Chronische salmonella infectie veroorzaakte intestinale fibrose

Samenvatting

Dit protocol beschrijft een muismodel van door salmonella gedreven intestinale fibrose dat lijkt op belangrijke pathologische kenmerken van de ziekte van Crohn, waaronder Transmurale ontsteking en fibrose. Deze methode kan worden gebruikt om gastheerfactoren te evalueren die fibrotische uitkomsten veranderen met Mutant muizen gehandhaafd op een C57Bl/6 genetische achtergrond.

Samenvatting

Weefsel fibrose gekenmerkt door de pathologische accumulatie van extracellulaire matrix zoals collageen is het resultaat van aanhoudende ontsteking en disgereguleerde reparatie. In inflammatoire darmziekte (IBD), fibrose leidt tot terugkerende strictuur formaties waarvoor er geen effectieve therapie anders dan chirurgische resectie. Door zijn late aanvang zijn de processen die fibrose aandrijden minder bestudeerd en grotendeels onbekend. Daarom vormen fibrotische complicaties een grote uitdaging in IBD. In dit protocol wordt een robuust in vivo model van intestinale fibrose beschreven waarbij de pre-behandeling van streptomycine van C57Bl/6 muizen gevolgd door orale maagsonde met vaccin kwaliteit salmonella typhimurium δaroa Mutant leidt tot aanhoudende pathogenen kolonisatie en fibrose van de blindedarm. Methoden voor de voorbereiding van S. Typhimurium ΔAroA voor het inenten, kwantificeren van pathogenen in de blindedarm en milt, en het evalueren van de collageen afzetting in intestinale weefsels worden uitgelegd. Dit experimentele ziekte model is nuttig voor het onderzoeken van gastheerfactoren die CD-achtige intestinale fibrose verbeteren of verergeren.

Inleiding

Colitis ulcerosa (UC) en de ziekte van Crohn (cd) zijn de twee belangrijkste vormen van IBD en worden gekenmerkt als chronische en relapsing inflammatoire aandoeningen van het maagdarmkanaal ^1,2. Deze aandoeningen hebben een grote invloed op de kwaliteit van leven van patiënten. Symptomen van IBD omvatten abdominale pijn, diarree, misselijkheid, verlies van het gewicht, koorts, en vermoeidheid³. Recente studies hebben genetische en omgevingsfactoren geïdentificeerd die bijdragen aan pathogenese van ziekten; Er wordt gedacht dat dergelijke risicofactoren bijdragen tot de verstoring van d....

Protocol

Alle dier protocollen werden goedgekeurd door het Dierenzorg Comité van de University of British Columbia.

1. bereiding van salmonella typhimurium δaroa-culturen voor orale maagsonde van muizen

1. Uit een bevroren glycerol kolf van S. Typhimurium δaroa, bereid een streep plaat met behulp van LB agar bevattende 100 μg/ml streptomycine met een steriele enten lus. Inincuberen 's nachts bij 37 °C. Streak-platen kunnen tot een week worden bewaard bij 4 °C.
2. Een dag voorafgaand aan de infectie, bereiden antibioticum door het oplossen van 0,5 g van streptomycine in 2,5 mL water. Na filter steriliseren streptomycin....

Resultaten

Streptomycine behandeling gevolgd door orale infectie met S. Typhimurium ΔAroA leidt tot robuuste intestinale ontsteking en fibrose, vooral in de blindedarm (Figuur 1). Typische pathogeen lasten van 10⁸ tot 10⁹ kve per 1 g blindedarm en 10⁴ kve per 1 g milt kunnen worden teruggewonnen uit besmette dieren (Figuur 2). Beoordeling van fibrose in picrosirius rood gekleurd gekleurde cecal-secties duiden op piek fibrose 21 dag.......

Discussie

Ons begrip van de pathogenese van IBD is sterk verbeterd door Muismodellen van darmontsteking. Hoewel dergelijke individuele modellen niet alle kenmerken van de complexe en multifactoriële menselijke ziekte recapituleren, ze zijn nuttig bij het identificeren van de belangrijkste kenmerken van ziekteprogressie. Fibrotische stricturen geassocieerd met IBD blijven een belangrijke onvervulde klinische behoefte, aangezien de huidige behandelingen niet effectief zijn bij het omkeren van de ziekte ontwikkeling. Bovendien is int.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
2 ml round bottom safe lock tubes	Eppendorf	22363344
Roestvrijstalen kralen	Qiagen	69989
PBS	Gibco	10010031
Large-Orifice Pipet Tips	Fisher	2707134
2 mL megablock platen	Sarstedt	82.1972.002
Gavage naalden	FST	18061-22
Streptomycinesulfaat	Sigma	S9137
Mixermolen	Retsch	MM