Samenstelling en eigenschappen van Aquafaba: Water verhaald commercieel blik kikkererwten

Samenvatting

Aquafaba is een viskeuze SAP uit blik kikkererwten die, wanneer krachtig geroerd, produceert een relatief stabiele wit schuim of schuim. Het primaire onderzoek doel is om identificatie van de bestanddelen van aquafaba die bijdragen viscosifying/verdikking eigenschappen met behulp van nucleaire magnetische resonantie (NMR), ultrafiltratie, elektroforese en peptide massa vingerafdrukken.

Samenvatting

Kikkererwten en andere peulvruchten worden vaak verkocht als ingeblikte producten verpakt in een dikke oplossing of een pekel. Deze oplossing heeft onlangs aangetoond dat stabiel schuim en emulsies produceren, en kan fungeren als verdikkingsmiddel. Onlangs de belangstelling voor dit product is verbeterd via het internet waar wordt voorgesteld dat deze oplossing, nu genaamd aquafaba door een groeiende Gemeenschap, kan een vervanger gebruikt voor eieren en melk eiwit. Aquafaba is zowel nieuwe en wordt ontwikkeld door een internet-gebaseerde is Gemeenschap weinig bekend over de samenstelling of eigenschappen. Aquafaba werd teruggevonden uit 10 commerciële blik kikkererwten producten en correlaties tussen aquafaba samenstelling, dichtheid, viscositeit en schuimende eigenschappen werden onderzocht. Proton NMR werd gebruikt voor het karakteriseren van de samenstelling van de aquafaba voor en na de ultrafiltratie door membranen met verschillende moleculair gewicht snijden offs (MWCOs of 3, 10, 50 kDa). Een protocol voor elektroforese en peptide massa vingerafdrukken wordt ook gepresenteerd. Deze methoden verstrekt waardevolle informatie met betrekking tot onderdelen die verantwoordelijk zijn voor aquafaba functionele eigenschappen. Deze informatie kan de ontwikkeling van praktijken om standaard commerciële aquafaba-producten te produceren en kan helpen consumenten producten van superieure of consistent nut selecteren.

Inleiding

Steeds meer worden vegetarische producten ontwikkeld die de eigenschappen van vlees, melk en eieren na te bootsen. De functionele eigenschappen van peulvruchten zijn belangrijk in hun huidige toepassingen in food toepassingen en hun eigenschappen worden onderzocht in de ontwikkeling van vervangingen voor dierlijke eiwitten. Bijvoorbeeld, zuivel alternatieven verkoop waren 8,80 miljard USD in 2015 en deze markt snel groeit. Deze markt naar verwachting groeien tot een bedrag van 35.06 miljard dollar door 2024. Bovendien, de opwaartse trend in de vraag naar plantaardige melk substituten is gedeeltelijk een gevolg van de bezorgdheid van de gezondheid van de consumenten met betrekking tot cholesterol, antibiotica en groeihormonen, vaak gebruikt in melk productie¹. Ook plantaardige eiwitten en hydrocolloid ei melkvervangers markten zijn snel uit te breiden en een samengestelde jaarlijkse groei van 5,8% verwachting voor deze materialen in de komende 8 jaar met een omzet van $1,5 miljard USD in 2026²verwacht. Een groeiend aantal consumenten liever vegan eiwitbronnen, allergeen verminderd van diëten en verminderd koolstofvoetafdruk voor voedingsproducten. Vraag naar puls gebaseerde producten, vooral uit faba bonen, linzen en kikkererwten gestaag groeien als gevolg van het hoge eiwitgehalte, voedingsvezels en weinig verzadigd vet gehalte aan pulsen³. Peulvruchten bevatten ook fytochemicaliën met potentieel voordelig biologische activiteit⁴.

Commerciële entiteiten, wetenschappers en particulieren hebben verschillende benaderingen om te communiceren met dat de eigenschappen van de kwaliteit van kikkererwten op basis van ei en melk vervangingen genomen. Gugger et al. ⁵ geproduceerd een melk-achtige product van hoge zetmeel korrels waaronder adzuki bonen en kikkererwten. In hun beschreven methoden de voorstanders geprobeerd om te laten zien dat hun product uniek en verschillend van "aquafaba"^{6 is}. In een andere commerciële benadering toegelicht door Tetrick et al. ⁷ een plantaardige ei plaatsvervanger werd ontwikkeld. Hun octrooiaanvraag worden methoden beschreven voor puls bloem combineren met bekende bindmiddelen die wedijveren met de functie van het eiwit in gebakken materialen. Typische formules bevatten 80-90% pulse meel en 10-20% verdikking additieven.

Peer reviewed literatuur ook geeft de functionaliteit die mogelijk met kikkererwten en heeft aangetoond dat albumine eiwitfracties kabuli en desi kikkererwten meel verkregen goede membraanemulsificatie eigenschappen hebben. Ze hebben ook een significant effect van kikkererwten bron gevonden over de albumine opbrengst en prestaties⁸.

Na de eerste internet verslag met een beschrijving van "aquafaba" door de Franse chef-kok Joël Roessel, toont een open source-beweging het nut van aquafaba als een vervanging van eiwit en zuivel eiwitten in vele food toepassingen. Er zijn vele zeer bekeken webpagina's en YouTube-video's weergegeven: de opneming van aquafaba in levensmiddelen die wedijveren met de kwaliteiten van ice cream, meringue, mayonaise, kaas en roereieren, en slagroom. Meeste Pioniers verstrekken van open source aquafaba applicaties (recepten) krijgen hun materiaal door het uitpersen van blik kikkererwten en het gebruik van de vloeistof in hun recepten. Deze personen zijn meestal niet goed opgeleide wetenschappers. Videoreacties secties blijkt dat de respondenten de recepten hebt gekopieerd, en sommige hebben gefaald om te repliceren de successen van de voorstanders van de aquafaba.

Alle drie benaderingen (bedrijfs-, wetenschappelijke- en open source) aan de ontwikkeling van ei en melk vervangingen zijn verdienste maar een belangrijke dimensie ontbreekt. Toegepaste wetenschappers en basis wetenschappers individuen uitvaardigen pulse gebaseerde producten hebben onvolledig gekenmerkt en gestandaardiseerd hun uitgangsmateriaal. Standaardisatie van een product voor een specifiek gebruik is een normale industriële praktijk. Kikkererwten cultivars niet zijn gestandaardiseerd voor aquafaba kwaliteit en industriële conservenindustrie praktijken zijn gestandaardiseerd te produceren consistente kikkererwten niet aquafaba.

Gebaseerd op studies van andere grondstoffen, is het voorspelbaar dat zowel genotype en milieu aan de pols aquafaba kwaliteit bijdragen zal. Het is bekend dat zowel genotype en milieu beïnvloeden kabuli kikkererwten inblikken eigenschappen⁹. Genotypische effecten zijn meestal grote tussen verwante soorten en kleinere binnen leden van een soort. Variatie in de fysische en chemische eigenschappen kan worden geminimaliseerd door behoud van de identiteit waarmee de selectie van cultivars met gewenste eigenschappen. Milieu-effecten kunnen ook groot en worden beheerd door kwaliteitsevaluatie en¹⁰mengen tot standaard prestaties in specifieke tests.

Er zijn veel genetisch verschillende cultivars van kikkererwten in commerciële productie. Bijvoorbeeld, de Universiteit van Saskatchewan gewas Development Centre, een belangrijke bron van commerciële kikkererwten kiemplasma, heeft vrijgegeven 23 kikkererwten cultivars sinds 1980 waarvan 6 momenteel voor teelt in Canada aanbevolen zijn. Wetenschappelijke manuscripten beschrijven vaak de cultivar gebruikt in een studie, deed de octrooien en internetpagina's die werden onderzocht de cultivar gebruikt of de herkomst van de kikkererwten niet geven. De standaardisatie van cultivars en behandeling kon helpen gebruikers hun succes in het gebruik van kikkererwten verhogen, maar deze informatie is niet beschikbaar op blik kikkererwten producten.

Het doel van dit onderzoek is om te bepalen van de aquafaba componenten die schuimende eigenschappen bijdragen. Hier, de Rheologische eigenschappen van aquafaba van commerciële kikkererwten merken werden vergeleken en de chemische eigenschappen werden bestudeerd door NMR, elektroforese en peptide massa vingerafdrukken. Om onze kennis is dit het eerste onderzoek waarin de chemische samenstelling en de functionele eigenschappen van de onderdelen van de viscosifier aquafaba worden beschreven.

Protocol

Scheiding van Aquafaba kikkererwten

1. Verkrijgen blikjes van kikkererwten uit lokale kruideniers en open met een handleiding blikopener.
2. Label blikjes van A op J.
3. Aparte kikkererwten uit aquafaba met behulp van een roestvrijstalen mazen keuken zeef en weegt de gescheiden kikkererwten en aquafaba.

Het verkrijgen van een representatief monster van kikkererwten en Aquafaba voor chemische analyse.

4. Selecteer willekeurig tien kikkererwten na het aftappen van de aquafaba om te bepalen van vochtgehalte.
5. Breng de geselecteerde kikkererwten in een droogrek tin en warmte bij 100 ± 2 ° C gedurende 16-18 uur in een droogstoof.
6. Na het drogen, malen de kikkererwten tot een poeder voor verder gebruik (bijvoorbeeld eiwit en koolstof inhoudsanalyse).
7. Freeze aquafaba aquafaba schuim uit elke bron tot-20 ° C en vervolgens drogen in een droger bevriezing. De gedroogde aquafaba zal worden gebruikt voor de bepaling van stikstof en koolstof inhoud.

Aquafaba functionele eigenschappen

8. Bepalen aquafaba viscositeit bij 25 ° C, met behulp van een nr.2 shell cup.
   1. Dompel de shell cup in de aquafaba.
   2. Het opnemen van de tijd die nodig is voor de afvoer van de cup-¹¹. Een timer wordt gestart wanneer de cup werd opgetild aan de aquafaba en gestopt wanneer het verlaten van de cup stream stopt.
   3. De viscositeit van het aquafaba kan worden vastgesteld door een grafiek met de cup die gaat over van viscositeit en drainage tijd geleverd.
9. Schuimende capaciteit
   1. Meng de aquafaba oplossing (100 mL) in een roestvrij staalkom met een handmixer op de instelling van de netwerkoverdrachtssnelheid van 10 voor 2 min.
   2. Record het schuim volume onmiddellijk na het mengen van 100 mL van de oplossing aquafaba als V_f100 door het plaatsen van het schuim in een gegradueerde maatbeker.
   3. Laat het schuim te staan en droog na verloop van tijd te observeren schuim stabiliteit en een steekproef van gedroogde schuim te verkrijgen.

Kleur Parameters van kikkererwten zaad

10. Willekeurig selecteren kikkererwten zaad uit elke kan voor bepaling van de kleur.
11. Kalibreer de Hunter lab colorimeter met behulp van wit, zwart en referentie standaarden vóór metingen.
12. Kleur coördineren waarden worden vastgesteld door de CIE Lab systeem¹², met inbegrip van de L (positieve vertegenwoordigt wit en 0 vertegenwoordigt donker), een (positief is rood en negatieve is groen), en b (positieve is geel en negatieve is blauw) in drievoudige met daglicht 65°.

Eiwitten en koolstofgehalte

13. Bepalen eiwit en koolstof inhoud door verbranding met behulp van een elementaire analyzer-¹³. Gehalte aan andere melkeiwitten wordt geschat als stikstofgehalte 6,25¹⁴vermenigvuldigd.

Vochtgehalte

14. Bepalen wat zaad en aquafaba vocht inhoud door verwarming van de monsters bij 100 ± 2 ° C voor 16-18 h in een droogrek oven¹⁵.

NMR spectrometrie

15. Bereiding van de monsters
    1. Centrifugeer vóór spectrometrie, aquafaba monsters bij 9200 × g gedurende 10 minuten. Na het centrifugeren, door het supernatant te passeren door een 0,45 µm spuit filter (25 mm spuit filter met polytetrafluorethyleen (PTFE) membraan). Pipetteer van de monster aquafaba (0.4 mL) in een NMR buis wuth 50 mg toegevoegd deuteriumoxide binnen en onderwerp het ingewogen analysemateriaal NMR.
    2. Voor de gedroogde schuim steekproef die hierboven worden beschreven, het monster (25 mg) is in deuteriumoxide (500 mg) en de oplossing is onderworpen aan NMR analyse.
    3. Leg alle monsters voor ¹³C-NMR en ¹H-NMR in afgetopte 5 mm NMR buizen. Voeg deuteriumoxide en 3-(trimethylsilyl) propionzuur-2,2,3,3-d₄ zuur natriumzout (TMSP) aan elke buis NMR om een oplosmiddel lock signaal en fungeren als een interne standaard, respectievelijk.
16. NMR voorwaarden
    1. Verwerven van proton NMR spectra met een 500 MHz NMR of soortgelijk hoge veld NMR spectrometer) met ten minste 16 scans per spectrum met behulp van een water program onderdrukking zoals de dubbele puls veld kleurovergang spin echo proton NMR (DPFGSE-NMR) pulse reeks¹⁶.
    2. Aanpassen van de spectrale verschuiving plaats van de TMSP piek bij 0 ppm vervolgens de integratie software gebruiken voor het bepalen van de relatieve hoeveelheden van stoffen aanwezig.

Elektroforese

Opmerking: Voor deze stap, aquafaba dat het meest stabiele schuim (merk H leverde) is geselecteerd. Dit merk bevatte geen zout.

17. Bereiding van de monsters
    1. Invoering van aquafaba naar het bovenste reservoir van drie centrifugaal geregenereerde cellulose ultrafiltratie apparaten elk met verschillende moleculair gewicht snijden offs (MWCOs) of 3, 10, 50 kDa.
    2. Plaats de centrifugaal filter-eenheden in een geschikte centrifuge bij 4 ° C en centrifuge op 3900 × g gedurende 2 uur om te verkrijgen van de bovendrijvende substantie en retentate breuken. Het supernatant breuken werden gebruikt voor ¹H-NMR analyse van kleinere moleculen in de afwezigheid van hoger molecuulgewicht (MW) soorten. De 3 kDa membraan retentate breuk werd gebruikt voor elektroforetische scheiding als men geloofde dat dit membraan de meeste eiwitten behouden zou.
    3. Schatten van de eiwitgehalten van beide supernatans en retenate met behulp van een gemodificeerde Bradford methode met behulp van bovien serumalbumine als een standaard¹⁷.
    4. Leg monsters van supernatant en retentate breuken in Eppendorf buizen en onder voorbehoud van deze fracties te schudden met een frequentie van 25 per s (10 min) in een geschikt shaker¹⁸. Observeer de geschud oplossing om te bepalen als een schuim is gevormd uit de schudden.
    5. Los van de retentate door 2,0 mL gedestilleerd water toe te voegen aan de ultrafiltratie apparaat voor een tweede behandeling van het centrifugeren te bereiken diafilteration. Het apparaat ultrafiltratie onderworpen aan een tweede centrifugeren bij 4 ° C en 3900 × g gedurende 2 uur.
    6. Meng de retentate (0,025 g) met 1 mL of 0,02 M Tris-HCl pH 7.4-fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) pH 7.4 te ontbinden van eiwit.
    7. Centrifugeer het mengsel bij 21000 x g gedurende 1 minuut.
    8. Gebruik het supernatant om eiwitgehalte met behulp van de gewijzigde Bradford zoals eerder vermeld.
18. Elektroforetische scheiding
    Opmerking: De 3 kDa MWCO membraan retentate (zie hierboven) is onderworpen aan elektroforetische scheiding met behulp van natrium dodecyl sulfaat-polyacrylamide gelelektroforese (SDS-pagina).
    1. Bereiden van polyacrylamide gels met behulp van een oplossend polyacrylamidegel van 15% en een stapelvolgorde polyacrylamidegel van 5%.
    2. Een steekproef van 20 µg eiwit toepassen op één rijstrook van de gel en de PageRuler Prestained eiwit Ladder met een bereik van 10-170 kDa tot een aparte polyacrylamidegel lane.
    3. Onverminderd de gels een elektrische stroom in een mini eiwit Tetra cel systeem zoals gewijzigd van Laemmli (1970)¹⁹. Gel voor elektroforese bedrijfsomstandigheden, kleuring, en destaining Volg Ratanapariyanuch et al. (2012) ²⁰.

Peptide massa vingerafdrukken

Opmerking: Snijd bands uit de SDS-pagina gel van 3 kDa retentate (MWs van ongeveer 8, 10, 13, 14, 15, 20, 22, 31, 37, 55 en 100 kDa) voor de spijsvertering van de trypsine volgens Ratanapariyanuch et al. (2012) ²⁰ en massa spectrale analyses uit te voeren.

19. In-gel spijsvertering
    1. De vlekken van de bands tweemaal door het onder te dompelen in 100 µL van 200 mM Ammoniumbicarbonaat (NH₄HCO₃) in 50% acetonitril (ACN) en Incubeer bij 30 ° C gedurende 20 minuten.
    2. Na de voltooiing van de kleuring, behandeling van de monsters van de gel bij ACN (100 µL) voor 10 min en vervolgens droog onder vacuüm, met behulp van een centrifugaal vacuümverdamper, gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur.
    3. De monsters van gedroogde gel in 100 µL van 10 mM dithiothreitol (DTT) in 100 mM NH₄HCO₃ oplossing onderdompelen en Incubeer bij 56 ° C gedurende 1 uur.
    4. Verwijder overtollige vermindering buffer en te vervangen door 100 µL alkylerende buffer [100 mM iodoacetamide in de Spectrometrie van de massa (MS) rang water].
    5. Incubeer de gel monsters bij kamertemperatuur in het donker gedurende 30 minuten.
    6. Wash gel monsters tweemaal met 200 mM NH₄HCO₃ (100 µL), krimpen de gels door ze onder te dompelen in ACN (100 µL), opnieuw zwellen de gels met 200 mM NH₄HCO₃ (100 µL) en weer krimpen door de behandeling van bij ACN (100 µL).
    7. De ACN uitlekken en drogen van de monsters van de gel onder vacuüm in een centrifugaal vacuümverdamper gedurende 15 minuten.
    8. Opnieuw zwellen gedroogde gel monsters met behulp van 20 µL trypsine buffer (50 ng/µL trypsine in 1:1,200 mM NH₄HCO₃: trypsine stockoplossing) gevolgd door toevoeging van 30 µL van 200 mM NH₄HCO₃ aan elk monster.
    9. Incubeer monsters op een Thermomixer's nachts bij 30 ° C met schudden bij 300 omwentelingen per minuut.
    10. Stop de trypsine spijsvertering reactie door toevoeging van 1/10 van het uiteindelijke volume (volume van mengsel na stap 8) 1% trifluoracetic zuur en de al peptiden uittreksel uit gel monsters met 100 µL van 0,1% trifluoracetic zuur in 60% ACN en droog onder vacuüm met behulp van een centrifugaalpomp vacuümverdamper.
    11. Bewaar al peptiden in-80 ° C vóór de massaspectrometrische analyse.
20. Massaspectrometrie
    1. Reconstrueren al peptiden door 12 µL van MS rang water toe te voegen: ACN: mierenzuur (97:3:0.1, v/v) en vervolgens vortex gedurende 1 tot 2 minuten te ontbinden peptiden.
    2. Centrifugeer de resulterende oplossing bij 18.000 g gedurende 10 minuten bij 4 ° C.
    3. Oplossing aliquots (10 µL) overbrengen in MS flesjes vloeibare chromatografie-tandem massaspectrometrie (LC-MS/MS) p.a. op een vierpolige time-of-flight (QTOF)-massaspectrometer uitgerust met een vloeibare chromatografie-instrument en een LC-MS-interface.
    4. Uitvoeren van peptide van de gaschromatografische scheiding met behulp van een hoge capaciteit HPLC-Chip: bestaande uit een 360 nL verrijking kolom en een analytische kolom van 75 µm × 150 mm, beide boordevol C18-A, 180 Å, 3 µm stationaire fase.
    5. Monsters op de kolom van de verrijking met 0,1% mierenzuur in water bij een debiet van 2.0 µL/min. laden.
    6. Monsters van de verrijking kolom overbrengen naar de analytische kolom.
    7. Peptide scheiding verkeren: een lineaire gradiënt oplosmiddel systeem bestaande uit oplosmiddel een (0,1% mierenzuur in water) en oplosmiddel B (0,1% mierenzuur in ACN). Het lineaire verloop begint met 3% oplosmiddel B dat tot 25% oplosmiddel B meer dan 50 min stijgt. Vervolgens stijgt oplosmiddel B van 25 tot 90% meer dan 10 min op een debiet van 0,3 µL/min.
    8. Verwerven van positieve-ion electrospray massa spectrale gegevens met behulp van een capillaire spanning vastgesteldop 1900 V, het fragment ion vastgesteldop 360 V en de drogende gas (stikstof) ingesteld op 225 ° C met een debiet van 12.0 L/min.
    9. Spectrale resultaten verzamelen over een massale bereik van 250-1700 (massa/heffing; m/z) met een scansnelheid van 8 spectra/s. MS/MS verzamelen gegevens over een bereik van 50-1700 m/z en de breedte van een set isolatie van 1.3 atomaire massa-eenheden. Selecteer de top 20 meest intense voorloper ionen voor elke scan MS voor tandem MS met een actieve uitsluiting van 0,25 min.
21. Eiwit identificatie
    1. Spectrale gegevens omzetten in een massa/heffing data-formaat met behulp van Agilent MassHunter kwalitatieve analysesoftware.
    2. Tegen de UniProt Cicer arietinum (kikkererwten) database, met behulp van SpectrumMill als de zoekmachine database gegevens verwerken.
    3. Zoekparameters zoals een fragment massa fout van 50 ppm, een bovenliggende massa fout van 20 ppm, trypsine decollete specificiteit en carbamidomethyl als een vaste variant van cysteïne bevatten.

Resultaten

Elk blikje kikkererwten heet om aan te geven van de ingrediënten die worden toegevoegd tijdens het inblikken. Ingrediënten opgenomen water, kikkererwten, zout en dinatrium ethyleendiamine Dinatriumethyleendiaminetetra-azijnzuuroplossing (NA2EDTA). Bovendien werden twee blikjes aangeduid als "calciumchloride kan bevatten". Drie verschillende voering kleuren werden waargenomen; witte, heldere gele en metallic (tabel 1).

Discussie

In dit onderzoek, hebben we gevonden die aquafaba van de kikkererwten uit verschillende commerciële bronnen produceert schuimen die in zowel de eigenschappen (volume en stabiliteit van schuim) en de chemische samenstelling variëren. Was er een positieve correlatie tussen aquafaba viscositeit en vochtgehalte. Verhoging van de omvang van de schuim (V_f100) was niet gerelateerd aan deze parameters. Additieven, zoals zout en dinatrium-EDTA kan viscositeit onderdrukken en stabiliteit schuim zoals aquafaba van kikker...

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Freeze Dryer
Stoppering Tray Dryer	Labconco Inc.	7948040
Mixer
Stainless steel hand mixer	Loblaws	PC2200MR
Viscosity Measurement
Shell cup No. 2	Norcross Corp.
Color Measurement
Colorflex HunterLab spectrophotometer	Hunter Associates Laboratory Inc.
Protein and Carbon Contents
Elemental analyzer	LECO Corp.	CN628
NMR Spectrometry
Spectrafuge 24D	Labnet International Inc.
Syringe filters	VWR International	CA28145-497	25 mm, met 0,45 µm PTFE membraan
Deuterium oxide	Cambridge Isotope Laboratories Inc.	7789-20-0
3-(trimethylsilyl)propionic-2,2,3,3-d4 acid sodium salt	Sigma-Aldrich	169913-1G
Bruker Avance 500 MHz NMR spectrometer	Bruker BioSpin
TopSpin 3.2 software	Bruker BioSpin GmbH
Electrophoresis
Regenerated cellulose membrane	Millipore Corp.		3, 10, 50 kDa (MWCO)
Centrifugal filter unit	Millipore Corp.
Benchtop centrifuge	Allegra X-22R, Beckman Coulter Canada Inc.
Mixer Mill MM 300  bead mill	F. Kurt Retsch GmbH & Co. KG
Eppendorf centrifuge 5417C	Eppendorf
Phosphate buffered saline, pH 7.4	Sigma-Aldrich	P3813-10PAK
Tris-HCl buffer pH 7.4	Sigma-Aldrich	T6789-10PAK
PageRuler Prestained Protein Ladder	Fisher Scientific
Mini-Protein Tetra Cell system	BioRad
Peptide Mass Fingerprinting
Thermo-Savant SpeedVac	BioSurplus		Centrifuge-vacuümverdamper
Trypsine buffer			20 µL trypsine in 1 mM zoutzuur en 200 mM NH4HCO3
Iodoacetamide	Sigma-Aldrich	I1149-5 g
Trifluorazijnzuur	Fluka	BB360P050
Acetonitrile	Fisher Scientific	L14734
Formazijnzuur	Sigma-Aldrich	33015-500mL
Massaspectrometrie-vial	Agilent Technologies Canada Ltd.
Agilent 6550 iFunnel quadrupole time-of-flight massaspectrometer	Agilent Technologies Canada Ltd.		Agilent 1260-serie LC-instrument en Agilent Chip Cube LC-MS-interface
HPLC-Chip II: G4240-62030 Polaris-HR-Chip_3C18			360 nL verrijkingskolom en 75 µm × 150 mm analytische kolom, beide gevuld met Polaris C18-A, 180Å, 3 µm stationaire fase.
Agilent MassHunter Qualitative Analysis Software	Agilent Technologies Canada Ltd.
SpectrumMill data extractors	Agilent Technologies Canada Ltd.