Het huidige protocol beschrijft een moxibustie-toepassingsmethode voor muizen, met als voordelen het verminderen van de angst van muizen, het garanderen van hun welzijn en het verbeteren van de efficiëntie voor onderzoekers.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Moxibustiestrategieën voor muizen
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Het gebied van moxibustieonderzoek breidt zich uit, met een snelle toename van publicaties in de afgelopen jaren. Moxibustie is een therapie die moxa op de huid van mensen doet ontbranden, met een verhoging van de perifere huidtemperatuur en plaatselijke roodheid. Tijdens deze behandeling moet de ontvanger stil blijven zitten om brandwonden te voorkomen en interventieplaatsen bloot te stellen voor gemakkelijke manipulatie; Het handhaven van een vaste houding tijdens moxibustie is echter een grote uitdaging voor dieren. Het manipuleren van moxibustie bij kleine dieren, zoals muizen, kan dus tot verschillende problemen voor onderzoekers leiden. Bovendien kan een ongemakkelijke houding voor dieren leiden tot angst en weerstand tegen moxibustie, een verhoogd risico op verwondingen, verminderd dierenwelzijn en minder valide onderzoeksgegevens. Een efficiënte, comfortabele moxibustiemethode is nodig om het dierenwelzijn te beschermen en de nadelige effecten op de experimentele resultaten te minimaliseren. Moxibustiemethoden zijn echter zeer variabel en hebben vaak een beperkte werkzaamheid. Wat nog belangrijker is, is dat een ongemakkelijke moxibustiehouding een stressreactie kan veroorzaken, zoals die wordt waargenomen met angst, angst en woede, die de onderzoeksgegevens kunnen beïnvloeden. Daarom zijn strategieën voor moxibustie bij dieren vereist die tijdens de interventie zo min mogelijk schade toebrengen. Dit protocol introduceert een methode voor het aanbinden van muizen voor moxibustie-interventie, waardoor ongemak bij muizen wordt geminimaliseerd en de onderzoeksefficiëntie wordt verbeterd. Essentiële strategieën voor het vastbinden van muizen en de toepassing van moxibustie worden belicht en de structuur van het aanbindinstrument wordt beschreven.
Inleiding
Moxibustie is een uitwendige behandeling die wordt gebruikt in de traditionele Chinese geneeskunde1. Het wordt al eeuwenlang op grote schaal toegepast als middel om fit te blijven en ziekten te voorkomen en te genezen 2,3. Het mechanisme van moxibustie moet echter nog worden opgehelderd; Dit onderzoeksgebied is de afgelopen jaren dus uitgebreid naarmate onderzoekers de effecten en biologische mechanismen ervan onderzoeken.
Tijdens moxibustie moet de ontvanger stil blijven zitten om de beste resultaten te bereiken4. De behandeling met moxibustie duurt doorgaans 15-30 minuten 5,6. Hierdoor is manipulatie van moxibustie voor dieren, met name kleine dieren zoals muizen en ratten (gunstig voor gebruik in dierproeven), een grote uitdaging geworden voor onderzoekers. De meeste moxibustieapparaten zijn geschikt voor klinisch gebruik en kunnen niet worden gebruikt voor dieren, vooral niet voor kleine dieren zoals muizen 7,8,9. Daarnaast kunnen dieren, in tegenstelling tot mensen, nauwelijks bevelen opvolgen en een tijdje stabiel blijven. Een vaste en ongemakkelijke houding voor dieren kan leiden tot passieve emoties, waaronder angst, angst, woede, nervositeit en weerstand tegen behandeling, waardoor het risico op letsel toeneemt, het dierenwelzijn afneemt en resulteert in minder valide onderzoeksgegevens10. Om dit probleem op te lossen, zijn in eerdere studies anesthetica gedurende langere perioden toegepast tijdens dierproeven met externe traditionele Chinese geneeskundetherapieën, waaronder acupunctuur, moxibustie en massageonderzoek 11,12,13. Aangezien de fysieke omstandigheden echter veranderen door anesthesie, en in de meeste klinische gevallen moxibustie wordt toegediend aan mensen in bewuste toestanden, kan anesthesie de authenticiteit van onderzoeksgegevens beïnvloeden. Daarom wordt een methode om dieren bewust en comfortabel vast te binden een uitdaging. Om deze technische problemen op te lossen, zijn gespecialiseerde apparaten voor muismoxibustie geïntroduceerd. Dit protocol biedt een aanbindmethode die onderzoekers zal helpen bij het uitvoeren van moxibustiebehandeling op dieren, waardoor de dieren stabiel, bewust en comfortabel kunnen blijven.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle experimenten werden uitgevoerd volgens de National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals en werden goedgekeurd door de Chengdu University of TCM Institutional Animal Care and Use Committee. De verzorging en het onderhoud van de dieren in het laboratorium werden uitgevoerd volgens de referenties14,15. Voor de test werden volwassen mannelijke C57BL/6J-muizen met een gewicht van 20-25 g gebruikt. Alle muizen werden op een licht/donker-cyclus van 12 uur gehouden bij 24 °C en een luchtvochtigheid van 40%-50%, met vrije toegang tot voedsel en water. Het volgende protocol geeft een beeld van de moxibustieprocedures onder typische laboratoriumhuisvestingsomstandigheden.
1. Voorbereiding van de apparatuur
- Muis tethering
- Bereid een muisbevestigingsapparaat voor dat bestaat uit een verticale plaat, een verticale plaatbasis en beugels van hout.
- Construeer het vaste lichaam met behulp van een rechte houten spalk (lengte: 30 cm x breedte: 3 cm x hoogte: 3 cm) en bevestig de vaste klittenbandriem (die uit twee zijden bestaat: een haakzijde (4 cm x 3 cm) en een luszijde (10 cm x 3 cm)) om het muislichaam vast te binden met behoud van flexibiliteit (zie Materiaaltabel).
- Gebruik een lijmpistool om de haakzijde aan de rechterkant van de houten spalk te bevestigen en bevestig een 1/4 lengte van de luszijde aan de linkerkant.
- Plaats de muis op het vaste bed en gebruik de vaste klittenbandriem om de romp van de muis vast te maken.
NOTITIE: Zorg ervoor dat de bevestigingsriem niet strak genoeg zit om druk uit te oefenen op het hart, wat kan leiden tot de dood van de muis. Bind de muis losjes maar stevig vast. - Gebruik tape om de onderste/bovenste ledematen aan weerszijden van de houten spalk te bevestigen en bevestig de staart aan het oppervlak van de houten spalk.
- Bereid een muisbevestigingsapparaat voor dat bestaat uit een verticale plaat, een verticale plaatbasis en beugels van hout.
- Voorbereiding van het muizenrek
NOTITIE: Het rek bestaat uit een verticale houten plaat, een houten grondplaat en houten beugels. De beugel bestaat uit een L-vormig stuk RVS, dat ondersteuning biedt voor elk muisbed.- Bevestig de verticale plaat op de grondplaat en maak vierkante groeven in de grondplaat om houten stokken in te voegen die als schotten worden gebruikt (Figuur 1).
- Bereid een transparante, plastic hoofdbedekking voor als de muizen moxibustie boven het hoofd worden toegediend.
- Gebruik een spuit van 1000 ml en verwijder de naald en de kernstaaf. Gebruik een snijgereedschap of mes om de spuithuls doormidden te snijden.
- Kies een van beide kanten van de spuithuls, knip de kop en staart af en zet het middelste gedeelte opzij (lengte: 4 cm) als hoofdbedekking voor de muis.
- Boor met een boormachine een gat (1 cm) in het midden van de spuitmantel en plaats een moxa-stick in het gat. Plaats een hoofdbedekking over het hoofd van de muis om de beweging van het hoofd te beperken en hem te beschermen tegen de ontstoken moxa.
- Bevestig twee parallelle houten stroken (lengte: 7 cm x breed: 1 cm) en een horizontale dwarsbalk (lengte: 7,5 cm x breedte: 1 cm) aan het hoofdeinde van het muizenbed als muizen moxibustie op de voorpoten krijgen toegediend (Figuur 2).
OPMERKING: De ruimte tussen elke parallelle houten strook en het muisbed moet 1 cm zijn. Het aantal beugels en de hoogte van de verticale platen kunnen worden bepaald op basis van experimentele vereisten. Deze stappen moeten voorzichtig worden uitgevoerd om te voorkomen dat de muizen bang worden. Zorg ervoor dat u muizen 1 week voor het experiment adaptieve training geeft.
- Voorbereiding van de moxibustiestokhouder
- Bereid de moxibustiestokhouder voor die bestaat uit een magnetische metalen rechthoek (lengte: 30 cm), een beugelbasis (lengte: 5 cm x breedte: 5 cm x hoogte: 2 cm) en houten kubussen (lengte: 3 cm x breedte: 1,5 cm x hoogte: 1 cm), elk met een gat (diameter: 0,55 cm) in het midden waarin een moxa-stok kan worden geplaatst (zie materiaaltabel).
- Bevestig een platte, dunne magneet (lengte: 3 cm × breedte: 1,5 cm, dikte: 0,2 cm) aan één kant van elke kubus. De magnetische aantrekkingskracht tussen de kubussen met moxasticks en de houder maakt het mogelijk om de hoogte van de moxasticks aan te passen.
NOTITIE: Zorg ervoor dat de magnetische polen van de kubusmagneten zich tegenover de pool van de houdermagneet bevinden.
- Om het begin en einde van de moxibustieprocedure vast te leggen, plaatst u een timingapparaat (zie Materiaaltabel) in de buurt van het muistethering-apparaat waar het gemakkelijk kan worden gelezen.
- Gebruik een blote of dun gehandschoende hand bij het vasthouden en vastbinden van de muizen. Een dun gehandschoende hand is ook effectief tijdens een moxibustiebehandeling.
2. Moxibustieprocedure
- Trek de laboratoriumhandschoenen aan. Scheer vóór de moxibustiebehandeling de vacht via een muizenscheerapparaat op de moxibustieplaats om het acupunt bloot te leggen.
- Steek moxa-sticks (0.5 cm in diameter en 10 cm lang) in de moxibustiestokhouder (die bestaat uit de magnetische metalen rechthoek, beugelbasis en houten kubussen met gaten in het midden voor het inbrengen van moxa-sticks, en één stokhouder is geschikt voor slechts één moxa-stick, stap 1.3).
- Om de moxibustietemperatuur vast te stellen, bevestigt u een digitale thermodetector op het acupunt om de temperatuurvariatie te controleren.
- Start de timer en ontsteek de moxa-stick; Fixeer of controleer de afstand tussen de huid van het acupunt en het verlichte uiteinde van de moxa-stick, afhankelijk van de temperatuurvariatie die nodig is voor het experiment.
3. Gelijktijdige moxibustie van muizen
OPMERKING: Muizen kunnen als groep met moxibustie worden behandeld. Een muizenrek wordt gebruikt om de muizenbedden zo te positioneren dat een groep muizen tegelijkertijd kan worden behandeld.
- Plaats elk muisbed op het rek en steek een houten stok in de grondplaat om te voorkomen dat de muizen vallen (Figuur 3).
- Steek moxasticks (0.5 cm in diameter en 12 cm lang) in de houder van de moxibustiestick op niveaus die samenvallen met elk muisbed. Pas de afstand tussen het muizenrek en de stokhouder aan en ontsteek vervolgens de moxa-sticks.
OPMERKING: Hierdoor kunnen de muizen in een ontspannen, comfortabele toestand met moxibustie worden behandeld. Zorg er tijdens moxibustie voor dat de afstand tussen het muizenrek en de stokhouder voor alle muizen constant blijft. - Voer vóór het modelleren de muisreacties uit op de thermische onttrekkingsdrempel (TWL)-test om te bepalen of moxibustie effectief zou zijn bij analgesie.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Tabel 1 geeft een overzicht van de verschillende factoren die van invloed zijn op de reacties op moxibustie. Positieve resultaten van moxibustie bij muizen zijn aangegeven door meerdere metingen van het welzijn en de positieve effecten van muizen.
Vervolgens worden specifieke voorbeelden geschetst van resultaten die worden verkregen wanneer de moxibustietechniek wordt gecombineerd met volledige Freund's adjuvante (CFA)-geïnduceerde injectiepro...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De moxibustietechniek is effectief voor veel aandoeningen, zoals vermoeidheid, slapeloosheid, diarree en pijnsyndroom 20,21,22,23,24,25,26. Met de voordelen van moxibustiebehandeling voor vele ziekten, heeft het mechanisme van deze techniek de aandacht van o...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat ze niets te onthullen hebben.
Dankbetuigingen
Dit werk is ondersteund door subsidies van de National Natural Science Foundation of China (81704187, 8210152562), Sichuan Science and Technology Program (2019YJ0587, 2018JY0482, 2019YJ0329), Sichuan Academy of Medical Sciences en Sichuan People's Hospital Research Fund (2018ZX05), de Xinglin Scholars Research Foundation van Chengdu University of Traditional Chinese Medicine (QNXZ2019034).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Complete Freund's Adjuvant (CFA) | Sigma-Aldrich | SF588102 | |
| Lijmpistool | Deli Group Co., Ltd. | DL5041 | |
| Laboratoriumhandschoen | Boci Co., Ltd | 53625130323 | |
| Magneetrekthoek van metaal (dikte: 0,2 cm) | Sitoo Stationery Co., Ltd | 1007908729 | |
| Moxa-stok | Hanyi Airong fabriek | 5613 | |
| Stalen plaat | Rizhan metal materialen Co., Ltd | 1108 | |
| Spuit (1000 mL) | Xinmin Fuda Co., Ltd | 796341 | |
| Timer | Bevoza Co., Ltd | KT003 | |
| Velcro-riem | Minnesota Mining and Manufacturing Co., Ltd | 3MSJ3550 | |
| Houten kubus | Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd | 2581457A | |
| Houten spalk | Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd | 3410968M | |
| Houten stok | Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd | 2785476M | |
| Houten strook | Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd | 2374652S |
Referenties
- Ebrary, I. Guide for the care and use of laboratory animals. NIH Publication. 327 (3), 963-965 (2011).
- Wang, M., et al. Mechanism of traditional chinese medicine in treating knee osteoarthritis. Journal of Pain Research. 13, 1421-1429 (2020).
- Wang, T., Xu, C., Pan, K., Xiong, H. Acupuncture and moxibustion for chronic fatigue syndrome in traditional Chinese medicine: A systematic review and meta-analysis. BMC Complementary and Alternative Medicine. 17 (1), 163(2017).
- Zimmermann, M. Ethical guidelines for investigations of experimental pain in conscious animals. Pain. 16 (2), 109-110 (1983).
- Zhou, W., et al. Effect of moxibustion and acupuncture on gastric mucosal cell apoptosis and expression of NF-κB, Bcl-2 in chronic atrophic gastritis rats. Acupuncture Research. 46 (4), 284-288 (2021).
- Wang, Y., et al. βEffect of moxibustion on -EP and Dyn levels of pain-related indicators in patients with rheumatoid arthritis. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2021, 6637554(2021).
- Huang, P., et al. Design of moxibustion device for experimental rabbits. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 39 (09), 1024-1026 (2019).
- Li, M., Sun, Z. An automatic moxibustion box with temperature control. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 39 (06), 649-650 (2019).
- Luo, Z., Zhang, C., Zhou, M., Chen, C. Manufacture and clinical application of a medical warm moxibustion instrument. Shanghai J Acu-mox. 37 (05), 596-598 (2018).
- Liang, Y. L., Sun, Y. H., Sun, Y. H., Sun, L. H., Jiang, H. T. Design and use of rat box for moxibustion experiment. Acupuncture Research. 36 (03), 224(2011).
- Meng, J., Fu, W., Zhu, G., Song, L. Effect of acupuncture on coronary collateral circulation function in dogs with experimental myocardial infarction. Acupuncture Research. 3 (1), 196-197 (1986).
- Tan, D. Experimental study on the effect of moxibustion at Neiguan point on the content of serum free fatty acid (FFA) in rabbits with acute myocardial ischemia. Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine. 6, 44-45 (1991).
- Seo, B., et al. Skeletal muscle regeneration with robotic actuation-mediated clearance of neutrophils. Science Translational Medicine. 13 (614), (2021).
- Bielitzki, J. T., Barbee, R. W., Garber, J. Guide for the care and use of laboratory animals. NIH Publication No 85-23(rev). 327 (3), 963-965 (2011).
- National Research Council (US), Institute for Laboratory Animal Research. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. National Research Council (US), Institute for Laboratory Animal Research. , National Academies Press. Washington (DC). (1996).
- Zuo, C., et al. Ipsi- and contralateral moxibustion generate similar analgesic effect on inflammatory pain. Evidence-based complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2019, 1807287(2019).
- Poulaki, S., Rassouli, O., Liapakis, G., Gravanis, A., Venihaki, M. Analgesic and anti-inflammatory effects of the synthetic neurosteroid analogue BNN27 during CFA-induced hyperalgesia. Biomedicines. 9 (9), 1185(2021).
- Duan, L., et al. Metabolomics analysis on mice with depression ameliorated by acupoint catgut embedding. Frontiers in Psychiatry. 12, 703516(2021).
- Wang, J., et al. Protection against doxorubicin-induced cardiotoxicity through modulating iNOS/ARG 2 balance by electroacupuncture at PC6. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2021, 6628957(2021).
- Chen, Y., Gao, X., Sun, C. Pricking and penetrating moxibustion therapy in patients with refractory insomnia: A randomized and controlled clinical trial. Journal of Traditional Chinese Medicine. 38 (5), 754-762 (2018).
- Liu, C., et al. Effectiveness and safety of fire-needle moxibustion on insomnia: Protocol for a systematic review and meta-analysis. Medicine. 98 (7), 14509(2019).
- Han, K., et al. Moxibustion for treating cancer-related fatigue: A multicenter, assessor-blinded, randomized controlled clinical trial. Cancer Medicine. 10 (14), 4721-4733 (2021).
- Bao, C., et al. Effect of mild moxibustion on intestinal microbiota and NLRP6 inflammasome signaling in rats with post-inflammatory irritable bowel syndrome. World Journal of Gastroenterology. 25 (32), 4696-4714 (2019).
- Chen, F., et al. Efficacy and safety of moxibustion for chronic low back pain: A systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Complementary Therapies in Clinical Practice. 39, 101130(2020).
- Zhang, C., et al. The role of STIM1/ORAI1 channel in the analgesic effect of grain-sized moxibustion on inflammatory pain mice model. Life Sciences. 280, 119699(2021).
- Zhao, L., et al. Effectiveness of moxibustion treatment as adjunctive therapy in osteoarthritis of the knee: A randomized, double-blinded, placebo-controlled clinical trial. Arthritis Research & Therapy. 16 (3), 133(2014).
- Goldman, N., et al. Adenosine A1 receptors mediate local anti-nociceptive effects of acupuncture. Nature Neuroscience. 13 (7), 883-888 (2010).
- Torres-Rosas, R., et al. Dopamine mediates vagal modulation of the immune system by electroacupuncture. Nature Medicine. 20 (3), 291-295 (2014).
- Solovchuk, M., Deng, H., Sheu, T. Experimental and numerical study on the temperature elevation in tissue during moxibustion therapy. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine:eCAM. 2020, 7514302(2020).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
