerde trombose Muis Model op halsslagader en Mesenterium Vessel
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Ernstige trombose en de daaruit voortvloeiende ischemische gevolgen zoals myocardinfarct, longembolie en beroerte zijn wereldwijd grote gezondheidsproblemen. De ferrichloride-blessure is nu een goed gevestigde techniek om snel en nauwkeurig de vorming van trombi te induceren in blootgestelde aders of slagaders van kleine en grote diameter. Dit model heeft een sleutelrol gespeeld in de studie van de pathofysiologie van trombose, in de ontdekking en validatie van nieuwe antitrombotische geneesmiddelen en in het begrijpen van de werkingsmechanismen van deze nieuwe middelen. Hier wordt de implementatie van deze techniek op een mesenteriaal vat en halsslagader bij muizen gepresenteerd. De methode beschrijft hoe circulerende leukocyten en bloedplaatjes kunnen worden gelabeld met een fluorescerende kleurstof en hoe deze, door middel van intravitale microscopie op het blootgestelde mesenterium, hun accumulatie kunnen worden waargenomen aan de beschadigde vaatwand, wat leidt tot de vorming van een trombus. Op de halsslagader wordt de occlusie veroorzaakt door de stolselvorming gemeten door de bloedstroom te monitoren met een Doppler-sonde.
Inleiding
Het onderzoek van de bij de ontwikkeling van trombose en de evaluatie van de effectiviteit van anti-trombotische geneesmiddelen mechanismen vereist gevestigde experimentele diermodellen. Grote diermodellen waren de eersten die worden gebruikt als zij grote schepen meer op mensen dan knaagdieren 1. Echter, hoge kosten, de grotere vereiste voorzieningen en de moeilijkheid genetisch manipuleren zijn belangrijke nadelen aan het gebruik en grote dieren zijn thans beperkt tot late preklinische studies eenmaal voorproeven op knaagdieren eindresultaten 2 gegeven. Met brede beschikbaarheid van transgene en knockout stammen en hun kleine grootte die de ho....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle experimenten met dieren werden goedgekeurd door de Alfred Medical Research en Opleiding Precinct Animal Ethics Committee (E / 1534/2015 / B). Alle chirurgische manipulaties werden uitgevoerd onder volledige narcose en de dieren hebben geen pijn ervaren in elk stadium. Alle experimenten worden beschreven, zijn niet-herstel.
1. Voorbereiding
- Snijd dunne banden van filter papier (1 mm x 2 mm).
- Vers bereiden 2 oplossingen ferrichloride van 4% (w / v) en 6% (w / v) verdund in gedeïoniseerd water. Bereid rhodamine 6G-oplossing 0,3% in PBS, gefiltreerd door 0,22 urn.
- Snijd een klein stukje (5 mm x 1 cm) van he....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De fluorescentie microscopie intravitale observatie van het mesenterium wordt de accumulatie van Rhodamine 6G tonen gelabelde bloedplaatjes en leukocyten langs de vatwand verwond door FeCl3. De geleidelijke vorming van een gedeeltelijk thrombus wordt bewaakt in een 200 urn mesenterium vat (Figuur 1). Een trombus langzaam weergegeven en is duidelijk herkenbaar na de eerste minuut van blootstelling aan FeCl3 (figuur 1, t = 60 sec). 40 sec na verwijdering van het filt.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De ijzerchloride geïnduceerde trombose model is een uitstekend research tool. Zoals getoond in deze studie, is het uiterst eenvoudig te implementeren en bij gebruik in combinatie met intravitale microscopie of Doppler flowmeter, biedt een goede real-time monitoring van trombusvorming. De belichtingstijd en de concentratie van FeCl3 aanpassen, maar biedt ook de mogelijkheid om hetzij niet-occlusief of occlusieve trombi produceren.
Deze werkwijze heeft ook een aantal beperkingen. In.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
De auteurs willen graag technische ondersteuning van Joy Yao en Dr. Karen Alt, evenals de financiering van de NHMRC en NHF erkennen.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Whatman-chromatografiepapier | GE Healthcare | 3030917 | |
| IJzer (III) chloride 40% (w/v) | VWR | 24212.298 | |
| Rhodamine 6G | Sigma | R4127 | |
| Omgekeerd microscoop | Olympus | IX81 | |
| Digitale zwart-witcamera | Olympus | XM10 | |
| Doppler-flowmeter | Transonic | TS420 | |
| Nano-doppler flow sonde | Transonic | 0.5 PBS | |
| Ketamine | Hospira | 0409-2051-05 | |
| Xylazin (Rampun) | Bayer | 75313 | |
| Petrischaal | Sarstedt | 82.1472 | |
| Insulinspuit (29 G) | BD Ultra-Fine | 326103 | |
| Wattenstaafjes | BSN medical | 211827A | |
| Dynek dysilk hechtdraad | Dynek Pty Ltd | CS30100 | |
| Dulbecco's fosfaatbufferoplossing (PBS) | Gibco life technologies | 21600-069 | |
| Verwarmingskussen | Kirchner | T60 |
Referenties
- Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents. J Pharmacol Toxicol Methods. 43 (2), 101-116 (2000).
- Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
