Hier presenteren we een protocol voor het gebruik van echografie-geleide injectie van neuroblastoom (NB) en de Ewing sarcoom (ES) cellen (gevestigde cellijnen en patiënt afkomstige tumorcellen) op biologisch relevante sites maken van betrouwbare preklinische modellen voor kanker onderzoek.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Gebruik van echografie begeleide weefsel geleide cellulaire implantatie voor de oprichting van biologisch relevante uitgezaaide Tumor Xenografts
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Preklinische testen van antikanker therapieën, is afhankelijk van relevante xenograft modellen die de aangeboren tendensen van kanker na te bootsen. Voordelen van standaard subcutane flank modellen zijn procedurele gemak en de mogelijkheid om monitor tumor progressie en reactie zonder invasieve imaging. Dergelijke modellen zijn vaak inconsistent in translationeel klinische proeven en hebben beperkte biologisch relevante kenmerken met lage neiging tot metastase, want er een gebrek aan een eigen communicatie is. Ter vergelijking: orthotopic xenograft modellen op sites van de oorspronkelijke tumor is gebleken nabootsen van de communicatie van de tumor en repliceren belangrijk ziektekenmerken zoals verre metastatische verspreiding. Deze modellen vereisen vaak vervelend chirurgische ingrepen met langdurig verdoving tijd en herstel. Om aan te pakken dit, hebben kanker onderzoekers onlangs gebruikt echografie-geleide injectie technieken om kanker xenograft modellen voor preklinische experimenten, die zorgt voor snelle en betrouwbare inrichting van weefsel geleide lymfkliertest modellen. Echografie visualisatie biedt ook een noninvasive methode voor het longitudinale beoordeling van tumor engraftment en groei. Hier beschrijven we de methode voor echografie-geleide injectie van kankercellen, gebruik makend van de bijnier voor NB en renale sub capsule voor ES. Deze minimaal invasieve benadering overwint vervelend open chirurgie implantatie van kankercellen in weefsel-specifieke locaties voor groei en metastase en voorbij morbide herstel periodes. We beschrijven het gebruik van zowel bestaande cellijnen als patiënt afgeleide cellijnen voor orthotopic injectie. Pre-en-klare commerciële kits zijn beschikbaar voor tumor dissociatie en luciferase tagging van cellen. Injectie van celsuspensie met behulp van beeld-begeleiding biedt een minimaal invasieve en reproduceerbare platform voor het maken van preklinische modellen. Deze methode wordt gebruikt om te maken van betrouwbare preklinische modellen voor andere vormen van kanker zoals lever, blaas en alvleesklier voorbeeldig voor haar onbenut potentieel voor talrijke kanker modellen.
Inleiding
Dierlijke xenograft modellen zijn essentiële instrumenten voor preklinische studies van nieuwe antikanker therapieën. Standaard lymfkliertest xenografts is afhankelijk van subcutane flank innesteling van cellen, een efficiënt en gemakkelijk toegankelijke site voorziet in toezicht op de tumorgroei. Het nadeel van subcutane modellen is hun gebrek aan tumor-specifieke biologische kenmerken, die hun potentieel beperken kunnen voor het metastaseren1. Dergelijke beperkingen zijn overwonnen door het gebruik van orthotopic xenografts in welke tumor cellen worden geaccepteerd op inheemse weefsel sites, gemetastaseerde potentieel2voorzien van een relevante communicatie. Orthotopic xenograft modellen originele biologische kenmerken behouden en betrouwbare modellen voorzien preklinische drug discovery3,4. De kankercellen gebruikt voor weefsel-geleide innesteling zijn bestaande cellijnen of patiënt-afgeleide cellen van de patiënt tumoren. Xenografts vastgesteld van kanker cellijnen kunnen hoge genetische afwijking van de primaire tumor ten opzichte van patiënten afgeleide xenografts5vertonen. Gezien dit, de oprichting van patiënt-afgeleide orthotopic xenografts de voorkeur standaard geworden voor het testen van nieuwe therapeutics in kanker drugontdekking.
In de pediatrische kanker neuroblastoom (NB), orthotopic xenograft modellen recapituleren primaire tumor biologie en metastase naar typische sites van NB verspreid6,7te ontwikkelen. NB ontwikkelt in de bijnier of langs de sympathieke keten van paravertebral. De meest voorkomende methoden van orthotopic implantatie vereisen open trans-abdominale chirurgische procedures. Deze methoden zijn vaak saai, hebben hoge dierlijke morbiditeit en complexe herstel periodes. Hoge resolutie echografie is onlangs gebruikt voor weefsel-geleide implantatie van tumorcellen in de ontwikkeling van verschillende lymfkliertest modellen voor kanker onderzoek8,9. De techniek is betrouwbare, reproduceerbare, efficiënt en veilig voor de vaststelling van relevante uitgezaaide tumor xenografts10,11.
De oprichting van pediatrische kanker xenografts door echografie-geleide doel orgel lokalisatie en naald implantatie van cellijnen en patiënt afkomstige tumorcellen is aangetoond dat11. De techniek werd gebruikt voor NB gericht op de lymfkliertest bijnier. Het Ewing sarcoom (ES) is voornamelijk een ossaal kanker, vaak gezien in de lange beenderen zoals dijbeen en het bekken beenderen12. Aanvraagrapporten hebben aangetoond dat om te bepalen of de groei van een overwegend werden kanker haalbaar in renal weefsel is, een renale sub kapselvorming locatie werd gekozen voor orthotopic implantatie13. Renale sub kapselvorming cel innesteling van tumorcellen is gebruikt als een veelbelovende model te bestuderen van spontane metastasen voor ES14.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alles werd gedaan in overeenstemming met de Universiteit van Michigan institutionele Review Board (HUM 00052430) en voldoet aan de procedures die zijn goedgekeurd door de Commissie van de Universiteit op gebruik en verzorging van dieren (UCUCA). De eenheid voor laboratorium voor dierlijke geneeskunde (ULAM) overzag dierenverzorgers.
Alle werk werd gedaan met de goedkeuring van de Universiteit van Michigan institutionele Review Board (HUM 00052430) en voldoet aan alle menselijke onderzoek ethiek Reglement. Menselijke cellen worden beschouwd als een potentieel biohazardous materiaal, dus volg alle speciale voorzorgsmaatregelen en passende bioveiligheid praktijken die zijn vereist voor uw instelling. NSG muizen zijn ernstig immuungecompromitteerde en vatbaar voor ziekten veroorzaakt door bacteriën die gewoonlijk worden aangetroffen in de omgeving.
Gebruik altijd strenge steriele techniek bij de voorbereiding van de materialen voor implantatie en het uitvoeren van de injecties.
1. de celkweek
- Gevestigde menselijke NB cellijnen (SH-SY5Y SK-N-BE2 en IMR32) groeien in minimaal essentiële medium, aangevuld met 10% foetale runderserum, 2 mM glutamine, 100 eenheden/mL penicilline en 100 μg/mL streptomycine. Een aanvulling op de cellen van de IMR32 verder met 1 mM pyruvaat en 0,075% NaHCO3. Handhaven van alle cellen bij 37 ° C, 5% CO2 en 70-80% confluence.
- Groeien menselijke ES cellijnen (TC32, A673, CHLA-25 en A4573) in RPMI medium aangevuld met 10% foetale runderserum en 6 mM L-glutamine. Handhaven van alle cellen bij 37 ° C, 5% CO2 bij 70-80% samenvloeiing.
- Stuur alle cellijnen voor verificatie.
Opmerking: Cel verificatie wordt gedaan op een externe faciliteit, verwijzen wij u naar bevestigingen.
2. voorbereiding van de primaire Tumor van de patiënt-afgeleide cellen
- Met de patiënt toestemming en instemming weggegooid oogst menselijke NB tumor weefsel van patiënten die een chirurgische resectie voor lokale controle en vervoer naar het laboratorium in weefsel opslagoplossing voor behoud.
Opmerking: Alle patiënten monsters zijn-geïdentificeerd en behandeld overeenkomstig de richtsnoeren van de institutionele Review Board. - Genereren een celsuspensie van één patiënt afkomstige kanker (UMNBL001, UMNBL002) van de tumor weefsel met behulp van een tumor dissociatie kit. Ongeveer 0,5 g tumor overbrengen in een 100 mm cel cultuur schotel met 5 mL RPMI buffer, 200 µL van enzym H, 100 µL van enzym R en 25 µL van enzym A uit de menselijke tumor dissociatie kit.
- Gehakt van de tumor in kleine stukjes (elke 2-4 mm) met behulp van schaar en pincet weefsel. Meng deze fragmenten met de oplossingen in stap 2.2.
- Pipetteer van het mengsel van de tumor in een dissociator buis en sluit de tube. Omkeren van de buis en hechten op de mouw van de dissociator van het weefsel. Op het programma h_tumor_01 uitvoeren.
- Incubeer de tumor celsuspensie verkregen boven bij 37 ° C gedurende 1 uur op een roterende rek met intermitterende verpulvering elke 15 min.
- De celsuspensie overbrengen in een nieuwe conische tube van 50 mL en voeg 10 mL van RPMI. Centrifugeer de celsuspensie bij 314 x g gedurende 5 min.
- Verwijder het supernatant en Suspendeer de pellet in 5 mL RPMI. Deze oplossing passeren door een zeef van 40 µm cel en het verzamelen van de gespannen oplossing in een conische buis van verse 50 mL. Deze zeef eenmaal met 5 mL van RPMI media wassen en centrifugeren van het mengsel bij 314 x g gedurende 5 min voor het verzamelen van een pellet.
- Het meten van de celdichtheid met behulp van een hemacytometer15. Opschorten van de pellet in RPMI om een eindconcentratie van 4 × 105 cellen/10 µL van bovenaf verkregen. Neem 5 µL van deze celsuspensie en 5 µL van matrigel te maken 10 µL van cel oplossing voor elke injectie.
Opmerking: Hoeveelheid RPMI gebruikt hangt af van de cel dichtheid meting. Bijvoorbeeld, als de gemeten celdichtheid van de verkregen pellet 4 x 105 cellen is, Suspendeer de pellet in 10 µL van RPMI.
3. luciferase Tagging van kankercellen
- Breng 10 mL transductie media met 5 mL van virale supernatant EF1a-Luc2-IRES-mCherry en 5 mL van de media van de cel van de stam. Voeg 7,5 µL van 1 x polybrene.
- Mix 5 × 10-6 kankercellen in signaaltransductie media en plaat in 100 mm ultra-lage bijlage plaat. Incubeer bij 37 ° C en 5% CO2 's nachts.
Opmerking: Zoals lage bijlage platen worden gebruikt, cellen zal niet houden aan de plaat. - Na 24u, brengen de 100 mm plaat met cellen onder weefselkweek motorkap en breng het mengsel in een conische tube van 15 mL. Centrifugeer de celsuspensie bij 314 x g gedurende 5 min om de cel-pellet. Wassen van de cel pellet een keer met 1 mL 1 x-fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) en het opschorten van de cel pellet in 1 mL HBSS met 1% foetale runderserum (FBS).
- Sorteren luciferase cellen op basis van GFP-positieve signaal op fluorescentie-activated cell sorting (FACS) analyse. Plaat de gesorteerde cellen op 100 mm Weefselkweek behandeld schotel en handhaven bij 70-80% samenvloeiing, 37 ° C en 5% CO2 totdat vereist.
- Luciferase signaal met luciferase assay kit te bevestigen. Plaat 10 x 104 gesorteerd op cellen per putje in een illuminometer compatibel 96 goed plaat en incubeer cellen 's nachts bij 37 ° C en 5% CO2. Na 24u, breng de 96 goed plaat op kamertemperatuur en Steady-Glo reagens toevoegen aan gekweekte media in putten in 1:1 verhouding. Cellen lyse voor 5 min en lezen van luminescentie in spectrofotometer toestaan.
- Breng de schotel van 100 mm onder de motorkap van een weefselkweek. Gooi het supernatant media. Wassen van de cellen een keer met 2 mL 1 x PBS.
- Voeg toe 2 mL trypsine van 0,25% en de 100 mm schotel terugkeren naar de incubator voor 2-3 min. Na 2-3 min, Controleer verdreven cellen onder de Microscoop en 8 mL van RPMI om te deactiveren trypsine toevoegen.
- Het verzamelen van de celsuspensie in een conische tube van 15 mL en centrifuge bij 314 x g gedurende 5 min om te krijgen een pellet. Verwijder het supernatant. Wassen van de cel pellet met 1 mL 1 x PBS, Suspendeer de pellet in 5 mL van RPMI en bepalen van de celdichtheid met behulp van een hemacytometer15. Centrifugeer yhe resterende cell oplossing bij 314 x g gedurende 5 min te verkrijgen van een pellet.
- Suspendeer de pellet in RPMI tot een concentratie van 4 x 105 cellen/10 µL aan. Neem 5 µL van de celsuspensie en 5 µL van matrigel te maken 10 µL van cel oplossing voor elke injectie.
4. echografie begeleide bijnier (NB) of renale Sub Capsule (ES) implantatie
Opmerking: Alle echografie procedures worden uitgevoerd met een hoge resolutie in vivo imaging systeem. Voor de beschreven procedures, werd de transducer, die een center frequentie van 40 MHz en een bandbreedte van 22-55 MHz heeft gebruikt.
- 6-8-week-oude immuun-deficiënte NSG muizen voor alle injectie procedures gebruiken.
- Chill de matrigel en gesteriliseerde met autoclaaf Hamilton spuiten uitgerust met een 27G naald (1.25"), en 22G katheters (externe diameter van 0,9 mm, 25 mm lengte) 's nachts bij 4 ° C.
- Plaats de mobiele oplossing bereid in stap 3 op ijs.
- Anesthetize van de muizen in een inductie-kamer met 2% Isofluraan in O2 geleverd in 2 L/min.
Opmerking: Voldoende verdoving wordt bepaald met het gebrek aan actieve beweging en het onderhoud van de spontane ademhaling. - Zodra verdoofd, ontharen de rug en de flank van de dieren met behulp van haar verwijdering lotion (zoals Nair) en een scheerapparaat.
- Overbrengen in het dier het imaging platform met abdominale zijde naar beneden, waar de neus van het dier wordt geplaatst in een neuskegel en beveiligd terwijl het inademen van Isofluraan.
- Plaats optische zalf in de ogen van het dier om te voorkomen dat het drogen. Tape de muis om te voorkomen dat elke onbedoelde beweging.
- Identificeer de lymfkliertest lever, vena cava, milt, linker nier en aangrenzende linker bijnier met behulp van echografie visualisatie.
- Steriele handschoenen, masker en GLB gebruiken voor persoonlijke bescherming en onderhoud van steriele omstandigheden. Onder echografie-begeleiding, zachtjes invoegen een 22G katheter via de huid en spier terug rechtstreeks in de linker bijnier klier te voorzien in een kanaal voor cellulaire injectie. Verwijder de naald en laat de katheter op zijn plaats.
- Belasting een gekoeld Hamilton spuit uitgerust met een lijst naald met 10 µL van cell oplossing en begeleiden van de spuit stereotactically via de katheter gepositioneerd in het midden van de bijnier.
- Het injecteren van de cellen in het gerichte bijnier weefsel. Laat de naald staan voor 1-2 min om de matrigel in te stellen. Verwijder langzaam de naald, gevolgd door het verwijderen van de katheter.
- Plaats de muizen terug in hun kooi en ervoor te zorgen dat de muis voldoende bewustzijn te handhaven sternale lighouding herwint.
Opmerking: vanwege de minimaal invasieve aard van deze techniek, post procedurele pijn is minimaal, maar nog steeds gecontroleerd op een dagelijkse basis met muizen gezondheid controles. "moet worden gevolgd met een zin:"als onverwachte tekenen van pijn of leed worden geïdentificeerd in de loop van een experiment, overleg plegen met uw institutionele veterinaire hondensteun voor informatie over analgesie of andere medische zorg.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Met behulp van de procedures die zijn gepresenteerd, werd echografie-geleide implantatie van NB cellen in de bijnier gedaan in een speciale procedure kamer is voorzien van een verwarmd chirurgische tabel. Arm en voet pads werden geplaatst voor het toezicht op lymfkliertest hartactiviteit (figuur 1A). Het dier bleef narcose onder Isofluraan met behulp van de neus inademen. Met een hoge resolutie ultrasone sonde, werd de linker nier geïdentificeerd met de bijni...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Echografie-geleide innesteling van cellen NB en ES is een efficiënte en veilige methode om betrouwbare lymfkliertest xenografts voor preklinische studies in de Kankerbiologie. Cruciaal voor het succes van echografie-geleide weefsel-gerichte innesteling is de aanwezigheid en beschikbaarheid van geschoold personeel met deskundigheid in het anatomisch lokaliseren van het orgel van belang en stereotactische injectie van tumorcellen.
De dissociatie van tumor weefsel bleek te zijn een cruciale stap ...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben geen informatieverschaffing.
Dankbetuigingen
Dit werk kreeg steun van het Robert Wood Johnson Foundation/Amos medische faculteit ontwikkeling programma, Taubman Research Institute, en de sectie Pediatrische Heelkunde, The University of Michigan. De auteurs willen Kimber Converso-Baran en Dr. Marcus Jarboe bedanken voor de hulp met echografie injectie procedures en het imaging platform. We bedanken Paul Trombley voor zijn hulp met afbeeldingen van de figuur. Wij danken ook de afdeling Radiologie op de Universiteit van Michigan voor het gebruik van het Center for Molecular Imaging en de Tumor Imaging Core, die gedeeltelijk worden ondersteund door uitgebreide kanker centrum NIH, verlenen P30 CA046592. De Universiteit van Michigan fysiologie fenotypering Core die gedeeltelijk door de subsidiefinanciering uit het NIH (OD016502) en het Frankel cardiovasculair centrum wordt ondersteund. Cel lijn verificatie werd gedaan bij IDEXX RADIL Bioresearch faciliteiten, Columbia, MO. Wij danken Tammy Stoll, Dr. Rajen Mody en de Mott stevig Tumor oncologie-programma. Onze patiënten en families zijn dankbaar erkend voor hun inspiratie, moed en continue ondersteuning van ons onderzoek.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Muizen | |||
| NOD-SCID | Charles River | 394 | |
| NSG | The Jackson Laboratory | 5557 | |
| Cellijn | |||
| NB | |||
| IMR-32 | ATCC | CCL-127 | Gevestigde humane neuroblastoomcellijn |
| SH-SY5Y | ATCC | CRL-2266 | Gevestigde humane neuroblastoomcellijn |
| SK-N-Be2 | ATCC | CRL-2271 | Gevestigde humane neuroblastoomcellijn |
| ES | |||
| TC32 | COGcell.ORG | Gevestigde humane Ewing's Sarcoma-cellijn | |
| A673 | COGcell.ORG | Gevestigde humane Ewing's Sarcoma-cellijn | |
| CHLA-25 | COGcell.ORG | Gevestigde humane Ewing's Sarcoma-cellijn | |
| A4573 | COGcell.ORG | Gevestigde humane Ewing's Sarcoma-cellijn | |
| Cellijnmedia | |||
| RPMI | Life Technologies | 11875-093 | |
| Matrigel | BD BioSciences | 354234 | |
| Dissociatie | |||
| Dissectiegereedschap | KentScientific | INSMOUSEKIT | |
| Human Tumor Dissociation Kit | MACS Miltenyi Biotec | 130-095-929 | |
| gentleMACS dissociator | MACS Miltenyi Biotec | 130-093-235 | |
| gentleMACS C tubes | MACS Miltenyi Biotec | 130-096-334 | |
| Celzeef | Corning | 431751 | |
| Luciferase Tagging | |||
| Lenti-GFP1 virus | University of Michigan, Vector Core | Luciferase Virus | |
| Steady Glo-Luciferase Assay Kit | Promega | E2510 | |
| Bioluminescentie Beeldvorming | |||
| Ivis Spectrum Imaging System | PerkinElmer | 124262 | |
| D-Luciferine | Promega | E160X | |
| Verdoving | |||
| Ingeademde Isofluran | Piramal Critical Care Inc | 66794-0017-25 | |
| Echtijden geleide injectie | |||
| Vevo 2100 High Resolution Imaging | Vevo | 2100 | |
| Hamilton Spritzen (27 gauge naald) | Hamilton | 80000 | |
| 22 Gauge Angiocatheter | BD Biosciences | 381423 | |
| Optische zalf | Major Pharmaceuticals | 301909 | |
| Nair | Church & Dwight Co | Haarverwijderingsmiddel | |
| Aquasonic 100 Ultrasound Transmissie gel | Parker | Ultrasound gel | |
| Histologie | |||
| CD99 | DAKO | M3601 | Primaire Antilichaam |
| Tyrosine Hydroxylase | Sigma-Aldrich | T2928 | Primaire Antilichaam |
| Secundaire HRP-Polymeer antilichaam | Biocare | BRR4056KG | |
| Diverse | |||
| 10 mL Pipetten | Fisher Scientific | 13-676-10J | |
| 5 mL Pipetten | Fisher Scientific | 13-676-10H | |
| 1.5 mL Microcentrifuge tubes | Fisher Scientific | 05-408-129 | |
| P1000 pipet | Eppendorf | 3120000062 | |
| P200 pipet | Eppendorf | 3120000054 | |
| P1000 pipettips | Fisher Scientific | 21-375E | |
| P200 pipettips | Fisher Scientific | 21-375D | |
| Portable pipet aid | Drummond | 4-000-101 | |
| Digitale weegschaal voor dieren | KentScientific | SCL-1015 | |
| Sluiploodjes | Fisher Scientific | 06-664-16 | |
| 6well low attachment platen | Corning | 07-200-601 | |
| 10 cm Tissue Culture Treated Dishes | Fisher Scientific | FB012924 | |
| Polybrene | Sigma-Aldrich | TR-1003-G |
Referenties
- Sanmamed, M. F., Chester, C., Melero, I., Kohrt, H. Defining the optimal murine models to investigate immune checkpoint blockers and their combination with other immunotherapies. Ann Oncol. 27 (7), 1190-1198 (2016).
- Fidler, I. J., Hart, I. R. Biological diversity in metastatic neoplasms: origins and implications. Science. 217 (4564), 998-1003 (1982).
- Bibby, M. C. Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation. Eur J Cancer. 40 (6), 852-857 (2004).
- Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. Orthotopic Models are Necessary to Predict Therapy of Transplantable Tumors in Mice. Cancer Metastasis Rev. 17 (3), 279-284 (1998).
- Daniel, V. C., et al. A primary xenograft model of small-cell lung cancer reveals irreversible changes in gene expression imposed by culture in vitro. Cancer Res. 69 (8), 3364-3373 (2009).
- Khanna, C., Jaboin, J. J., Drakos, E., Tsokos, M., Thiele, C. J. Biologically relevant orthotopic neuroblastoma xenograft models: Primary adrenal tumor growth and spontaneous distant metastasis. In Vivo. 16 (2), 77-85 (2002).
- Stewart, E., et al. Development and characterization of a human orthotopic neuroblastoma xenograft. Dev Biol. 407, 344-355 (2015).
- Jäger, W., et al. Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts. J. Vis. Exp. (84), e51123(2014).
- Teitz, T., et al. Preclinical Models for Neuroblastoma: Establishing a Baseline for Treatment. PLoS ONE. 6 (4), e19133(2011).
- Braekeveldt, N., et al. Neuroblastoma patient-derived orthotopic xenografts retain metastatic patterns and geno- and phenotypes of patient tumours. International Journal of Cancer. 136 (5), 252-261 (2015).
- Van Noord, R. A., et al. Tissue-directed Implantation Using Ultrasound Visualization for Development of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts. In Vivo. 31 (5), 779-791 (2017).
- Vormoor, B., et al. Development of a Preclinical Orthotopic Xenograft Model of Ewing Sarcoma and Other Human Malignant Bone Disease Using Advanced In Vivo Imaging. PLoS ONE. 9 (1), e85128(2014).
- Hakky, T. S., Gonzalvo, A. A., Lockhart, J. L., Rodriguez, A. R. Primary Ewing sarcoma of the kidney: a symptomatic presentation and review of the literature. Ther Adv Urol. 5 (3), 153-159 (2013).
- Cheng, H., Clarkson, P. W., Gao, D., Pacheco, M., Wang, Y., Nielsen, T. O. Therapeutic Antibodies Targeting CSF1 Impede Macrophage Recruitment in a Xenograft Model of Tenosynovial Giant Cell Tumor. Sarcoma. 2010, 174528(2010).
- JoVE Science Education Database. Using a Hemacytometer to Count Cells. Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , JoVE. Cambridge, MA. (2018).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
