Methodenartikel

In vitro reconstitutie van ruimtelijke Celcontactpatronen met geïsoleerde Caenorhabditis elegans embryo Blastomeres en zelfklevende polystyreen kralen

DOI:

10.3791/60422

⸱

26 november 2019

 ,  , 
1Department of Zoology, The University of British Columbia, 2Life Sciences Institute, The University of British Columbia

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Weefsel complexiteiten van multicellulaire systemen Verwar de identificatie van causaal verband tussen extracellulaire cues en individuele cellulaire gedragingen. Hier presenteren we een methode om de directe link tussen contact afhankelijke signalen en delings assen te bestuderen met behulp van C. elegans embryo blastomeres en zelfklevende polystyreen kralen.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

In multicellulaire systemen worden individuele cellen omringd door de verschillende fysische en chemische signalen die afkomstig zijn van naburige cellen en het milieu. Deze weefsel complexiteit constideert de identificatie van causaal verband tussen extrinsieke signalen en cellulaire dynamiek. Een synthetisch gereconstitueerd multicellulair systeem overkomt dit probleem door onderzoekers in staat te stellen voor een specifieke Cue te testen terwijl ze anderen elimineren. Hier presenteren we een methode om celcontactpatronen te reconstitueren met geïsoleerde Caenorhabditis elegans blastomere en zelfklevende polystyreen kralen. De procedures betreffen het verwijderen van eierschalen, het isoleren van blastomere door het verstoren van de celcelhechting, de bereiding van zelfklevende polystyreen kralen en de reconstitutie van celcel-of celkraal contact. Tot slot presenteren we de toepassing van deze methode om de oriëntatie van cellulaire delings assen te onderzoeken die bijdraagt aan de regulering van ruimtelijke cellulaire patronen en specificatie van het lot van cellen bij de ontwikkeling van embryo's. Deze robuuste, reproduceerbare en veelzijdige in vitro-methode maakt de studie mogelijk van directe relaties tussen ruimtelijke celcontactpatronen en cellulaire reacties.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tijdens multicellulaire ontwikkeling worden het cellulaire gedrag (bv. delings as) van individuele cellen gespecificeerd door verschillende chemische en fysieke aanwijzingen. Om te begrijpen hoe individuele cellen deze informatie interpreteert, en hoe ze de multicellulaire assemblage reguleren als een emergente eigenschap is een van de ultieme doelen van morfogenese studies. Het modelorganisme C. elegans heeft aanzienlijk bijgedragen tot het begrijpen van de cellulaire regulering van de morfogenese zoals cel polariteit1, Cell Division patronen1, cel Fate decision2, en weefsel schaal verordeningen zoals neuronale bedrading3 en organogenese4,5. Hoewel er verschillende genetische hulpmiddelen beschikbaar zijn, zijn weefsel engineering methoden beperkt.

De meest succesvolle weefseltechnische methode in C. elegans Study is de klassieke blastomere Isolation6; Als C. elegans embryo is omgeven door een eierschaal en een permeabiliteit barrière7, hun verwijdering is een van de belangrijkste procedures van deze methode. Hoewel deze blastomere-isolatiemethode het oplossen van celcelcontact op een vereenvoudigde manier mogelijk maakt, staat het niet toe dat ongewenste signalen worden weggenomen; celcontact vormt nog steeds zowel mechanisch (bijv. adhesie) als chemische aanwijzingen, waardoor ons vermogen om het oorzakelijke verband tussen de Cue en het cellulaire gedrag volledig te analyseren, wordt beperkt.

De in dit artikel gepresenteerde methode maakt gebruik van carboxylaat gemodificeerde polystyreen parels die covaltig kunnen binden aan elke amine-reactieve moleculen, waaronder eiwitten als liganden. Met name gebruikten we een amine-reactieve vorm van Rhodamine Red-X als een ligand om kralen zowel visueel traceerbaar en lijm aan de cel te maken. De carboxylgroepen van kraal oppervlak en primaire amine groepen van ligand molecuul worden gekoppeld door in water oplosbare Carbodiimide 1-ethyl-3-(Dimethylaminopropyl) Carbodiimide (EDAC)8,9. Verkregen zelfklevende kralen zorgen voor de effecten van de mechanische Cue op cellulaire Dynamics10. We hebben deze techniek gebruikt om mechanische aanwijzingen te identificeren die nodig zijn voor de oriëntatie van de celdeling10.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. bereiding van zelfklevende polystyreen kraal

Opmerking: dit protocol vereist geen aseptische techniek.

  1. Weeg 10 mg carboxylaat gemodificeerde polystyreen kralen af in een micro centrifugebuis van 1,5 mL.
  2. Om de kralen te wassen, voeg 1 mL 2-(N-morpholino) ethanesulfoninezuur (MES) buffer toe aan de buis. Aangezien MES buffer geen fosfaat en acetaat bevat, wat de reactiviteit van Carbodiimide kan verminderen, is het geschikt om te gebruiken bij eiwit koppelingsreactie. Vortex de buis om de kralen te mengen.
  3. Draai de buis voor 60 s bij 2.000 x g via een tafel centrifuge.
  4. Gooi het supernatant weg door de buffer voorzichtig te pipetteren.
  5. Was de kralen opnieuw met 1 mL MES-buffer door stappen 1.2-1.4 te volgen.
  6. Voeg 1 mL MES buffer met 10 mg EDAC in de buis om de oppervlakte carboxylgroepen te activeren. Vortex de buis om de kralen te mengen.
  7. Draai en inbroed de buis gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur.
  8. Spin de kralen voor 60 s op 2.000 x g.
  9. Gooi het supernatant weg door de buffer voorzichtig te pipetteren.
  10. Om de kralen te wassen, voeg 1 mL fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) toe aan de buis. Vortex de buis om de kralen te mengen.
  11. Spin de buis voor 60 s op 2.000 x g.
  12. Gooi het supernatant weg door de buffer voorzichtig te pipetteren.
  13. Was de kralen opnieuw met 1 mL PBS met de volgende stappen 1.10-1.12.
  14. De uiteindelijke concentratie van Rhodamine zal afhangen van de stam die wordt imaged. Bereid 1 mL 1-, 10-, 100-en 1000-voudige verdunningsreeks van Rhodamine Red-X van de 0,65 mM Rhodamine Red-X stockoplossing.
  15. Pipetteer 20 μL kralen in elke seriële verdunnings buis.
  16. Roteer en inbroed de buis gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur.
  17. Was de parels tweemaal met 1 mL PBS door de stappen 1.10-1.12 te herhalen.
  18. Voeg 1 mL PBS toe aan de buis en bewaar deze bij 4 °C gedurende maximaal 6 weken. Controleer de intensiteit van de fluorescentie van de parels onder een microscoop die wordt gebruikt voor Live-beeldvorming. De juiste concentratie van de Rhodamine Red-X succinimidyl Ester is afhankelijk van de beeldvormings condities (Figuur 1).
    Opmerking: kralen zonder Rhodamine Red-X behandeling niet aan de cel hechten. Rhodamine Red-X fungeert als fluorescentie marker en lijm molecuul. De electro statische interactie tussen positief opgeladen Rhodamine Red-X en negatief geladen plasma membraan is een putende oorzaak van hechting.

2. montage van de mond pipet

  1. Snijbreedte (6,35 mm binnendiameter) en smalle (3,175 mm binnendiameter) Tygon buizen tot ongeveer 25 cm en 40 cm lang, respectievelijk (Figuur 2).
  2. Verbind de Tygon buizen met een polytetrafluorethyleen (PTFE) filter (poriegrootte 0,2 μm) (Figuur 2).
  3. Demonteer een in de handel verkrijgbare aspirator buis en bevestig de capillaire houder en het mondstuk aan het uiteinde van respectievelijk de smalle en brede Tygon buizen (Figuur 2).
    Opmerking: PTFE-filter werd gebruikt om inademing van dampen van hypochloriet oplossing via de mond pipet te voorkomen.

3. isolatie van de embryo blastomere

Let op: Draag handschoenen en een Labcoat om te voorkomen dat u snijdt en contact met de bleek oplossing.

  1. Houd elk uiteinde van een micro capillair (capaciteit; 10 μL) met de rechter-en linkerhand vast.
  2. Trek de microcapillair naar beide uiteinden om spanning toe te passen en breng het midden van het capillair over een brander om twee met de hand getrokken capillairen te maken (Figuur 3a).
  3. Trim de uiteinden van de met de hand getrokken capillairen met een tang onder de Ontkoppel Microscoop en bevestig het getrokken capillair in een mondpipetteer apparaat (Figuur 2). Bereid twee soorten pipetten voor. De openingsmaten van de pipetpunt voor de pipetten moeten ongeveer 2x zijn en 1x de korte Aslengte van C. elegans embryo's (30 μm) voor de embryo overdracht en verwijdering van de eierschaal, respectievelijk Figuur 3B-D).
  4. Pipetteer 45 μL eizout oplossing op een put van een multi well-glijbaan (Figuur 4a; bodem).
  5. Plaats 5-10 volwassen C. elegans op een goed met ei zoutoplossing.
  6. Om vroege C. elegans embryo's te verkrijgen, snijd je volwassenen in stukken door twee naalden rechts en links van C. elegans body te positioneren en de naalden langs elkaar te schuiven (Figuur 4A; bovenste schema's).
  7. Pipetteer 45 μL van de hypochloriet oplossing op een put naast de waterhoudende oplossing met Eier zout (Figuur 4B).
  8. Pipetteer 45 μL van het groeimedium van Shelton op de volgende drie putjes naast de goed bevattende hypochloriet oplossing (Figuur 4B).
  9. Breng 1-cel-en vroege 2-celfase embryo's over in de hypochloriet oplossing door middel van het pipetteren met het hand getekende capillair voor de overdracht van embryo's (Figuur 4B).
  10. Wacht 40 – 55 s.
  11. Was de embryo's door de embryo's over te brengen van de hypochloriet oplossing naar het groeimedium van Shelton door de mond te pipetteren met het hand getekende capillair voor embryo-overdracht (Figuur 4B).
  12. Was de embryo's opnieuw door de embryo's over te brengen in een nieuwe put van het groeimedium van Shelton door het pipetteren met het met de hand getekende capillair voor embryo-overdracht (Figuur 4B).
  13. Breng de gewassen embryo's over in een nieuwe put van het groeimedium van Shelton door de mond pipetteren met de hand getekende capillair voor embryo overdracht. Gebruik de hand getekende capillair voor het verwijderen van de eierschaal en herhaal voorzichtig het pipetteren (Figuur 4C; middelste schema's). Als de eierschaal met succes wordt verwijderd, zullen de embryonale cellen bolvormig worden (Figuur 4C; rechts).
  14. De 2-cel fase embryonale blastomeres scheiden door zachtjes en continu pipetteren met de hand getekende capillair voor het verwijderen van de eierschaal (Figuur 4D).

4. reconstitutie van contact patronen met blastomere en kraal

Opmerking: werk onder de beeldvormings Microscoop om dissociatie van een cel van een kraal te voorkomen en om de tijdige beeld verwerving te vergemakkelijken.

  1. Om een omgekeerde Microscoop te observeren, bereidt u een beeldvormings kamer voor zoals in Figuur 5.
    1. Plaats een dekslip op een afdek houder (Figuur 5a).
    2. Plak de randen van de Afdeklijst om deze te stabiliseren. De zijkant met tape is de ' achter'-zijde (Figuur 5A, B).
    3. Draai de afdek houder naar de voorste zijde en teken een cirkel op de Afdeklijst met een hydrofobe pen (Figuur 5C).
      Let op: elk glasbodem gerecht werkt ook, op voorwaarde dat de embryo's gemanipuleerd kunnen worden door de mond pipet.
  2. Voeg het groeimedium van Shelton toe binnen de cirkel getekend door de hydrofobe marker (Figuur 5D).
  3. Breng de geïsoleerde blastomere over naar de Imaging kamer.
  4. Verdeel een klein volume van de chemisch Gefunctionaliseerde parels met behulp van de hand getekende capillair voor embryo overdracht.
  5. Bedien de positie van de polystyreen kralen door in de hand getekende capillair te blazen totdat de kraal aan de geïsoleerde blastomere hecht.
  6. Monteer een dekslip om de verdamping van het medium te voorkomen (Figuur 5E). Voer Live Imaging uit.

5. bereiding van belangrijke reagentia

  1. Eier zoutoplossing (10 mL): Combineer 235 μL van 5 M NaCl en 240 μL van 2 M KCl met 9525 μL dH2O.
  2. Hypochloriet oplossing (10 mL): Combineer 7,5 mL Clorox (bevattende ongeveer 7,5% natriumhypochloriet) met 2,5 mL 10 N NaOH (uiteindelijke concentratie van natriumhypochloriet is ongeveer 5,625%).
    Opmerking: Hoewel veel gepubliceerde methoden Chitinase hebben gebruikt om chitineuze eierschalen te verteren, hebben we een methode aangenomen met behulp van hypochloriet oplossing11. Door de batch-to-batch variaties van Chitinase activiteiten te vermijden, geloven we dat deze methode reproduceerbaar en kosteneffectiever is.
  3. 0,81 mM inuline oplossing (40 mL)
    1. Voeg 0,2 g inuline toe aan 40 mL dH2O.
    2. Autoclaaf om op te lossen.
      Opmerking: houdt 1 maand bij 4 °C.
  4. 0,5 M MES-buffer (500 mL)
    1. Los 48,81 g MES op in 400 mL gedistilleerd water (dH2O).
    2. Stel de pH in op 6,0.
    3. Breng het totale volume naar 500 mL met dH2O.
  5. PBS-oplossing (1 L)
    1. Als u 10-voudige PBS-oplossing wilt maken, lost u 1 pakket PBS premix Powder op in 1 L dH2O.
    2. Combineer 100 mL 10-voudige PBS-oplossing met 900 mL dH2O.
  6. 5% Polyvinylpyrrolidon (PVP) oplossing (4 mL)
    1. Los onder steriele omstandigheden 0,2 g PVP op in 4 mL Drosophila Schneider-medium.
      Opmerking: open altijd de medium Stock in weefselkweek (TC) van Schneider. Bewaar gedurende 1 maand bij 4 °C.
  7. 0,65 mM Rhodamine Red-X stockoplossing (2 mL)
    1. Weeg 1 mg Rhodamine rood-X af.
    2. Voeg 2 mL dimethylsulfoxide (DMSO) toe om op te lossen.
    3. Aliquot en bewaren bij-20 °C.
  8. Shelton's groei medium (SGM) (10,25 mL)
    1. Combineer onder steriele omstandigheden 8 mL Drosophila Schneider medium, 1 mL PVP-oplossing, 1 mL inuline oplossing, 1 mL basale medium Eagle (BME) vitaminen, 50 μL Penicillaire-streptomycine, en 100 μL lipide concentraat samen.
    2. Aliquot 325 μL SGM in 1,5 mL microbuisjes.
      Opmerking: Houd voor ongeveer 1 maand bij 4 °C.
    3. Voeg op de dag van de blastomere isolatie 175 μL foetaal runderserum (FBS) toe aan de SGM (voor een totaal volume van 500 μL).
      Opmerking: Sla FBS bij-20 °C op en dooi het voor gebruik. FBS hoeft geen warmte te worden gedood.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Voor de bereiding van kralen, bepaalden we de optimale hoeveelheid Rhodamine Red-X succinimidyl Ester voor de transgene stam die GFP-myosin II en mCherry-histone uitdrukken (Figuur 1A-D). We gebruikten mcherry Tagged Histon als een marker van de celcyclus progressie. Omdat zowel Rhodamine Red-x en mcherry zal worden verlicht door een 561 nm laser, de optimale intensiteit van Rhodamine Red-x signaal is vergelijkbaar met die van Histon om gelijktijdige beeldvorming van cel en ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Reconstitutie van vereenvoudigde celcontactpatronen laat onderzoekers de rollen van specifieke celcontactpatronen in verschillende aspecten van de morfogenese testen. We hebben deze techniek gebruikt om te laten zien dat de celdelings as wordt bestuurd door het fysieke contact met lijm parels10. Aangezien de specificatie van de delings assen cruciaal is voor multicellulaire ontwikkeling door bij te dragen aan morphogenesis14, stamcel divisie15,<...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs verklaren geen belangenconflict.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

We bedanken James Priess en Bruce Bowerman voor advies en het verstrekken van c. elegans stammen, Don Moerman, Kota Mizumoto, en Life Sciences Institute Imaging Core faciliteit voor het delen van apparatuur en reagentia, aoi Hiroyasu, Lisa Fernando, min JEE Kim voor het onderhoud van c. elegans en kritische lezing van ons manuscript. Ons werk wordt ondersteund door de Raad voor Natuurwetenschappen en ingenieurs onderzoek van Canada (NSERC), (RGPIN-2019-04442).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochlorideAlfa AesarAAA1080703Voor de voorbereiding van de kralen
AspiratorbuisassemblageDrummond21-180-13Voor de blastomeerisolatie.
Caenorhabditis elegans-stam: N2, wild-typeCaenorhabditis Genetics CenterN2Stam gebruikt in deze studie
Caenorhabditis elegans-stam: KSG5, genotype: zuIs45; itIs37in houseKSG5Stam gebruikt in deze studie
Gekalibreerde Mircopipetten, 10 µLDrummond21-180-13Voor de blastomeerisolatie
Carboxylaat-gemodificeerde polystyreenkralen (30 µm diameter)KISKER BiotechPPS-30.0COOHPVoor de voorbereiding van de kralen
CD Lipid ConcentraatLife Technologies11905031Voor de blastomeerisolatie. Werk in de weefselkweekkap.
CloroxCloroxN. A.Voor de blastomeerisolatie. Open een nieuwe fles wanneer de hypochlorietbehandeling niet goed werkt.
DekglashouderIn houseN.A.Voor de blastomeerisolatie.
Dissectiemicroscoop: Zeiss Stemi 508 met M-standaard. Lichtbron is ingebouwde LED. Vergroting van het oogstuk is 10X.Carl ZeissStemi 508Voor de blastomeerisolatie.
Fetaal bovien serum, gekwalificeerd One Shot, Canadees oorsprongGibcoA3160701Voor de blastomeerisolatie. Werk in de weefselkweekkap.
Algemene gebruiks- en precisieglide-hypodermische naalden, 25 gaugeBD14-826AAVoor de blastomeerisolatie
InulineAlfa AesarAAA1842509Voor de blastomeerisolatie
MEM-vitamineoplossing (100x)Gibco11120052Voor de blastomeerisolatie.
MES (fijne witte kristallen)Fisher BioReagentsBP300-100Voor de voorbereiding van de kralen
Multitest Slide 10 WellMP BiomedicalsICN6041805Voor de blastomeerisolatie
PBS, fosfaatgebufferde zoutoplossing, 10 x poederFisher BioReagentsBP665-1Voor de voorbereiding van de kralen
Penicilline-streptomycine (10.000 U/mL)Gibco15140148Voor de blastomeerisolatie.
PolyvinylpyrrolidonFisher BioReagentsBP431-100Voor de blastomeerisolatie
KaliumchlorideBioshopPOC888Voor de blastomeerisolatie
Rhodamine Red-X, succinimidester, 5-isomeerMolecular ProbesR6160Voor de voorbereiding van de kralen
Schneider’s Drosophila steriele mediumGibco21720024Voor de blastomeerisolatie. Werk in de weefselkweekkap.
NatriumchlorideBioshopSOD001Voor de blastomeerisolatie
Natriumhydroxide-oplossing, 10 NFisher ChemicalSS255-1Voor de blastomeerisolatie
Spinning disk confocale microscoop: Yokogawa CSU-X1, Zeiss Axiovert omgekeerde scope, Quant EM 512-camera, 63X NA 1.4 Plan apochromatisch objectief. Het systeem werd bestuurd door Slidebook 6.0.Intelligent Imaging InnovationN.A.Voor live-imaging
Spuitfilters, PTFE, niet-sterielBasix13100115Voor de blastomeerisolatie.
Tygon S3 laboratoriumslang,, Formulering E-3603, binnendiameter 3.175 mmSaint Gobain Performance Plastics89403-862Voor de blastomeerisolatie.
Tygon S3 laboratoriumslang,, Formulering E-3603, binnendiameter 6.35 mmSaint Gobain Performance Plastics89403-854Voor de blastomeerisolatie.

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Herman, M. Hermaphrodite cell-fate specification. WormBook. , (2006).
  2. Rose, L., Gonczy, P. Polarity establishment, asymmetric division and segregation of fate determinants in early C. elegans embryos. WormBook. , (2014).
  3. White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans. Philosophical Transactions of the Royal Society of London. B, Biological Sciences. 314 (1165), 1(1986).
  4. Mango, S. The C. elegans pharynx: a model for organogenesis. WormBook. , (2007).
  5. McGhee, J. The C. elegans intestine. WormBook. , (2007).
  6. Edgar, L. G., Goldstein, B. Culture and Manipulation of Embryonic Cells. Methods in Cell Biology. 107, 151-175 (2012).
  7. Stein, K. K. The C. elegans eggshell. WormBook. , (2018).
  8. Quash, G., et al. The preparation of latex particles with covalently bound polyamines, IgG and measles agglutinins and their use in visual agglutination tests. Journal of Immunological Methods. 22 (1), 165-174 (1978).
  9. Miller, J. V., Cuatrecasas, P., Brad, T. E. Purification of tyrosine aminotransferase by affinity chromatography. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Enzymology. 276 (2), 407-415 (1972).
  10. Sugioka, K., Bowerman, B. Combinatorial contact cues specify cell division orientation by directing cortical myosin flows. Developmental Cell. 46 (3), 257-270 (2018).
  11. Park, F. D., Priess, J. R. Establishment of POP-1 asymmetry in early C. elegans embryos. Development. 130 (15), 3547-3556 (2003).
  12. Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis. Nature Methods. 9 (7), 671-675 (2012).
  13. Thevenaz, P., Ruttimann, U. E., Unser, M. A pyramid approach to subpixel registration based on intensity. IEEE Transactions on Image Processing. 7 (1), 27-41 (1998).
  14. Gillies, T. E., Cabernard, C. Cell Division Orientation in Animals. Current Biology. 21 (15), 599-609 (2011).
  15. Poulson, N. D., Lechler, T. Asymmetric cell divisions in the epidermis. International Review of Cell and Molecular Biology. 295, 199-232 (2012).
  16. Knoblich, J. A. Asymmetric cell division: recent developments and their implications for tumour biology. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 11 (12), 849-860 (2010).
  17. Engler, A. J., Sen, S., Sweeney, H. L., Discher, D. E. Matrix elasticity directs stem cell lineage specification. Cell. 126 (4), 677-689 (2006).
  18. Dupont, S., et al. Role of YAP/TAZ in mechanotransduction. Nature. 474 (7350), 179-183 (2011).
  19. Schierenberg, E., Junkersdorf, B. The role of eggshell and underlying vitelline membrane for normal pattern formation in the early C. elegans embryo. Roux's Archives of Developmental Biology. 202 (1), 10-16 (1992).
  20. Wang, Z., Wang, D., Li, H., Bao, Z. Cell neighbor determination in the metazoan embryo system. Proceedings of the 8th ACM International Conference on Bioinformatics, Computational Biology, and Health Informatics. , 305-312 (2017).
  21. Shaya, O., et al. Cell-cell contact area affects notch signaling and notch-dependent patterning. Developmental Cell. 40 (5), 505-511 (2017).
  22. Cao, J., et al. Comprehensive single cell transcriptional profiling of a multicellular organism. Science. 357 (6352), 661-667 (2017).
  23. Goldstein, B., Takeshita, H., Mizumoto, K., Sawa, H. Wnt signals can function as positional cues in establishing cell polarity. Developmental Cell. 10 (3), 391-396 (2006).
  24. Priess, J. R. Notch signaling in the C. elegans embryo. WormBook. , (2005).
  25. Müller, A., et al. Oriented cell division in the C. elegans embryo is coordinated by G-protein signaling dependent on the adhesion GPCR LAT-1. PLOS Genetics. 11 (10), 1005624(2015).
  26. Marston, D. J., Roh, M., Mikels, A. J., Nusse, R., Goldstein, B. Wnt signaling during Caenorhabditis elegans embryonic development. Methods in Molecular Biology. 469, 103-111 (2008).
  27. Habib, S. J., et al. A localized Wnt signal orients asymmetric stem cell division in vitro. Science. 339 (6126), 1445-1448 (2013).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

C Elegans EmbryoBlastomere IsolationCell Contact ReconstitutionEggshell RemovalCapillary PreparationFluorescent LabelingLive ImagingSpindle OrientationCell Division Axis

Gerelateerde artikelen