Het huidige protocol ontwikkelde een methode om de opbrengst van verbindingen op de TLC-plaat te schatten met behulp van de blauw-LED-verlichtingstechniek. De voordelen van deze aanpak zijn dat het veilig, effectief en goedkoop is en de onderzoeker in staat stelt om meerdere monsters tegelijkertijd te meten.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Schatting van de opbrengst van verbindingen op de TLC-plaat via de Blue-LED-verlichtingstechniek
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Thin-layer chromatography (TLC) is een toegankelijke analytische techniek die op grote schaal is gebruikt in organisch chemisch onderzoek om de opbrengst van onbekende monsters te kwantificeren. De huidige studie ontwikkelde een effectieve, goedkope en veilige methode om de opbrengst van monsters op een TLC-plaat te schatten met behulp van de blauwe LED-verlichting. Lovastatine geëxtraheerd uit Aspergillus terreus was de voorbeeldverbinding die in deze studie werd gebruikt. Regressiemodellen op basis van de lovastatinestandaard werden gebruikt om de opbrengst van lovastatine te evalueren. Drie methoden werden vergeleken: bioassay, UV-detectie en blue-LED-verlichting. Het resultaat toonde aan dat de blauwe LED-verlichtingsmethode aanzienlijk tijdsefficiënter is dan UV-detectie- en bioassaymethoden. Bovendien was de blauwe LED-verlichting een relatief veilige optie vanwege de bezorgdheid over biologische gevaren in de bioassay-methode (bijv. Microbiële infectie) en ultraviolette blootstelling in de UV-detectiemethode. Vergeleken met de dure methoden die gespecialiseerde instrumenten en langdurige training vereisen voordat zelfstandig wordt gewerkt, zoals GC, HPLC en HPTLC, was het gebruik van de blauwe LED-verlichting een economische optie om de opbrengst van monsters van een TLC-plaat te schatten.
Inleiding
Dunnelaagchromatografie (TLC) wordt veel gebruikt als kwalitatieve en kwantitatieve techniek op het gebied van organische chemie 1,2,3. De belangrijkste voordelen van TLC zijn dat het snelle detectie, flexibele monstervereisten biedt en geen gespecialiseerde apparatuur vereist4. Tot op heden is TLC, hoewel er veel geavanceerde benaderingen zijn vastgesteld, nog steeds de belangrijkste methode voor het identificeren van onbekende monsters in een mengsel. De uitdaging van deze aanpak is echter het gebrek aan veilige en goedkope apparatuur voor het kwanti....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Het huidige protocol wordt beschreven met lovastatine als voorbeeld. Lovastatine werd geëxtraheerd uit een week oude Aspergillus terreus.
1. Samengestelde extractie
OPMERKING: Voor meer informatie over de extractie van verbindingen, zie figuur 1.
- Kweek Aspergillus terreus op het medium aardappel dextrose agar (PDA, zie Materiaaltabel) bij 30 °C.
- Droog de cultuur bij 40 °C gedurende 24 uur. Breng de gedroogde cultuur over in een buis van 50 ml met behulp van een gesteriliseerd pincet en voeg 15 ml ethylacetaat toe....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Deze studie presenteerde de blue-LED-verlichtingsmethode om de opbrengst van verbindingen te schatten, en deze methode werd gevalideerd en vergeleken met bioassay en UV-gedetecteerde methoden (tabel 1). De regressiemodellen werden ontwikkeld op basis van de afmetingen van banden en de concentratie van normen voor respectievelijk drie methoden om de opbrengst van monsters te voorspellen. Ten eerste was in de resultaten van de bioassaymethode het R-kwadraat tussen de afmetingen van de remmingszone en lovas.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De huidige studie beschreef een nieuwe benadering, de blue-LED illuminator, om verbindingen te kwantificeren zonder dure en gespecialiseerde apparatuur te gebruiken, zoals HPTLC, HPLC en GC-methode, en de methode werd vergeleken met de bioassay en UV-gedetecteerde methoden om kwantificeringsprestaties te evalueren. Als gevolg hiervan werd geconcludeerd dat de blue-LED-verlichtingsmethode een relatief veilig en effectief protocol is dat wordt gebruikt om de opbrengst van gerichte verbindingen op de TLC-plaat te kwantifice.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
Alle auteurs verklaren dat ze geen belangenconflicten hebben.
Dankbetuigingen
Deze studie werd ondersteund door het Ministerie van Wetenschap en Technologie, Taiwan (MOST 108-2320-B-110-007-MY3).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| American bacteriological Agar | Condalab | 1802.00 | |
| Aspergillus terreus | ATCC 20542 | ||
| Blue-LED illuminator | MICROTEK | Bio-1000F | |
| Centrifuge | Thermo Scientific | HERAEUS Megafuge 8 | |
| Compact UV lamp | UVP | UVGL-25 | |
| Ethyl Acetate | MACRON | MA-H078-10 | |
| Filter Paper 125mm | ADVANTEC | 60311102 | |
| ImageJ | NIH | Freeware | https://imagej.nih.gov/ij/download.html |
| Lovastatin standard | ACROS | A0404262 | |
| MiBio Fluo | MICROTEK | V1.04 | |
| n-Hexane | C-ECHO | HH3102-000000-72EC | |
| OriginPro | OriginLab | 9.1 | https://www.originlab.com/origin |
| Potato dextrose broth H | STBIO MEDIA | 110533 | |
| Rotary evaporator | EYELA | SB-1000 | |
| Sulfuric acid | Fluka | 30743-2.5L-GL | |
| TLC silica gel 60 F254 | MERCK | 1.05554.0001 | |
| Trifluoroacetic acid | Alfa Aesar | 10229873 | |
| Ultrasonic vibration machine | DELTA | DC600 |
Referenties
- Pyka, A. Detection progress of selected drugs in TLC. BioMed Research International. 2014, 732078(2014).
- Hess, A. V. I. Digitally enhanced thin-layer chromatography: An inexpensive, new technique for qualitative and qua....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
