Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

De behandeling van de straling van Organotypic culturen van submandibulaire en Parotis speekselklieren modellen sleutel in vivo kenmerken

7.9K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/59484

⸱

17 mei 2019

 ,  ,  ,  , 
1Department of Nutritional Sciences, University of Arizona, 2Cancer Biology Graduate Interdisciplinary Program, University of Arizona, 3Department of Chemical Engineering, University of Arizona

In dit artikel

Samenvatting

Met behulp van driedimensionale organotypic culturen te visualiseren morfologie en functionele markers van speekselklieren kunnen nieuwe inzichten in de mechanismen van weefselbeschadiging na straling. Hier beschreven is een protocol bij sectie, cultuur, bestralen, vlek, en beeld 50 – 90 μm dikke speekselklier secties voorafgaand aan en na blootstelling aan ioniserende straling.

Samenvatting

Hyposalivation en xerostomie maken chronische orale complicaties die de kwaliteit van leven in hoofd-en nek kankerpatiënten die worden behandeld met radiotherapie verminderen. Experimentele benaderingen van het begrijpen van mechanismen van speekselklier dysfunctie en restauratie hebben zich gericht op in vivo modellen, die gehandicapt zijn door een onvermogen om systematisch screenen therapeutische kandidaten en efficiëntie in Transfectie mogelijkheid om specifieke genen te manipuleren. Het doel van deze speekselklier organotypic cultuur protocol is het evalueren van de maximale tijd van cultuur levensvatbaarheid en karakteriseren cellulaire veranderingen na ex vivo stralingsbehandeling. We gebruikten immunefluorescentie kleuring en confocale microscopie om te bepalen wanneer specifieke cel populaties en markers aanwezig zijn tijdens een 30-daagse cultuurperiode. Bovendien worden de cellulaire markers die eerder in in vivo stralings modellen worden gerapporteerd geëvalueerd in culturen die ex vivo worden bestraald. Moving Forward, deze methode is een aantrekkelijk platform voor snelle ex vivo beoordeling van muizen en menselijke speekselklier weefsel reacties op therapeutische middelen die de speeksel functie te verbeteren.

Inleiding

Een goede speekselklier functie is essentieel voor de mondgezondheid en wordt gewijzigd na hoofd en nek kankerbehandeling met radiotherapie1. In 2017, bijna 50.000 nieuwe gevallen van hoofd en hals kanker werden gerapporteerd in de Verenigde Staten2. Wegens de weefsel-beschadigende en vaak onomkeerbare gevolgen van bestralingstherapie op het omringen van normale weefsels zoals speekselklieren, worden de patiënten vaak verlaten met strenge bijwerkingen en verminderde kwaliteit van het leven2,3, 4. Veelvoorkomende complicaties veroorzaakt door stralingsschade manifesteert zich in symptomen zoals xerostomie (het subjectieve gevoel van een droge mond), cariës, verminderde mogelijkheid om te kauwen en slikken, spraakstoornissen, en gecompromitteerd orale microbiomen2, 3 , 4. deze symptomen collectief kan leiden tot ondervoeding en verminderde overleving in de getroffen personen5. Terwijl speekselklier dysfunctie in deze populatie is goed gedocumenteerd, de onderliggende mechanismen van schade aan acinaire cellen zijn betwist, en er is weinig integratie tussen de verschillende diermodellen6,7.

De huidige methoden van het bestuderen van speekselklier functie en straling geïnduceerde schade omvatten het gebruik van in vivo modellen, onsterfelijke cel lijnen, twee-dimensionale (2-D) primaire cel culturen, en drie-dimensionale (3-D) salisphere culturen8, 9,10,11,12. Traditioneel, de modellen van de cel cultuur van vereeuwigde cel lijnen en 2-D culturen impliceren enige gelaagde cellen die op vlakke oppervlakten worden gekweekt en zijn waardevol voor snelle, gemakkelijke, en rendabele experimenten. Echter, kunstmatige cel cultuur voorwaarden kunnen veranderen de differentiatie status en fysiologische reacties van cellen blootgesteld aan verschillende omstandigheden, en de resultaten vaak niet te vertalen naar hele organisme modellen14,15. Bovendien vereisen de vereeuwigde cellen culturen modulatie van p53 activiteit, die voor de speekselklier reactie op de schade van DNA16,17kritiek is.

3-D salisphere culturen zijn verrijkt voor stam-en voorlopercellen in de vroege tijdpunten in de cultuur en zijn nuttig geweest voor het begrijpen van de stralingsgevoeligheid van deze subset van speekselklier cellen9,18. Een kritische beperking van al deze cultuur modellen is dat ze niet effectief zijn in het visualiseren van de 3-D structuur van de speekselklier, met inbegrip van de extracellulaire matrix (ECM) en cel-cel interacties over verschillende lagen, die cruciaal zijn in modulerende speeksel afscheiding15. De noodzaak van een methode die het gedrag van het weefsel als geheel omvat, maar kan ook worden gemanipuleerd onder laboratoriumomstandigheden om de effecten van de behandeling studie is noodzakelijk om verder te ontdekken de onderliggende mechanismen van straling geïnduceerde speekselklier Dysfunctie.

Live weefsel sectie en cultuur is gedocumenteerd eerder19,20 en wordt vaak gebruikt om hersenweefsel interacties studie21. In eerdere studies, parotis (PAR) speekselklier weefsel van muizen werd in deel op ongeveer 50 µm en gekweekt voor maximaal 48 h, en analyse van de levensvatbaarheid, celdood, en functie werd uitgevoerd daarna19. Su et al. (2016) uitgebreid op deze methodologie door kweken Human submandibulaire klieren (SMGs) in 35 µm of 50 µm voor 14 dagen20. De voorgestelde methode is een vooruitgang in dat het zowel parotis als submandibulaire speekselklieren omvat die bij 50 µm en 90 µm en evaluatie van de culturen 30 dagen worden deelgenomen. De capaciteit om een waaier van weefsel dikte te snijden is belangrijk in het evalueren van cel-cel en cel-ECM interactie die voor cellulaire processen met inbegrip van apicaal-basolaterale polariteit en innervatie voor afscheiding relevant zijn. Voorts werden de speekselklier plakken bestraald terwijl in cultuur om de haalbaarheid van dit cultuur model te bepalen om straling-veroorzaakte speekselklier schade te bestuderen.

Het doel van deze speekselklier organotypic cultuur protocol is het evalueren van de maximale tijd van cultuur levensvatbaarheid en karakteriseren cellulaire veranderingen na ex vivo stralingsbehandeling. Voor het bepalen van de maximale tijdsecties die levensvatbaar zijn post-dissectie, trypaanblauw blauwe kleuring, levende cel kleuring, en immunohistochemische kleuring voor celdood werden uitgevoerd. Confocale microscopie en immunefluorescentie kleuring werden gebruikt om specifieke cel populaties, morfologische structuren en niveaus van proliferatie te evalueren. Weefsel sectie culturen werden ook blootgesteld aan ioniserende straling om de effecten van straling op verschillende markers in dit 3-D model te bepalen. De inductie van celdood, cytoskelet verstoring, verlies van differentiatie markeringen, en compenserende proliferatie in bestraalde ex vivo culturen werden vergeleken bij vorige studies van in vivo modellen. Deze methodologie biedt een middel om de rol van cel-cel interacties na stralingsschade te onderzoeken en biedt een experimenteel model om de effectiviteit van therapeutische interventies efficiënt te evalueren (gen manipulaties of farmacologische agentia ) die mogelijk minder geschikt zijn voor in vivo modellen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. voorbereiding van vibratome

  1. Spray afneembare componenten van de vibratome met inbegrip van de buffer lade, blad gehechtheid, agarose blok mal, en laboratorium film met 70% ethanol, dan UV-steriliseren voor ten minste 30 min.
  2. Plaats en beveilig een extra vel laboratorium folie over de buffer lade om te voorkomen dat ijs vallen in.
  3. Vul de Ice kamer met crushed ice, verwijder het laboratorium film uit de buffer lade, en vul de buffer lade met 100 mL ijskoude 1x fosfaat buffered saline (PBS) oplossing aangevuld met 1% penicilline-streptomycine-AMPICILLIN (PSA).
  4. Plaats een roestvrijstalen scheermesje in de blad houder. Gebruik de schroevendraaier aan te scherpen/los en verander de hoek van het mes.

2. voorbereiding van weefselmonster in agarose blok en segmenteren met behulp van de vibratome

  1. Autoclaaf alle noodzakelijke dissectie en secties gereedschappen, waaronder tangen, scharen en penselen.
  2. Bereid 3% laag smeltpunt agarose in steriele 1x PBS en microgolf voor tot agarose in oplossing oplost. Zorg ervoor dat de oplossing niet koken over en draai de fles periodiek te mengen.
    Nota: Verhinder de laag-smeltende agarose van het stollen door het in een warmwaterbad te houden. De laag-smelting agarose is vloeistof bij 37 °C en reeksen bij 25 °C. Nochtans, zou het waterbad onder 40 °C moeten zijn om agarose rond het weefsel bij fysiologische temperatuur te gieten.
  3. Isoleer speekselklieren en plaats ontleed weefsel in 2 mL ijskoud 1x PBS aangevuld met 1% PSA in een steriel, 30 mm kweekschaal.
  4. Met behulp van autoclaaf Tang, verwijder speekselklieren van 1x PBS + 1% PSA-oplossing en de positie aan de onderkant van een inbedding mal. Vul de mal met vloeibare 3% laag smeltpunt agarose om het weefsel te dekken.
  5. Met behulp van de Tang, het weefsel aan te passen aan het midden van het blok en de positie van de speekselklier in het juiste vlak. De beste dwarsdoorsneden voor de submandibulaire en parotisklieren zijn in het verticale vlak.
  6. Plaats agarose blok op ijs voor 10 min te harden.
  7. Zorgvuldig lopen een scheermes rond de buitenste rand van de agarose te los en laat het blok glijden op de UV-gesteriliseerd laboratorium film van stap 1,1.
  8. Gebruik een scheermesje te snijden uit een agarose vak met de speekselklier. Zorg ervoor dat het vlak van de sectie is recht en evenwijdig aan de andere kant van het blok (het oppervlak dat zal worden gelijmd). Aangezien agarose niet het weefsel infiltreert, trim niet teveel agarose rond het weefsel zodat zal het weefsel goed worden gesteund.
  9. Gebruik superlijm om het blok te hechten aan het snijvlak.
  10. Sectie bij 50 µm of 90 µm dikte door vibratome bij een snelheid van 0,075 mm/s en frequentie van 100 Hz.
    Opmerking: het instellen van de vibratome op de hoogste frequentie en de laagste snelheid van het blad zorgt voor de meest optimale Slices.
  11. Verzamel secties in een 24-Well weefselkweek gerecht met ~ 1 mL ijskoude PBS per goed met behulp van een gesteriliseerd, natuurlijk haar penseel, het plaatsen van de borstel in 70% ethanol tussen slice collecties te handhaven steriliteit.

3. kweken secties

  1. Autoclaaf een micro-spatel en een tang.
  2. Maak voorraad vibratome cultuurmedia met of zonder foetale boviene serum (FBS): DMEM/F12 media aangevuld met 1% PSA, 5 µ g/mL transferrin, 1,1 µ M hydrocortison, 0,1 µ M retinol zuur, 5 µ g/mL insuline, 80 ng/mL epidermale groeifactor, 5 mM L-glutamine, 50 µ g/mL Gentamicine sulfaat, en 10 µ L/mL Trace element mengsel. Voeg een geschikte hoeveelheid FBS toe om 0%, 2,5%, 5,0%, of 10% oplossingen te maken.
  3. Voorafgaand aan de sectie, voeg 300 l van voorverwarmde media en plaats een 12 mm diameter, 0,4 µm porie-size membraan insert in elk goed van een 24-Well weefselkweek plaat. De media zouden de membraan bodem moeten bereiken om een vloeibare-lucht interface voor cultuur tot stand te brengen.
  4. Leg voorzichtig de speeksel secties bovenop het membraan tussenvoegsel gebruikend de micro-spatel en de cultuur bij 37 °C in bevochtigde 5% CO2 en 95% de atmosfeer Incubator van de lucht.
    1. Voeg ongeveer 300 l primaire cultuurmedia toe aan de put en een paar druppels in de membraan inserts (ongeveer 40 l) om de dag of als dat nodig is. Goede kweken toonde aan dat de cellen in staat zijn om te overleven en worden gehandhaafd voor maximaal 30 dagen ex vivo.

4. bestraling van speekselklier secties

  1. Behandel secties met een enkele dosis straling (5 Gy) met behulp van kobalt-60 (of equivalent) bestraling.
    1. Transport secties naar bestralings inrichting met behulp van een overdekte piepschuim container om schommelingen in temperatuur te voorkomen. Daarnaast moet de zorg worden genomen tijdens het vervoer terug naar de laboratorium incubator om ervoor te zorgen dat de media niet Splash op cultuur deksel en veroorzaken verontreiniging.
    2. Plaats de 24-Well plaat met speekselklier secties 80 cm van de stralingsbron, in het midden van een 32 "x 32" straling veld. Straling dosis berekeningen en de bijbehorende tijd in bestraling zal variëren per instrument en kobalt-60 verval.
  2. Doorgaan met het monitoren en kweken van deze secties zoals beschreven in punt 3.

5. levensvatbaarheid kleuring

  1. Aspireren oude media en was plakjes tweemaal met steriele, voorverwarmde 1x PBS.
  2. Vlek secties met trypaanblauw blauwe kleurstof.
    1. Gebruik een micro-spatel om het segment te verplaatsen van de cultuur naar een glazen glijbaan.
    2. Voeg 0,4% trypaanblauw blauwe oplossing toe aan de vibratome Slice met voldoende volume om het weefsel te bedekken (10 – 20 µ L).
    3. Incubeer plakjes bij kamertemperatuur (RT) in de trypaanblauw blauw voor 1 – 2 min voor de kleurstof om het weefsel te penetreren. Niet-levensvatbare cellen zullen blauw worden gekleurd, en levensvatbare cellen zullen worden ongekleurd.
  3. Vlek secties met calceïne, AM levend-cel kleurstof.
    1. Voeg voldoende volume van de vlek om de sectie te dekken in een put van een 24 goed-plaat (200-300 µ L).
    2. Incubeer Slices op RT voor 15 minuten om kleurstof penetratie mogelijk te maken.
    3. Verwijder voorzichtig de sectie van de put en plaats op een glazen glijbaan. Mount slices met 1 druppel montage media.
    4. De secties van het beeld op een fluorescente microscoop bij opwindings/emissie golflengten van 488 nm en 515 nm.

6. antilichaam kleuring vibratome secties

Nota: het volgende verstrekt een algemeen antilichaam het bevlekken protocol specifiek voor Ki-67; Nochtans, kan dit protocol met om het even welk antilichaam worden gebruikt. Alle wasbeurten worden uitgevoerd op RT, tenzij anders vermeld.

  1. In de multi-well tissue cultuur schotel, aspireren off media en wassen ten minste 2x met steriele 1x PBS.
  2. Fix secties met 4% Paraformaldehyde (middel) overnachting bij 4 °C.
  3. Aspireren off 4% en was 3x met PBT [1x PBS, 1% boviene serum albumine (BSA), 0,1% Triton X-100].
    Nota: de secties kunnen in 1x PBS bij 4 °C worden opgeslagen en op een recentere tijd bevlekt. Maximale opslagtijd getest in dit manuscript was 3 weken. De langere opslagtijd zal door de individuele gebruiker moeten worden geoptimaliseerd als dat wordt gewenst.
  4. Permeabilize secties met behulp van 0,3% Triton X-100 in 1x PBS voor 30 min.
    Opmerking: deze stap kan worden aangepast en geoptimaliseerd voor specifieke antilichaam kleuring en permeabilization.
  5. Pipet off permeabilization oplossing.
  6. Was plakjes 3x voor 5 min met 1x PBS, 1% BSA, en 0,1% Triton X-100 (PBT).
  7. Blokkeer de plakjes met blokkerende agent met 1% normaal geit serum voor 1 h.
  8. Was de plakjes 3x voor 5 min met PBT.
  9. Incubeer de plakjes 's nachts bij 4 °C met 500 µ L anti-Ki67 van het konijn monoclonal antilichaam dat in 1% BSA in 1x PBS wordt verdund.
    Opmerking: voor phalloidin kleuring, sla stap 6,9 en ga verder met het protocol voor de specifieke phalloidin gebruikt. Voor DNA eosine, ga naar stap 6,15.
  10. Aspireren anti-Ki67 konijn monoclonal antilichamen.
  11. Was de plakjes 6x voor 5 min in 1x PBS.
  12. Incubeer de plakjes in 500 µ L van fluorescently geconjugeerd secundair antilichaam compatibel met anti-Ki67 antilichaam dat in 1% BSA in 1x PBS bij RT voor 1,5 h wordt verdund die van licht wordt behandeld.
    Nota: gebaseerd op secundair gebruikt antilichaam, kan de incubatietijd met het secundaire antilichaam verder door de individuele gebruiker worden geoptimaliseerd. Bovendien is het secundaire antilichaam lichtgevoelig. Alle daaropvolgende wasbeurten moeten in het donker worden uitgevoerd.
  13. Aspireren secundair antilichaam.
  14. Was plakjes voor 3x voor 5 min met 1x PBS.
  15. Was schijfjes voor 5 min in geioniseerd water.
  16. Eosine plakjes met DAPI (1 µ g/mL) voor 20 min bij RT.
  17. Was plakjes (eenmaal) voor 5 min in deioniseerde water.
  18. Mount slices met een druppel (~ 40 µ L) van de montage media. Om te voorkomen dat overtollige bubbels, langzaam plaats de dekglaasje op de montage media op de dia, te beginnen met een 45 ° hoek.
    1. Om te voorkomen dat verpletterende de dikke delen met de dekglaasje, Monteer elk segment met een spacer. Een afstandhouder kan worden gemaakt door het plaatsen van een rand van vacuüm vet in een vierkant rond het weefsel sectie.
    2. Bij het leggen van de dekglaasje kunnen de randen van de dekglaasje met vacuüm vet worden verzegeld. Druk op de randen van de dekglaasje met je duim om stevig te houden op de glijbaan. Alternatief, verzegelt de dekglaasje op de Microscoop dia gebruikend duidelijke nagellak.

7. Imaging vibratome secties

  1. Afbeelding van de gekleurd dia's binnen 5 dagen na de kleuring.
  2. Verkrijg optische delen van de gekleurde vibratome plakjes met behulp van een confocale Microscoop. Met een confocale Microscoop, het verkrijgen van een z-stack bij een gedefinieerde stapgrootte of neem individuele beelden, afhankelijk van de gebruiker experimenteel ontwerp. Beelden kunnen worden onderzocht op elke computerscherm na confocale collectie.
    Nota: wegens de dikte van de vibratome segmenten, adviseert men dat een confocal microscoop of een werkingsgebied met z-stapel vermogen wordt gebruikt om details binnen de steekproeven te visualiseren. Voor de beelden gebruikt in dit manuscript, werd een 63x olie doelstelling gebruikt; Dit kan echter worden aangepast en verder aangepast door de individuele gebruiker en de specifieke scope gebruikt. De geadviseerde pixelresolutie voor elke objectieve en gezoem factor met de veronderstelde Nyquist bemonstering van 2,5 pixel in X en Y voor de kleinste optisch oplosbaarheid structuur werd gebruikt. Echter, sommige commentatoren suggereren 2,3 pixels, terwijl anderen suggereren 2,8 pixels. Raadpleeg het handboek van de biologische confocale microscopie22 voor verdere details over hoe deze berekeningen te maken.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Primaire 2-D culturen worden geteeld in foetale boviene serum (FBS) aangevuld media, terwijl primaire 3-D salisphere cultuur worden meestal gekweekt in serum-vrije voorwaarden10,11. Daarnaast, de twee eerdere studies gebruik te maken van vibratome culturen uit speekselklieren gekweekt hun secties in 0% of 10% FBS aangevuld media19,20. Muis submandibulaire plakjes werden op...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Het speekselklier onderzoek heeft een aantal cultuur modellen, met inbegrip van vereeuwigde 2-D culturen, primaire 2-D culturen, 3-D salisphere culturen, en 3-D orgaan culturen van embryonale Explants gebruikt om vragen over onderliggende biologie en fysiologie te bepalen. Deze cultuur modellen hebben inzichtelijke informatie over een divers scala van onderzoeksvragen en zal blijven belangrijke instrumenten in het speeksel onderzoek. De beperkingen van deze cultuur modellen omvatten modulatie van p53 activiteit tijdens i...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd deels ondersteund door pilot financiering verstrekt door de Universiteit van Arizona Office of Research and Discovery en de nationale instituten van de gezondheid (R01 DE023534) aan Kirsten Limesand. De Cancer biologie training Grant, T32CA009213, mits toelage ondersteuning voor Wen Yu Wong. De auteurs willen M. Rice bedanken voor zijn waardevolle technische bijdrage.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Vibratome VT1000SLeica BiosystemsN/AVibratome voor secties
Double Edge Stainless Steel Razor BladesElectron Microscopy Sciences72000
AgaroseFisher ScientificBP165-25Laag smeltpunt
ParafilmSigma-AldrichP6543
Penicillin-Streptomycin-Amphotericin BLonza17-745HPSA
24-well plateCellTreat229124
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (DPBS)Gibco14190-144
Loctite UltraGel Control SuperglueLoctiteN/AGekocht bij bouwmarkt
Natural Red Sable Round PaintbrushPrinceton Art & Brush Co7400R-2
Gentamicin SulfateFisher ScientificICN1676045
TransferrinSigma-AldrichT-8158-100mg
L-glutatmineGibco25030-081
Trace ElementsMP BiomedicalsICN1676549
InsulinFisher Scientific12585014
Epidermal Growth FactorCorning354001
HydrocortisoneSigma-AldrichH0888
Retinoic acidFisher ScientificR2625-50MG
Fetal Bovine SerumGibcoA3160602
DMEM/F12 MediaCorning150-90-CV
Millicell Cell Culture InsertMillipore SigmaPICM0125012 mm, 0,4 um poriëngrootte voor 24 well plate
0,4% Trypan BlueSigma-AldrichT8154
LIVE/DEAD Cell Imaging Kit (488/570)Thermo-FisherR37601Alleen gebruikte LIVE kleurcomponent
Anti-Ki-67 AntibodyCell Signaling Technology9129S
Anti-E-cadherin AntibodyCell Signaling Technology3195S
Anti-Cleaved Caspase-3 AntibodyCell Signaling Technology9661L
Anti-SMA AntibodySigma-AldrichC6198
Anti-amylase AntibodySigma-AldrichA8273
Anti-CD31 AntibodyAbcamab28364
Anti-TUBB3 AntibodyCell Signaling Technology5568S
Alexa Fluor 594 Antibody Labeling KitThermo-FisherA20185
Alexa Fluor 594 PhalloidinThermo-FisherA12381
Bovine Serum AlbuminFisher ScientificBP1600
Triton X-100Sigma-Aldrich21568-2500
Paraformaldehyde PrillsFisher Scientific5027632
New England Nuclear Blocking AgentPerkin Elmer2346249Niet meer verkocht
DAPICell Signaling Technology4083S
Prolong Gold Antifade Mounting MediaInvitrogenP36934
Leica SPSII Spectral ConfocalLeica BiosystemsN/AVoor confocale beeldvorming
Leica DMIL Inverted Phase Contrast MicroscopeLeica BiosystemsN/A
Cobalt-60 Teletherapy InstrumentAtomic Energy of Canada Ltd Theratron-80N/A
Amac Box, ClearThe Container Store60140Agarose blokvorm

Referenties

  1. Dirix, P., Nuyts, S., Van den Bogaert, W. Radiation-induced xerostomia in patients with head and neck cancer: a literature review. Cancer. 107 (11), 2525-2534 (2006).
  2. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer Statistics, 2017. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 67 (1), 7-30 (2017).
  3. Hancock, P. J., Epstein, J. B., Sadler, G. R. Oral and dental management related to radiation therapy for head and neck cancer. Journal of the Canadian Dental Association. 69 (9), 585-590 (2003).
  4. Nguyen, N. P., et al. Quality of life following chemoradiation and postoperative radiation for locally advanced head and neck cancer. Journal for Oto-rhino-laryngology and Its Related Specialties. 69 (5), 271-276 (2007).
  5. Gorenc, M., Kozjek, N. R., Strojan, P. Malnutrition and cachexia in patients with head and neck cancer treated with (chemo)radiotherapy. Reports of Practical Oncology and Radiotherapy. Journal of Greatpoland Cancer Center in Poznań and Polish Society of Radiation Oncology. 20 (4), 249-258 (2015).
  6. Grundmann, O., Mitchell, G. C., Limesand, K. H. Sensitivity of salivary glands to radiation: from animal models to therapies. Journal of Dental Research. 88 (10), 894-903 (2009).
  7. Konings, A. W., Coppes, R. P., Vissink, A. On the mechanism of salivary gland radiosensitivity. International Journal of Radiation Oncology, Biology, and Physics. 62 (4), 1187-1194 (2005).
  8. Chan, Y. -H., Huang, T. -W., Young, T. -H., Lou, P. -J. Human salivary gland acinar cells spontaneously form three-dimensional structures and change the protein expression patterns. Journal of Cellular Physiology. 226 (11), 3076-3085 (2011).
  9. Nguyen, V. T., Dawson, P., Zhang, Q., Harris, Z., Limesand, K. H. Administration of growth factors promotes salisphere formation from irradiated parotid salivary glands. PLoS ONE. 13 (3), e0193942(2018).
  10. Limesand, K. H., et al. Characterization of Rat Parotid and Submandibular Acinar Cell Apoptosis In Primary Culture. In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal. 39 (3), 170(2003).
  11. Wei, L., Xiong, H., Li, W., Li, B., Cheng, Y. Upregulation of IL-6 expression in human salivary gland cell line by IL-17 via activation of p38 MAPK, ERK, PI3K/Akt, and NF-κB pathways. Journal of Oral Pathology & Medicine. 47 (9), 847-855 (2018).
  12. Chuong, C., Katz, J., Pauley, K. M., Bulosan, M., Cha, S. RAGE expression and NF-κB activation attenuated by extracellular domain of RAGE in human salivary gland cell line. Journal of Cellular Physiology. 221 (2), 430-434 (2009).
  13. Edmondson, R., Broglie, J. J., Adcock, A. F., Yang, L. Three-dimensional cell culture systems and their applications in drug discovery and cell-based biosensors. Assay and Drug Development Technologies. 12 (4), 207-218 (2014).
  14. Bhadriraju, K., Chen, C. S. Engineering cellular microenvironments to improve cell-based drug testing. Drug Discovery Today. 7 (11), 612-620 (2002).
  15. Breslin, S., O'Driscoll, L. Three-dimensional cell culture: the missing link in drug discovery. Drug Discovery Today. 18 (5-6), 240-249 (2013).
  16. Avila, J. L., Grundmann, O., Burd, R., Limesand, K. H. Radiation-induced salivary gland dysfunction results from p53-dependent apoptosis. International Journal of Radiation Oncology, Biololgy, Physics. 73 (2), 523-529 (2009).
  17. Mitchell, G. C., et al. IGF1 activates cell cycle arrest following irradiation by reducing binding. of DeltaNp63 to the p21 promoter. Cell Death & Disease. 1, (2010).
  18. Lombaert, I. M. A., et al. Rescue of Salivary Gland Function after Stem Cell Transplantation in Irradiated Glands. PLoS ONE. 3 (4), (2008).
  19. Warner, J. D., et al. Visualizing form and function in organotypic slices of the adult mouse parotid gland. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 295 (3), G629-G640 (2008).
  20. Su, X., et al. Three-dimensional organotypic culture of human salivary glands: the slice culture model. Oral Diseases. 22 (7), 639-648 (2016).
  21. Mattei, G., Cristiani, I., Magliaro, C., Ahluwalia, A. Profile analysis of hepatic porcine and murine brain tissue slices obtained with a vibratome. PeerJ - The Journal of Life and Environmental Sciences. 3, 932(2015).
  22. Handbook of Biological Confocal Microscopy. Pawley, J. , 3rd ed, Springer U.S. Boston, MA. (2006).
  23. Limesand, K. H., et al. Insulin-Like Growth Factor-1 Preserves Salivary Gland Function After Fractionated Radiation. International Journal of Radiation Oncology, Biology, and Physics. 78 (2), 579-586 (2010).
  24. Grundmann, O., Fillinger, J. L., Victory, K. R., Burd, R., Limesand, K. H. Restoration of radiation therapy-induced salivary gland dysfunction in mice by post therapy IGF-1 administration. BMC Cancer. 10, 417(2010).
  25. Chibly, A. M., et al. aPKCzeta-dependent Repression of Yap is Necessary for Functional Restoration of Irradiated Salivary Glands with IGF-1. Scientific Reports. 8 (1), 6347(2018).
  26. Wong, W. Y., Pier, M., Limesand, K. H. Persistent disruption of lateral junctional complexes and actin cytoskeleton in parotid salivary glands following radiation treatment. American Journal of Physiology: Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 315 (4), R656-R667 (2018).
  27. Emmerson, E., et al. SOX2 regulates acinar cell development in the salivary gland. eLife. 6, (2017).
  28. Nedvetsky, P. I., et al. Parasympathetic innervation regulates tubulogenesis in the developing salivary gland. Developmental Cell. 30 (4), 449-462 (2014).
  29. Kwon, H. R., Nelson, D. A., DeSantis, K. A., Morrissey, J. M., Larsen, M. Endothelial cell regulation of salivary gland epithelial patterning. Development. 144 (2), 211-220 (2017).
  30. Mellas, R. E., Leigh, N. J., Nelson, J. W., McCall, A. D., Baker, O. J. Zonula occludens-1, occludin and E-cadherin expression and organization in salivary glands with Sjogren's syndrome. Jounral of Histochemistry and Cytochemistry. 63 (1), 45-56 (2015).
  31. Daley, W. P., et al. Btbd7 is essential for region-specific epithelial cell dynamics and branching morphogenesis in vivo. Development. 144 (12), 2200-2211 (2017).
  32. Nam, K., et al. Post-Irradiated Human Submandibular Glands Display High Collagen Deposition, Disorganized Cell Junctions, and an Increased Number of Adipocytes. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 64 (6), 343-352 (2016).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Organotypische kweek van speekselklierenex vivo bestralingweefselsectievibratoomsnijdenimmunofluorescentiekleuringconfocale microscopieKi-67 immunokleuringgespleten caspase-3E-cadherine-kleuringamylasedetectie
De behandeling van de straling van Organotypic culturen van submandibulaire en Parotis speekselklieren modellen sleutel in vivo kenmerken
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.