Technische verfijning van een bilateraal renale ischemie-reperfusie muismodel voor onderzoek naar acuut nierletsel

Summary

Deze studie stelde een protocol op dat zich richt op de technische verfijning van een muismodel van bilaterale renale ischemie-reperfusie voor onderzoek naar acuut nierletsel.

Abstract

Een hartstilstand vormt een grote belasting voor de volksgezondheid. Acuut nierletsel (AKI) is een ongunstige marker bij overlevenden van een hartstilstand na de terugkeer van de spontane circulatie (ROSC) na succesvolle cardiopulmonale reanimatie. Omgekeerd is herstel van de nierfunctie van AKI een voorspeller van gunstige neurologische uitkomsten en ontslag uit het ziekenhuis. Een effectieve interventie om nierbeschadiging veroorzaakt door een hartstilstand na ROSC te voorkomen, ontbreekt echter, wat suggereert dat aanvullende therapeutische strategieën nodig zijn. Renale hypoperfusie en reperfusie zijn twee pathofysiologische mechanismen die AKI veroorzaken na een hartstilstand. Diermodellen van ischemie-reperfusie-geïnduceerde AKI (IR-AKI) van beide nieren zijn vergelijkbaar met patiënten met AKI na ROSC in een klinische setting. IR-AKI van beide nieren is echter technisch uitdagend om te analyseren, omdat het model wordt geassocieerd met een hoge mortaliteit en een grote variatie in nierschade, wat de analyse kan beïnvloeden. Er werd gekozen voor lichtgewicht muizen, die onder algemene anesthesie met isofluraan werden geplaatst, werden onderworpen aan een operatie met een dorsolaterale benadering en hun lichaamstemperatuur werd tijdens de operatie op peil gehouden, waardoor weefselbeschadiging werd verminderd en een reproduceerbaar acuut renaal IR-AKI-onderzoeksprotocol werd opgesteld.

Introduction

Hartstilstand komt meer dan 80.000 keer per jaar voor in de Verenigde Staten ^1,2. Het sterftecijfer van een hartstilstand is extreem hoog 3,4,5,6. AKI is een belangrijke risicofactor die in verband wordt gebracht met hoge mortaliteit en slechte neurologische uitkomsten bij patiënten met een hartstilstand na ROSC 7,8,9,10,11,12,13.

Protocol

Alle dierproeven werden uitgevoerd in overeenstemming met de Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, gepubliceerd door de Amerikaanse National Institutes of Health (NIH-publicatie nr. 85-23, herzien in 1996). Het onderzoeksprotocol is goedgekeurd door en in overeenstemming met de richtlijnen van de Institutional Animal Care and Use Committee van de Fu-Jen Catholic University. Zie de Materiaaltabel voor meer informatie over alle materialen en instrumenten die in dit protocol worden gebruikt.

1. Voorbereiding van de muizen

1. Selecteer 8 weken oude C57BL/6 mannelijke muizen met een g....

Results

De kwaliteit van de bilaterale renale IR-AKI-chirurgie moet worden beoordeeld voordat verdere microscopische of moleculaire analyse wordt uitgevoerd. Tijdens de operatie moet nierischemie worden bevestigd door te kijken of de nier van kleur is veranderd van roze naar donkerrood kort nadat de niersteel is vastgeklemd met een microvasculaire clip (Figuur 1). Na de operatie kan nierschade veroorzaakt door IR-AKI-chirurgie verder worden gevalideerd met een paar microliter serum door middel van s.......

Discussion

Het voorgestelde bilaterale IR-AKI-protocol is geschikt voor het onderzoeken van het mechanisme van hypoperfusie en reperfusieschade van beide nieren. Het protocol suggereert dat lichtgewicht muizen, algemene anesthesie met isofluraan, een dorsolaterale benadering van de operatie en het handhaven van de lichaamstemperatuur tijdens de operatie de bijbehorende technische problemen verminderen, de duur van de operatie verkorten en de consistentie van de procedure voor acuut bilateraal renaal IR-AKI-onderzoek vergroten.

.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Absorbable Suture, 6-0	Ethicon	J510G-BX
Betadine solution	Shineteh Istrument
Carprofen	Sigma	PHR1452
Cotton balls	Shineteh Istrument
Graefe Forceps	Fine Science Tools	11051-10
Heating pad	Shineteh Istrument
Isoflurane	Piramal Critical Care Inc.	26675-46-7
Moria Vessel Clamp	Fine Science Tools	18320-11
Olsen-Hegar needle holder	Fine Science Tools	12002 - 12
Saline	Shineteh Istrument
Scalpel blades	Shinva	s2646
Small Animal Anesthesia Machine	Sheng-Cing Instruments Co.	STEP AS-01
Tissue scissors	Fine Science Tools	14072 - 10