In dit rapport presenteren we een protocol waarmee de onderzoeker een muismodel van intraoculaire uveïtis kan genereren. Meer algemeen aangeduid als experimentele auto-immune uveïtis (EAU), dit gevestigde model legt vele aspecten van de menselijke ziekte vast. Hierin zullen we beschrijven hoe de progressie van de ziekte kan worden geïnduceerd en gevolgd met behulp van verschillende uitlezingen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Experimentele auto-immune uveïtis: een intraoculair inflammatoir muismodel
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Experimentele auto-immune uveïtis (EAU) wordt aangedreven door immuuncellen die reageren op zelf-antigenen. Veel kenmerken van dit niet-infectieuze, intraoculaire ontstekingsziektemodel recapituleren het klinische fenotype van posterieure uveïtis die mensen treft. EAU is betrouwbaar gebruikt om de werkzaamheid van nieuwe inflammatoire therapieën, hun werkingsmechanisme te bestuderen en om de mechanismen die ten grondslag liggen aan de progressie van de ziekte van intraoculaire aandoeningen verder te onderzoeken. Hier bieden we een gedetailleerd protocol over EAU-inductie in de C57BL / 6J-muis - het meest gebruikte modelorganisme met gevoeligheid voor deze ziekte. Klinische beoordeling van de ernst en progressie van de ziekte zal worden aangetoond met behulp van fundoscopie, histologisch onderzoek en fluoresceïneangiografie. De inductieprocedure omvat subcutane injectie van een emulsie met een peptide (IRBP1-20) uit het oculaire eiwit interfotoreceptor retinoïde bindend eiwit (ook bekend als retinolbindend eiwit 3), Complete Freund's Adjuvant (CFA) en aangevuld met gedode Mycobacterium tuberculosis. Injectie van deze viskeuze emulsie op de achterkant van de nek wordt gevolgd door een enkele intraperitoneale injectie van Bordetella pertussis toxine. Bij het begin van de symptomen (dag 12-14) en onder algemene anesthesie worden fundoscopische beelden gemaakt om de progressie van de ziekte te beoordelen door middel van klinisch onderzoek. Deze gegevens kunnen direct worden vergeleken met die op latere tijdstippen en piekziekte (dag 20-22) met geanalyseerde verschillen. Tegelijkertijd stelt dit protocol de onderzoeker in staat om potentiële verschillen in vaatdoorlaatbaarheid en schade te beoordelen met behulp van fluoresceïneangiografie. EAU kan worden geïnduceerd in andere muizenstammen - zowel wildtype als genetisch gemodificeerd - en gecombineerd met nieuwe therapieën die flexibiliteit bieden voor het bestuderen van de werkzaamheid van geneesmiddelen en / of ziektemechanismen.
Inleiding
Dit protocol zal aantonen hoe experimentele auto-immune uveïtis (EAU) in de C57BL/6J-muis kan worden geïnduceerd door een enkele subcutane injectie van een retinaal antigeen in een geëmulgeerd adjuvans. Methoden voor het monitoren en beoordelen van ziekteprogressie zullen worden gedetailleerd door middel van fundoscopische beeldvorming en histologisch onderzoek, met meetparameters die binnenin worden beschreven. Daarnaast zal fluoresceïneangiografie, een techniek voor het onderzoeken van de retinale bloedvatstructuur en permeabiliteit, worden besproken.
Dit EAU-model vat centrale kenmerken van niet-infectieuze posterieure uveïtis bij mensen....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de UK Animals (Scientific Procedures) Act van 1986 en de richtlijnen van het Institutional Animal Welfare and Ethical Review Body (AWERB).
1. Behuizing C57BL/6J muizen
- Huismuizen in een specifieke pathogeenvrije omgeving, op een 12 uur durende licht-donkercyclus en voedsel en water beschikbaar ad libitum.
- Voer alle experimenten uit op volwassen vrouwelijke C57BL/6J (vrouwen worden bij voorkeur gekozen omdat er een incidentie is van vrouwen op mannen 1,4 tot 1 bij uveïtispatiënten). Randomiseer vrouwelijke C57BL/6J muizen tussen 6-8 weken oud op gewicht e....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
In dit protocol beschrijven we een stapsgewijze methode voor het induceren van een model van experimentele auto-immune uveïtis (EAU) door muizen te immuniseren met een uveitogene retinale peptide afgeleid van IRBP. De beoordeling van ziekten waarbij gebruik wordt gemaakt van veelgebruikte en gemakkelijk toegankelijke benaderingen, wordt behandeld, hoewel deze niet exclusief zijn en kunnen worden toegevoegd aan of gedeeltelijk worden vervangen door andere beeldvormingstechnieken. De eerste tekenen van EAU bij C57BL/6J-mui.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Experimentele diermodellen zijn noodzakelijke hulpmiddelen voor het bestuderen van ziektepathogenese en preklinisch testen van nieuwe therapeutische paradigma's. In het huidige protocol hebben we een methodologie besproken voor het induceren, monitoren en scoren van EAU, een experimenteel model van intraoculaire inflammatoire uveïtis. Dit EAU-model heeft meer dan 95% ziekte-incidentie wanneer alle procedures worden uitgevoerd volgens het hierin beschreven protocol en resulteert in de ontwikkeling van chronische, monofasi.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben geen belangenconflicten te verklaren met dit werk.
Dankbetuigingen
JG kreeg een UCL Impact Studentship en Rosetrees Trust-financiering om CB te ondersteunen. VC ontving een onderzoekssubsidie van Akari Therapeutics Inc. We willen het UCL Institute of Ophthalmology, Biological Service Unit bedanken, in het bijzonder mevrouw Alison O'Hara en haar team voor hun technische ondersteuning.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| antisedan | ZOETIS, USA | voor het wakker worden | |
| Complete Freund’s Adjuvant; CFA | Sigma, UK | F5881 | voor immunisatie |
| Domitor | Orion Pharma, Finland | voor anesthesie | |
| Flourescein | Sigma, UK | F2456 | voor Angiografie |
| IRBP1-20 | Chamberidge peptide, UK | peptide; antigeen | |
| Ketamine | Orion Pharma, Finland | voor anesthesie | |
| Micron III | Phoenix Research, USA | voor fundoscopie | |
| Mouse Serum | Sigma, UK | M5905 | voor immunisatie |
| Mycobacterium terberculosis | Sigma, UK | 344289 | voor immunisatie |
| Pertussis Toxin | Sigma, UK | P2980 | voor immunisatie |
| phenylephrine hydrochloride 2.5% | Bausch & Lomb UK | PHEN25 | voor dilatatie |
| Tropicamide 1% | SANDOZ | voor dilatatie | |
| Viscotears | WELDRICKS Pharmacy, UK | 2082642 | voor oogbevochtiging |
Referenties
- Lyu, C., et al. TMP778, a selective inhibitor of RORgammat, suppresses experimental autoimmune uveitis development, but affects both Th17 and Th1 cell populations. The European Journal of Immunology. 48, 1810-1816 (2018).
- Klaska, I. P., Forrester, J. V.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
