Dit artikel beschrijft een nieuwe methode om het ledigingsgedrag van muizen te bestuderen door videobewaking op te nemen in de conventionele void spot-assay. Deze benadering biedt tijdelijke, ruimtelijke en volumetrische informatie over de ledigingsgebeurtenissen en details van muisgedrag tijdens de lichte en donkere fasen van de dag.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Normaal ledigingsgedrag is het resultaat van de gecoördineerde functie van de blaas, de urethra en de urethrale sluitspieren onder de juiste controle van het zenuwstelsel. Om vrijwillig ledigingsgedrag in muismodellen te bestuderen, hebben onderzoekers de void spot assay (VSA) ontwikkeld, een methode die het aantal en de oppervlakte van urinevlekken meet die zijn afgezet op een filterpapier dat de vloer van de kooi van een dier bekleedt. Hoewel technisch eenvoudig en goedkoop, heeft deze test beperkingen wanneer deze wordt gebruikt als een eindpunttest, waaronder een gebrek aan tijdelijke oplossing van ledigingsgebeurtenissen en problemen met het kwantificeren van overlappende urinevlekken. Om deze beperkingen te overwinnen, hebben we een video-bewaakte VSA ontwikkeld, die we real-time VSA (RT-VSA) noemen, en waarmee we de ledigingsfrequentie kunnen bepalen, het lege volume en de ledigingspatronen kunnen beoordelen en metingen kunnen doen over 6 uur tijdvensters tijdens zowel de donkere als de lichte fase van de dag. De methode die in dit rapport wordt beschreven, kan worden toegepast op een breed scala aan op muizen gebaseerde studies die de fysiologische en neurobehaviorale aspecten van vrijwillige mictie in gezondheids- en ziektetoestanden onderzoeken.
Inleiding
Urineopslag en mictie worden gecoördineerd door een centraal circuit (centraal zenuwstelsel) dat informatie ontvangt over de blaasvulstatus via de bekken- en hypogastrische zenuwen. Het urothelium, het epitheel dat de urinewegen van het nierbekken naar de proximale urethra bekleedt, vormt een strakke barrière voor de metabole afvalproducten en pathogenen die in de urine aanwezig zijn. Het is een integraal onderdeel van een sensorisch web, dat de vultoestand van de blaas detecteert en communiceert naar onderliggende weefsels en afferente zenuwen 1,2. Verstoring van de urotheliale barrière, of veranderingen in u....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Urotheliale piëzo1 /2 dubbele knock-out muizen (Pz1/2-KO, genotype: Piezo1 fl/fl; Piëzo2 fl/fl; Upk2CRE+/-) en controles (Pz1/2-C, genotype: Piezo1 fl/fl; Piëzo2 fl/fl; Upk2CRE-/-) werden intern gegenereerd uit ouderstammen verkregen uit de Jax-laboratoria (Piezo1 fl/fl stam # 029213; Piezo2 fl/fl soort # 027720; Upk2CRE+/- stam # 029281). Zowel vrouwelijke (1,5-3 maanden oud en 17-20 g in gewicht) als mannelijke (2-4 maanden oud en 23-29 g in gewicht) muizen werden gebruikt in de experimenten. Voor cyclofosfamide-geï....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Ledigingsgedrag van urotheliale piëzo1/2 knock-out muizen
Tijdens de opslagfase van de mictiecyclus wordt verondersteld dat het urotheel de spanning waarneemt die wordt uitgeoefend door de urine die zich in de blaas heeft opgehoopt en om deze mechanische stimulus om te zetten in cellulaire reacties zoals serosale ATP-afgifte 1,3. We hebben eerder aangetoond dat mechanisch geactiveerde PIEZO1- en PIEZO2-kanalen.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De integratie van videobewaking is een kosteneffectieve wijziging die verschillende voordelen biedt ten opzichte van de klassieke VSA. In de klassieke VSA, die meestal wordt gebruikt als eindpunttest, is het moeilijk om overlappende leegteplekken te onderscheiden. Dit is geen triviale zorg, omdat muizen de neiging hebben om meerdere keren in hetzelfde gebied te plassen wanneer de test enkele uren wordt verlengd, meestal in de hoeken van hun kooi. Het eerste voordeel van RT-VSA is dus dat de onderzoeker gemakkelijk indivi.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Dit werk werd ondersteund door een NIH-subsidie R01DK119183 (aan G.A. en M.D.C.), een proefprojectprijs via P30DK079307 (aan M.G.D.), een American Urology Association Career Development award en een Winters Foundation-beurs (aan N.M.), en door de Cell Physiology and Model Organisms Kidney Imaging Cores van het Pittsburgh Center for Kidney Research (P30DK079307).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots – cut to 10 inches | 80/20 | 1010 | Aantal: 20 |
| 1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots – cut to 12 inches | 80/20 | 1010 | Aantal: 6 |
| 1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots – cut to 40 inches | 80/20 | 1010 | Aantal: 4 |
| 1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots – cut to 14.75 inches | 80/20 | 1010 | Aantal: 12 |
| 1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots – cut to 32 inches | 80/20 | 1010 | Aantal: 5 |
| 1/4-20 Double Slide-in Economy T-Nut | 80/20 | 3280 | Aantal: 16 |
| 1/4-20 Triple Slide-in Economy T-Nut | 80/20 | 3287 | Aantal: 18 |
| 10 & 25 Series 2 Hole - 18mm Slotted Inside Corner Bracket with Dual Support | 80/20 | 14061 | Aantal: 6 |
| 10 Series 3 Hole - Straight Flat Plate | 80/20 | 4118 | Aantal: 8 |
| 10 Series 5 Hole - "L" Flat Plate | 80/20 | 4081 | Aantal: 8 |
| 10 Series 5 Hole - "T" Flat Plate | 80/20 | 4080 | Aantal: 8 |
| 10 Series 5 Hole - Tee Flat Plate | 80/20 | 4140 | Aantal: 2 |
| 10 Series Standard Lift-Off Hinge - Right Hand Assembly | 80/20 | 2064 | Aantal: 2 |
| 10 to 15 Series 2 Hole - Lite Transition Inside Corner Bracket | 80/20 | 4509 | Aantal: 6 |
| 24”-long UV tube lights | ADJ Products LLC | T8-F20BLB24 | Aantal: 2 20W bulb – 24” Wavelength: 365nm |
| Acrylic Mirror Sheet | Profesional Plastics | Aantal: 1 82.5 cm x 26.5 cm | |
| Acrylic Mirror Sheet | Profesional Plastics | Aantal: 2 26.5 cm X 30.5 cm | |
| Acrylic Mirror Sheet | Profesional Plastics | Aantal: 2 82.5 cm x 30.5 cm | |
| AR polycarbonate (UV resistance) | 80/20 | 65-2641 | Aantal: 2 4.5mm Thick, Clear, 38.5 cm x 26.5 cm |
| AR polycarbonate (UV resistance) | 80/20 | 65-2641 | Aantal: 4 4.5mm Thick, Clear, 38.5 cm x 21.5 cm |
| AR polycarbonate (UV resistance) | 80/20 | 65-2641 | Aantal: 4 4.5mm Thick, Clear, 26.5 cm x 21.5 cm |
| AR polycarbonate (UV resistance) | 80/20 | 65-2641 | Aantal: 4 4.5mm Thick, Clear 37.5 cm x 23.9 cm |
| AR polycarbonate (UV resistance) | 80/20 | 65-2641 | Aantal: 4 4.5mm Thick, Clear, 24.4 cm x 23.9 cm |
| Chromatography paper (thin paper) | Thermo Fisher Scientific | 57144 | |
| Cosmos blotting paper (thick paper) | Blick Art Materials | 10422-1005 | |
| Excel | Microsoft Corporation | ||
| GraphPad Prism | GraphPad Software | Version 9.4.0 | graphing and statistics software |
| ImageJ FIJI | NIH | ||
| Parafilm | Merck | transparent film | |
| Quick Time Player 10.5 software | Apple | multimedia player | |
| Security spy | Ben software | video surveillance software system | |
| Standard End Fastener, 1/4-20 | 80/20 | 3381 | Aantal: 80 |
| UV transmitting acrylic | Spartech | Polycast Solacryl SUVT | Aantal: 2 38.5 cm x 26.5 cm |
| Water gel: HydroGel | ClearH2O | 70-01-5022 | (https://www.clearh2o.com/product/hydrogel/) |
| Webcam | Logitech | C930e | Aantal: 4 |
Referenties
- Dalghi, M. G., Montalbetti, N., Carattino, M. D., Apodaca, G. The urothelium: life in a liquid environment. Physiological Reviews. 100 (4), 1621(2020).
- de Groat, W. C., Griffiths, D., Yoshimura, N. Neural control of the lower urinary tract. Comprehensive Physiology. 5 (1), 327(2....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
